Survivin及Livin在中耳胆脂瘤组织中的表达及相关性研究

伍干元 李建军 李龙平

Survivin及Livin在中耳胆脂瘤组织中的表达及相关性研究

伍干元 李建军 李龙平

目的 探讨Survivin及Livin在中耳胆脂瘤组织中的表达及相关性。方法 采用PV-9000二步法免疫组化法检测60例胆脂瘤中耳炎患者(实验组)和20例正常人(对照组)外耳道骨部皮肤组织中凋亡抑制蛋白Survivin和Livin的表达。结果 实验组组织中Survivin和Livin蛋白表达的阳性率分别为26.7%和16.7%,明显低于对照组的65.0%和55.0%,差异有统计学意义,P＜0.01(χ2=9.538, 11.386)。胆脂瘤组织中survivin与livin蛋白(γ=0.614,P＜0.01)的表达呈显著正相关。结论 胆脂瘤组织中Survivin与livin蛋白的表达明显下调,可能在胆脂瘤的发生、发展中起协同作用。

中耳胆脂瘤;Survivin;Livin

中耳胆脂瘤是耳科常见病,可导致一系列严重颅内外并发症,严重威胁患者的生命。目前中耳胆脂瘤的发病机制尚未完全阐明,且临床尚无有效的药物疗法,必须实施手术才能根治。因此,有关中耳胆脂瘤的研究倍受国内外学者的重视。有学者认为,胆脂瘤上皮细胞凋亡受抑在中耳胆脂瘤的发生和发展中可能起重要作用[1]。作者采用免疫组化法检测胆脂瘤上皮细胞中凋亡抑制蛋白Survivin和Livin的表达及相关性,旨在探讨两者在中耳胆脂瘤发病过程中的作用机制,为有效治疗中耳胆脂瘤提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 标本取自 2008年 7月至 2008年 9月在我院行手术治疗的 60例胆脂瘤中耳炎患者(60耳),均经临床和病理检查证实为后天继发性胆脂瘤,其中男 32例,女 28例,年龄19～68(36.8±11.5)岁,病程约2～10(5.6±2.4)年。取正常外耳道骨部皮肤 20例(20耳)的作为对照组。用已知阳性切片作阳性对照,PBS液作阴性对照。

1.2 检测方法 采用PV-9000二步法免疫组化法检测凋亡抑制蛋白Survivin和Livin的表达。兔抗人Survivin多克隆抗体购于Labvision生物公司(Rb-6),兔抗人Livin多克隆抗体购于武汉博士德生物公司(BAl743);免疫组化SP试剂盒购于福州迈欣生物技术公司,DAB显色试剂盒购于北京金桥生物技术公司。DMEM购Gibco公司。

1.3 结果判定 ①着色范围以阳性细胞所占的平均百分数计分,无着色为 0分,小于 20%为 1分,21%～50%为2分,大于 50%为 3分;②着色强度依据深浅记分,无着色为 0分,浅着色为 1分,深着色为 2分。以着色范围和强度计分之和为着色程度积分:积分0或1为阴性(-),2为弱阳性(+),3为阳性(++),≥4为强阳性(+++)。

1.4 统计学处理 所有数据采用SPSS16.0统计分析软件包进行分析。计数资料的比较采用Pearson卡方检验,相关性分析采用Spearman相关分析,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验组和对照组组织中Survivin蛋白表达的比较 实验组组织中Survivin蛋白表达的阳性率为26.7%,明显低于对照组的65.0%,差异有统计学意义,P＜0.01(χ2=9.538)。见表1。

表1 实验组和对照组组织中Survivin蛋白表达的比较

2.2 实验组和对照组组织中Livin蛋白表达的比较 实验组组织中Livin蛋白表达的阳性率为16.7%,明显低于对照组的55.0%,差异有统计学意义,P＜0.01(χ2=11.386)。见表2。

表2 实验组和对照组组织中Livin蛋白的表达

2.3 胆脂瘤组织中Survivin和Livin蛋白表达的相关性 胆脂瘤组织中survivin与livin蛋白(γ=0.614,P＜0.01)的表达呈显著正相关,差异有统计学意义。见表3。

表3 胆脂瘤组织中Survivin和Livin蛋白表达的相关性

3 讨论

中耳胆脂瘤是一种以上皮细胞增生、角化上皮脱屑堆积和骨质破坏为特征的慢性疾病,具有恶性肿瘤的生物学特征,但在病理上属良性病变。胆脂瘤上皮的特点是具有高度增生的能力,但其增殖并非不受控制,细胞增殖增强的同时,细胞凋亡也加速。Olszewska等[2]研究发现,胆脂瘤上皮凋亡细胞所占比率明显高于正常表皮组织,且其凋亡活性主要存在于基底上细胞层,基底层中并未见凋亡细胞。潘松林等[3]研究表明,Fas/APO-1和caspase-3在胆脂瘤上皮中由基底层向外至角质层逐渐增加,与正常外耳道皮肤表达比较,不仅范围广,而且表达水平也明显增强。这些均提示细胞凋亡在胆脂瘤发病、发展过程中起着十分重要的作用。凋亡抑制蛋白家族(IAPs)是新近发现的人类内源性抗凋亡蛋白家族,Livin和Survivin均是其重要成员,可直接抑制caspase的活性,在抑制细胞凋亡过程中起重要作用。国内李冬等[4]采用免疫组织化学 SP法检测 21例胆脂瘤标本及 11例外耳道骨部正常皮肤组织中Survivin的表达,结果显示,胆脂瘤上皮的Survivin表达水平明显高于正常外耳道皮肤上皮。Park等[5]研究表明,获得性胆脂瘤上皮的Survivin表达水平明显高于先天性胆脂瘤。本组资料显示,实验组组织中Survivin蛋白表达的阳性率为 26.7%,明显低于对照组的 65.0%,差异有统计学意义,表明中耳胆脂瘤组织中Survivin蛋白表达明显低于正常外耳道骨部皮肤,进一步证实了凋亡抑制蛋白Survivin在中耳胆脂瘤的异常表达,在胆脂瘤的发生、发展过程中可能有重要作用。目前国内有关中耳胆脂瘤组织中Livin蛋白表达研究较少。本研究发现,实验组组织中Livin蛋白表达的阳性率为 16.7%,明显低于对照组的 55.0%,差异有统计学意义,表明耳胆脂瘤组织中Livin蛋白表达明显下调,提示Livin蛋白同Survivin一样,在胆脂瘤的发生、发展过程中可能有重要作用。提示临床上可通过适当调整凋亡抑制蛋白的表达,有效控制或减缓中耳胆脂瘤鳞状上皮细胞的增殖,从而有效地控制中耳胆脂瘤的发生、发展,为胆脂瘤中耳炎的治疗提供一种新途径和新思路。大量研究证实,survivin和Livin均可直接作用于Caspase-3和Caspase-7,发挥其抗细胞凋亡作用。但是,两者在抗凋亡功能上并不完全相同,它们之间是否存在关联目前报道甚少。本研究结果显示,胆脂瘤组织中survivin与livin蛋白(γ=0.614,P＜0.01)的表达呈显著正相关,差异有统计学意义,提示survivin与livin蛋白可能在胆脂瘤的发生、发展中起协同作用。

综上所述,胆脂瘤组织中Survivin与livin蛋白的表达明显下调,可能在胆脂瘤的发生、发展中起协同作用。

[1] 刘伟,殷团芳,任基浩.中耳胆脂瘤的发生及其与细胞凋亡的关系.山东大学耳鼻喉眼学报,2010,24(1):29-33.

[2] Olszewska E,Chodynicki S,Chyczewski L.Apoptosis in the pathogenesis of cholesteatoma in adults.Eur Arch Otorhinolaryngol,2006, 263(5):409-413.

[3] 潘松林,龚树生,贺红斌.细胞外凋亡途径与中耳胆脂瘤细胞凋亡.中国耳鼻咽喉头颈外科,2007,14(12):699-701.

[4] 李冬,黄芳,龚树生.凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,2006,12 (5):334-338.

[5] Park HR,Min SK,Min K,et al.Increased expression of p63 and survivin in cholesteatomas.Acta Otolaryngol,2009,129(3): 268-272.

Association between expressions of survivin and livin in tissue of m idd le ear cholesteatoma

WU Gan-yuan,LIJian-jun,LILong-ping.

Yiyang Clinical Instituteof Xiangya Medical CollegeofCentral South University, Yiyang Hunan 413000,China

Objective To investigate the correlation between expression of Survivin and Livin in the tissue of the middle ear cholesteatoma.Methods Specimens of 60 midd le ear cholesteatoma(experimental group)and 20 normal skins(controlgroup)collected from the externalear canalwere examined by immunohistochemical PV-9000method usingmonoclonalantibodiesof Survivin and Livin.Results Thepositive rates for the expression of the Survivin and Livin were 26.7 and 16.7%in the experimental group respectively,much lower than those of the control group,with significant differences between both two groups,P＜0.01(χ2=9.538, 11.386).The expression of the Survivinwas positively related to thatof the Livin(γ=0.614,P＜0.01).Conclusion The expressions of the Survivin and Livin in the tissue of them idd le ear cholesteatoma proves to be downregulated markedly,both p laying the collaborative role in theoccurrence and developmentof themiddleear cholesteatoma

Midd le ear cholesteatoma;Survivin;Livin

413000湖南省中南大学湘雅医学院益阳临床学院