慢性乙肝患者外周血CD4+T细胞蛋白表达及ACTA、TNF-α水平变化的临床诊断意义

郭永全

(重庆市荣昌县人民医院,重庆荣昌,402460)

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的免疫相关性疾病,目前其确切发病机制不清。现代研究表明,HBV感染机体后并不直接对肝细胞造成损伤,是通过诱发机体免疫效应间接损伤肝细胞,同时乙肝病毒得以清除。这种免疫反应主要是通过CD4+T细胞的FasL和Bcl-2蛋白表达变化得以实现[1-2]。另外,慢性肝病绝大多数都有肝纤维化,其中25%～40%最终发展为肝硬化及肝癌,早期诊断及逆转肝纤维化已成为慢性肝病防治研究中的一个重要课题[3-4]。本研究对128例慢性乙肝患者进行肝组织活检、检测其CD4+T细胞的FasL和Bcl-2蛋白表达变化,血清ACTA、TNF-α含量,分析其与肝纤维化的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

128例慢性乙型肝炎均为本院附属医院2004年1月～2009年12月间收治的患者(乙型肝炎组),平均年龄43.6(21～64)岁,其中男72例,女56例。根据诊断均符合2000年西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准。慢性乙肝轻度41例,中度39例,重度 28例,乙肝肝硬化 20例。正常对照组35例,为我院体检中心健康体检者。

1.2 方法

所有样本为清晨空腹采血5 mL,分成2管,其中1管肝素抗凝,以淋巴细胞分离液分离得淋巴细胞,溶血素溶解细胞,经T细胞分离富聚柱得纯化的T细胞,然后用PBS洗涤并调整至1×106个/mL,分别加入FasLFITC/CD4-PE和Bcl-2-FITC/CD4-PE两组单抗。另一管37℃水浴30 min,3 000 r/min离心10 min,吸取血清置-70℃冻存备检。采用 ELISA法测定血清ACTA、TNF-α含量,试剂由美国Genzyme公司提供。肝组织病理选用美国Temno活检针单操作法取肝组织送病检,肝组织标本采用HE染色。

2 结 果

2.1 慢性乙肝患者CD4+T细胞蛋白表达情况及血清ACTA、TNF-α水平

FasL是表达于活化免疫细胞的膜分子,它与相应受体结合,通过Fas-FasL信号途径可介导细胞凋亡[5],而Bcl-2是体内重要的抗凋亡蛋白分子,能阻断凋亡信号传递的最后通路而抑制凋亡[6]。由表1可见,各期慢性乙型肝炎CD4+T细胞FasL与健康对照组相比差异有显著性(P<0.05),而慢性乙型肝炎患者CD4+T细胞Bcl-2表达与健康对照组差异不具显著性(P>0.05)。各组慢性乙肝患者血清ACTA、TNF-α含量在慢性乙肝轻度组即明显升高,并随着慢性乙肝的发展而呈逐渐增高趋势,在慢性乙肝重度及肝硬化组达最高水平,各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。

表1 慢性乙肝患者CD4+T细胞蛋白表达情况及血清ACTA、TNF-α水平(±s)

表1 慢性乙肝患者CD4+T细胞蛋白表达情况及血清ACTA、TNF-α水平(±s)

与对照组比较,＊P<0.05,＊＊P<0.01。

组别 例数 FasL(%) Bcl-2(%) ACTA(mg/L) TNF-α(pg/mL)正常对照组 35 24.3±8.4 35.9±9.8 0.62±0.19 6.79±2.11乙型肝炎组 128轻度 41 31.5±10.6＊ 33.6±7.3 1.31±0.37＊ 11.38±1.57＊中度 39 34.7±13.1＊ 32.7±8.3 3.74±0.97＊ 81.49±7.64＊＊重度 28 39.4±13.8＊＊ 31.5±7.9 5.89±1.17＊＊ 104.73±10.58＊＊肝硬化 20 46.3±12.7＊＊ 28.1±8.3 9.78±2.16＊＊ 186.51±24.76＊＊

2.2 肝组织病理分期与CD4+T细胞蛋白表达及血清ACTA、TNF-α含量的关系

肝组织病理纤维化分期与CD4+T细胞蛋白表达及血清ACTA、TNF-α含量的关系见表2。各期慢性乙型肝炎CD4+T细胞FasL和Bcl-2表达与SI比较不是很明显,仅见S4期(P<0.05)。血清ACTA、TNF-α含量从S1到 S4有不同程度升高,其含量在S4达到最高水平,差异有显著统计学意义(P<0.01)。

表2 肝组织病理分期与CD4+T细胞蛋白表达及血清ACTA、TNF-α含量的关系(±s)

表2 肝组织病理分期与CD4+T细胞蛋白表达及血清ACTA、TNF-α含量的关系(±s)

与 S1期比较,＊P<0.05,＊＊P<0.01。

分期 例数 FasL(%) Bcl-2(%) ACTA(mg/L) TNF-α(pg/mL)S1 27 32.4±10.8 35.7±6.9 1.24±0.47 12.58±1.49 S2 35 34.9±12.7 34.3±7.3 3.58±0.79＊ 82.84±8.18＊S3 41 38.6±14.9 32.6±7.6 6.13±1.07＊ 119.65±10.78＊＊S4 25 45.3±12.4＊ 28.1±8.3＊ 9.62±2.16＊＊ 174.55±23.46＊＊

3 讨 论

慢性乙型肝炎是临床常见病,目前认为其与宿主机体免疫状态特别是细胞免疫功能失调密切相关[7]。现有研究表明,慢性乙肝患者外周血CD4+T细胞绝对数和相对数(CD4+/CD8+)都明显降低[8]。这意味着慢性乙肝患者细胞免疫缺陷,而CD4+T数量和质量的异常是导致免疫缺陷的原因之一,它在慢性乙型肝炎进展中起重要的作用。本研究结果显示慢性乙肝患者CD4+T细胞表面FasL的表达与健康人群组存在显著性差异(P<0.05),尤其是重度乙肝患者和肝硬化患者,其阳性率达46.3%,而健康人群的阳性率为24.3%,差异非常显著(P<0.01)。其表达情况呈有急性肝炎、慢性肝炎轻度、慢性肝炎中度、慢性肝炎重度、肝硬化的趋势;而Bcl-2在慢性乙肝患者与健康人群表达差异不是很显著。根据FasL主要表达于活化细胞表面和CD4+T细胞的生理功能,外周血CD4+T细胞表面FasL表达量和细胞数量联合检测可能有如下几点临床意义:①细胞数量正常,FasL表达量上升表明机体针对乙肝病毒免疫力增强,病情较轻。②细胞数量下降而FasL表达量增加,表明机体免疫系统在对乙肝病毒实行细胞免疫同时,引起自身凋亡,导致效应细胞数量减少。③细胞数量和FasL表达量均下降,说明效应细胞数减少且细胞免疫功能低下,病情有可能恶化[3]。本研究结果表明,其FasL表达随病症的严重程度呈增高趋势,故显示机体免疫系统正在进行免疫调节。

ACTA 属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族,是由2个亚单位(βAβB)组成的二聚体糖蛋白,根据亚单位组成的不同分为 ACTA(βAβA)、ACTB(βBβB)、ACTAB(βAβB), 其中以 ACTA 最为重要[9]。近年来研究表明,ACTA在慢性肝炎、肝纤维化及肝功能衰竭等疾病发生发展过程中均有ACT A异常表达,ACT A具有抑制肝细胞生长、诱导其发生调亡,同时促进HSC分泌胶原等作用[10]。肝纤维化、肝硬变时ACTA表达增高,ACTA可能通过抑制肝实质细胞增生,促进间质细胞分泌ECM而参与肝纤维化、肝硬化的形成。本研究同时比较肝组织在不同肝纤维化分期血清ACTA 、TNF-α含量,结果显示 :血清 ACTA 、TNF-α水平随肝组织纤维化程度加重而升高,在S4处于最高水平,说明ACTA、TNF-α水平与肝纤维化程度相关,这恰好与多数文献报道相一致[11-13]。TNF-α最早被认为是单核巨噬细胞产生的炎性细胞因子,因与肿瘤患者消瘦密切有关,以前曾被作为恶液质(cachexia)因子,TNF-α通过其胞膜受体TNF-α RⅠ和TNF-α RⅡ发挥其生物学效应。既往大量临床和实验研究表明,肝炎等肝脏疾病患者肝内有大量TNF-α产生并参与肝损伤的病理发生发展,与肝炎和肝硬化及肝癌发生发展密切相关[11]。

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