两种方法检测乙肝血清学标志物的比较分析

徐红珍 王露

两种方法检测乙肝血清学标志物的比较分析

徐红珍 王露

目的 探讨用酶联免疫吸附实验法（ELISA）和时间分辨荧光免疫法（TRFIA）检测乙肝两对半的差异。方法 分别用ELISA法和TRFIA法对102例标本进行检测，分析两种方法的检测结果及其检出模式。研究两种方法检测乙肝表面抗原（HBsAg）的线性范围和最低检测浓度。结果 两种方法检测乙肝两对半的HBsAg、表面抗体(HBsAb)和e抗原(HBeAg)无显著差异(P＞0.05),e抗体（HBeAb）和核心抗体（HBcAb）有显著差异(P＜0.05)。2种方法检测135、13模式，其结果一致，检测其它几种常见模式及少见模式，结果有差别。两法相比，TRFIA法检测HBsAg具有相当宽的线性范围和最低检测浓度。结论 TRFIA法定量检测乙肝两对半具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，是一种理想的乙肝两对半定量检测方法。

酶联免疫吸附实验；时间分辨荧光免疫；乙肝两对半

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的疾病，血清学标志物乙肝两对半的检测为临床医师提供了可靠的依据[1]。ELISA法具有快速简便、成本低等优点，是目前各级医院检验科免疫学检测的主要技术手段[2],但该法灵敏度低，存在前滞现象，易受环境、操作等多种因素的影响造成临床的误诊和漏诊[3]，并且由于ELISA只能定性判断而无法定量检测，无法满足临床检测病情、观察疗效、评价预后的需要。TRFIA法是近年来发展起来的新型免疫标记技术，它是采用镧系稀土元素及其螯合物（如Eu3+）作为示踪物标记抗体或抗原来检测标本中的相应抗原或抗体的技术，是一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的定量检测方法，极大地满足了临床的需求。

笔者将102例标本用ELISA法和TRFIA法检测，进行分析对比，结果如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

我院自2010年4～10月感染科门诊、住院患者及健康体检人群102例，其中男62例，女40例，平均年龄40.5岁。空腹采集标本。

1.2 仪器和试剂

Thermo Moltiskan Mk3酶标仪Elx50洗板机，上海新波EFFICUTA全自动时间分辨仪及其配套试剂，上海新波ANYTEST全自动荧光仪。ELISA法诊断试剂盒购自北京万泰生物药业有限公司。全自动前处理系统操作，结果由全自动荧光仪测定。为表述方便，用1、2、3、4、5分别表示HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb5项。

1.3.2 用几份高阳性混合血清进行倍比稀释，分析两种方法的线性范围和最低检测浓度。

1.4 统计学分析 采用SPSSI3.0统计软件进行数据统计与分析，资料组间采用配对x2检验。

2 结果

2.1 两种方法阳性检出比较（结果见表1）。两种方法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg时相比无统计学意义(P＞0.05)，检测HBeAb、HbcAb时相比有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 两种方法检出阳性模式比较见表2。TRFIA法检出12种模式，ELISA法检出9种模式、两种方法检测135、13、全阴模式一致，其它模式不一致。

2.3 两种方法检测HBsAg的线性范围见表3。TRFIA法检测HBsAg最低浓度为0.12ng/ml,ELISA法最低检测阳性结果为0.50ng/ml。TRFIA法浓度与稀释比呈线性关系。

3 讨论

3.1 通过对比检测发现两种方法在检测HBsAg、HBsAb、HBeAg时基本一致，相比无统计学意义(P＞0.05)；检测HBeAb、HbcAb时不一致，相比有统计学意义(P＜0.05)。表1中HBsAg、HBsAb、HBeAg检出差异的几例，均是低浓度表达。HBeAb、

表1 ELISA和TRFIA检测HBV-M的比较

表2 ELISA和TRFIA检测HBV-M 组合模式的结果

表3 两种方法检测HBsAg的线性范围

1.3 方法

1.3.1 分别用ELISA法和TRFIA法对102份标本进行检测，分析他们的阳性检测情况并作统计学分析，ELISA法为手工法，结果由酶标仪判读（OD值＞0.105为阳性）。TRFIA法由HBcAb的检测差异，除了有低浓度的原因外，还有因为在ELISA手工法时，手工操作的误差造成了假阴性。从表2中发现，135与13的模式两种方法检出一致，可能是135、13大部分是高浓度表达的原因。对其他几种常见模式的检出两种方法不一致，大多是因为ELISA法对低浓度的检测受限，以致检出模式发生变化。对于少见模式的检出，TRFIA法高于ELISA法，表2中的1245的模式可能是新的亚型再感染，或病毒发生变异后，表达量低，也有可能是145向245的转变过程，1235模式可能是亚临床或非典型性感染早期，也有可能在感染乙肝的窗口期注射了乙肝疫苗；1345模式可能是急性HBV感染趋向恢复慢性携带者，135模式向145模式的转换过程，ELISA法不能检出低浓度的HbeAg。由表3中可见TRFIA法具有较宽的线性范围，检测HBsAg浓度与稀释比呈线性关系，最低检测浓度为0.12ng/ml,而ELISA法浓度与稀释比不成线性关系，最低检测浓度为0.50ng/ml，表明ELISA法检测低浓度的标本存在漏检问题，特别是隐匿性乙型肝炎。

3.2 ELISA法只能提供“阴”、“阳”性结果，而TRFIA法能定量检测，能为临床上评价药物疗效提供动态数据，为疾病的预防、治疗、预后提供参考依据。①通过监测HBsAg水平变化可评估乙肝病情的发展。②HBsAb水平反映了疫苗接种效果以及机体对乙肝病毒的免疫状况。③HBeAg持续高浓度提示HBV持续感染。④高浓度的HBeAb提示病情的好转，在某些时候可能与病情恶化有关，如肝癌、肝硬化。《慢性乙肝防治指南》认为，抗病毒治疗的三大治疗终点之一就是：HBeAg/HBeAb血清学转化，定量检测能动态观察HBeAg/HBeAb的浓度变化过程。⑤HBcAb是最敏感的乙肝感染指标，有研究表明抗-HBc浓度波动与病情呈平行关系，与病毒增殖和肝细胞损害有关。

3.3 综上所述，TRFIA法是一种先进的免疫检验新技术，它与传统的ELISA法相比具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、动态范围宽、试剂货架期长等优点[4]，并且弥补了ELISA法不能量化的缺憾，更好地满足了临床诊断要求。

[1] 刘磊，刘新启.HBsAg携带者乙肝血清学标志物模式分析[J].当代医学.2011，17（6）：28-29

[2] 叶应妩，王毓，申子瑜，等.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社，2006:11.

[3] 张运洪，秦苏，何静波，等.ELISA法结合MEIA能有效检测低水平HBsAg[J]. 临床检验杂志，2002,20（2）:103.

[4] 戴长生.Anytest-2000时间分辨荧光分析仪介绍[J].标记免疫分析与临床，2005，12（2）:121-122.

Objective To explore the difference of ELISA and TRFIA while detecting f ve markers of Hepatitis B virus. Methods 102 samples were measured by ELISA and TRFIA to study their positive rates, then their detecting model were researched, their repetitiveness was checked. The linearity range and stability of two methods was evaluated. Results There are no big differences while HBsAg, HBsAb and HBeAg are detected with the two methods-ELISA and TRFIA(P＞0.05). But there are signif cant differences while HBeAb and HBcAb are detected with thetwo methods(P＜0.05). Their results are the same while 135 and 13 modes are detected. But their results are different while other common modes and seldom modes are detected. The repetitiveness of TRFIA is better than that of ELISA. There are the wider linearity range and the lowest limit of detection of TRFIA.Conclusion TRFIA is a sensitive, specif c, stable and quantitative assay. So it is an ideal method to detect f ve markers of Hepatitis B virus.

Enzyme linked immunosorbentassay; Tim-resolved f uorescence immunoassay; Five makers of hepatitis B virus

10.3969/j.issn.1009-4393.2011.19.016

225500 姜堰市人民医院检验科（徐红珍 王露）