T淋巴细胞亚群及细胞因子检测在结核病诊治中的应用

薛祖洪,刘灿均,周明先,陶 岚

(江苏省靖江市人民医院,江苏靖江,214500)

结核病(Tuberculosis,TB)已成为威胁全球公共健康的传染病之一。近年来,结核病的发病率呈上升趋势。然而,人类感染结核分枝菌后,仅有少数人发病,其中部分发病者呈隐性感染且能自愈[1],表明机体存在着有效的抗结核保护性免疫反应,这种反应主要是细胞免疫反应。为此,我们检测了62例结核病患者外周血T淋巴细胞亚群和血清相关细胞因子水平,旨在探讨其与结核病发病、发展、诊治及转归之间的关系。

1 临床资料

活动性结核组:选自我院门诊或住院的结核病患者62例(男 35例,女27例)年龄16～65岁,平均38.5岁,其中原发性肺结核3例,血行播散性肺结核12例,继发性肺结核33例,结核性胸膜炎9例,肺外结核5例。患者根据2008年卫生部发布的《中华人民共和国卫生行业标准》进行分类。所有肺结核患者均痰菌涂阳或结核分枝菌培养阳性;结核性胸膜炎和肺外结核依据患者病史,临床症状及辅助检查等综合进行判断。

结核病康复组:上述结核病患者经标准抗结核化疗一年后,随访到38例病人,根据胸片吸收好转、痰菌阴转、症状改善、血沉正常等确定为治疗康复者。

健康对照组 选自来我院健康体检者25例(男13例,女 12例)年龄 18～ 63岁,平均 36.0岁,入选者肝功能、肾功能、胸片等所有检查结果均正常,且近期无结核病接触史。

方法:所有入选者空腹采静脉血4 mL,分成二管,其中一管用肝素抗凝,用流式细胞术分别检测结核病患者活动期和康复期及健康者外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞(Treg)比例;另一管及时分离血清,贮存-80℃低温冰箱,用ELISA法集中检测血清中干扰素-γ(IFN-γ)、可溶性白细胞介素 2受体(sIL-2R)、白细胞介素4(IL-4)水平,试剂盒购自法国DIACLONE公司,用BIO-RAD 550型酶标仪测定,并与25例健康人作比较。

1.3 统计学处理

2 结 果

结核病患者活动期和康复期外周血T淋巴细胞亚群检测结果见表1;结核病患者活动期和康复期血清相关细胞因子检测结果见表2。

表1 结核病患者活动期和康复期外周血T淋巴细胞亚群检测结果(±s)

表1 结核病患者活动期和康复期外周血T淋巴细胞亚群检测结果(±s)

注:与健康对照组比较,＊P>0.05;与健康对照组比较,△P<0.01;与健康对照组比较,△△P<0.05。

组别 例数 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+CD25+Foxp3+(%)活动性结核组 62 71.9±9.2＊ 36.5±10.6△△ 34.8±9.5△△ 2.63±1.52△结核病康复组 38 73.2±6.8＊ 38.9±9.2＊ 32.5±8.6＊ 2.16±1.33＊健康对照组 25 74.2±5.5 42.2±8.3＊ 29.7±6.1 1.71±0.68

表2 结核病患者活动期和康复期血清细胞因子检测结果(±s)

表2 结核病患者活动期和康复期血清细胞因子检测结果(±s)

注:与健康对照组比较,＊P>0.05;与健康对照组比较,△P<0.01;与健康对照组比较,△△P<0.05。

组别 例数 IFN-γ(ng/L) sIL-2R(U/mL) IL-4(ng/L)活动性结核组 62 10.12±4.95△△ 231±121△△ 1.36±1.02△结核病康复组 38 11.21±5.25＊ 259±95＊ 0.96±0.65＊健康对照组 25 12.66±3.98 296±89 0.75±0.46

3 讨 论

结核分枝杆菌是一种胞内寄生菌,结核病是结核分枝杆菌在体内的一个慢性、持续的刺激过程,使机体表现为一种持续性的免疫应答。机体在抵抗结核分枝杆菌感染的过程中,细胞免疫应答发挥着重要作用,决定细胞免疫强弱的主要因素是血液中T淋巴细胞亚群比例及相关细胞因子的作用。Treg细胞是CD4+T细胞的亚群,许多研究表明,T reg细胞在预防自身免疫病方面起着重要作用并与多种肿瘤及慢性感染性疾病的免疫抑制有关[2-5]。本研究结果显示,与健康对照组相比较,结核病患者在活动期外周血CD3+细胞比例无显著差异(P>0.05);CD4+细胞比例显著下降(P<0.05);CD8+细胞比例显著增加(P<0.05);CD4+/CD8+比值显著下降;CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞比例显著增加(P<0.01);结核病患者康复期外周血淋巴细胞亚群比例与健康对照组无明显差异。表明Treg细胞可能参与结核分枝杆菌感染后的免疫调节和免疫监视过程,并与结核病的发生、发展和活动有关。而外周血中 CD4+比例下降、CD8+比例升高、CD4+/CD8+比值下降可能是由于Treg细胞导致机体细胞免疫功能下降并紊乱,进而导致结核分枝菌在体内的慢性持续感染。经过抗结核化疗后,如T淋巴细胞亚群比例恢复正常,则该患者康复快,预后好,而部分病例治疗后,T淋巴细胞亚群比例不能恢复正常,则病程长,预后差,且有反复发作的可能。

本研究还对结核病患者相关细胞因子进行了测定,结果显示,结核病患者在活动期IFN-γ、sIL-2R水平显著下降,IL-4水平显著上升,康复期基本恢复正常。有学者对活动性结核病人血浆中几种标志物研究发现,未治疗的肺结核病人Th1活性下降,Th2活性升高,而经抗结核治疗后Th1活性升高,Th2活性下降[6],IFN-γ是一个由Th1细胞分泌的重要免疫调节因子,不仅具有直接抗病毒和抗细菌的活性,而且能调节免疫系统其它细胞的反应,IFN-γ还能激活巨噬细胞,增加它们对结核分枝菌的杀菌能力,在局部抗结核感染的防御机制中起重要作用[7]。结核菌进入巨噬细胞后,巨噬细胞产生IL-12和IL-18等细胞因子,促使Th0细胞转化为 Th1细胞,产生IFN-γ和IL-2从而介导细胞免疫反应。sIL-2R在人类免疫应答和免疫调节中也起重要作用,sIL-2R由正常淋巴细胞通过刺激产生。本研究显示,结核病患者活动期血清IFN-γ、sIL-2R水平比健康对照组显著下降,治疗康复后血清浓度趋于正常。表明结核病患者发病期可能存在IFN-γ分泌减少,IL-2分泌缺陷及IL-2受体表达缺陷。结核菌进入机体后,自然杀伤或肥大细胞可产生IL-4,并促进 Th0细胞转化为Th2细胞,产生 IL-4等细胞因子,诱导B细胞增殖分化,从而介导体液免疫反应。Th2细胞的增高可下调Th1反应,抑制IFN-γ产生。因此不利于结核感染控制。

[1] Anon.Global tuberculosis control[M].Geneva:WHO Report,2001:181.

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[7] Aoe K.Hiraki A,Murakami T,et al.Diagnostic signtificance of interferon-γtuberculou pleural effusions[J].chest,2003,133(3):740.