黑龙江省野生松杉灵芝驯化培育试验

马凤,张跃新,闫宝松

(黑龙江省林副特产研究所,黑龙江省非木林产品研发重点实验室,牡丹江 157011)

松杉灵芝具有较高的营养价值和药用价值,是一种珍贵的野生药用真菌,主要分布于黑龙江、吉林、甘肃等省。野生松杉灵芝收购价格很高,每年子实体发生期,人们象“淘金”一样寻找,盲目采摘,致使野生资源遭到破坏,资源储量锐减,濒临危机,因此,迫切需要进行松杉灵芝驯化培育,提高产量。

1 材料与方法

1.1 野生松杉灵芝采集与菌种分离

野生松杉灵芝采自黑龙江省狮子桥林场,子实体生长在落叶松伐桩上。选取新鲜尚未完全成熟的子实体及子实体采摘后基质作为分离材料,用75%酒精消毒后置于无菌室内超净工作台上,在无菌条件下进行菌种分离。分离部位:A、菌柄与菌盖连接处;B、菌盖中部;C、菌盖边缘生长点处;D、基质菌丝。分离方法:切取松杉灵芝菌肉组织块及菌丝接种在PDA斜面培养基上,分别接种20支,置于23～25℃条件下暗光培养。每隔2d检查 1次,挑出污染和菌丝不正常的试管。观察并记录菌丝萌发时间、菌丝长速、菌丝色泽、菌丝浓密度及污染率。选择菌丝生长速度快和生长势旺盛的试管菌种,挑取菌落边缘菌丝接种于改良的PDA斜面培养基上,纯化并扩繁出优良母种备用。

1.2 松杉灵芝菌丝在不同木屑培养基上生长试验

培养基配方1:落叶松木屑78%、麦麸20%,白糖1%、石膏0.5%,白灰0.5%;

配方2:阔叶木屑78%、麦麸20%,白糖1%、石膏0.5%,白灰0.5%。

菌种制作方法:将原料按配方混合后加清水拌匀,调节培养料含水量为60%左右,装入500mL葡萄糖瓶内,每瓶装湿料重700g,装瓶要求松紧一致,装料至瓶肩处,将料面压平,清洗瓶壁外沾染的培养基,打孔后塞好棉塞,在0.14MPa、125℃条件下灭菌2h,冷却至室温后接种,接种后于25℃恒温条件下暗光培养,定时记录菌丝萌发时间、日均长速、菌丝色泽、菌丝长势、菌丝浓密度及污染率。试验重复3次。

1.3 栽培试验

培养基配方1:落叶松木屑78%、麦麸18%,玉米面3%、石膏0.5%,白灰 0.5%;

配方2:阔叶木屑78%、麦麸18%、玉米面3%、石膏0.5%,白灰0.5%。

栽培种制作:制作时间为1月上旬,按照配方比例配制培养料,培养料含水量60%。栽培袋规格为17cm×33cm×0.045cm的聚乙烯塑料袋。每袋装湿料重1～1.1kg,高压灭菌维持2～2.5h,灭菌后待温度降至60℃后取出,冷却至室温接种,接种后置于25℃暗光培养。经过45～60d的培养,菌丝长满菌袋。5月20日进行栽培出芝试验。栽培出芝在塑料棚内进行。采取畦床式覆土栽培法。畦床宽1.2～1.5m,床间距0.4m,剥去塑料袋,将菌柱紧密摆放在畦床内,然后覆盖2cm厚的砂壤土,保持土层湿润。棚内温度控制在20～28℃,空气的相对湿度应保持在70%～90%,经常通风,保持空气新鲜。

2 结果与分析

2.1 松杉灵芝分离试验结果

表1 松杉灵芝不同分离部位菌丝生长情况

由表1可知,不同分离部位对松杉灵芝菌丝生长影响显著,除菌丝色泽为白色至黄褐色相同外,A分离的菌丝各项指标均优于B、C、D分离得到的菌丝,A分离得到的菌丝萌发时间最短为3d,菌丝日均长速最快达1.2 cm/d,菌丝浓密粗壮,且污染率低,B、C、D分离得到的菌丝萌发时间较长,生长速度较慢,菌丝较密,且污染率高。因此,松杉灵芝最佳分离部位为A,即菌柄与菌盖连接处是分离最佳部位。

2.2 松杉灵芝菌丝在不同木屑培养基上生长试验结果

表2 不同木屑培养基对松杉灵芝菌丝生长的影响

由表2可知,松杉灵芝菌丝在不同木屑培养基上均能正常生长,菌丝生长较快,长势较强。除萌发时间相同外,配方1比配方2具有明显优势,配方1菌丝日均长速快,颜色白,菌丝长势强,菌丝浓密,且污染率较低,因此,落叶松木屑培养基比阔叶木屑培养基更适宜松杉灵芝菌丝生长,是松杉灵芝最佳培养基选择。

2.3 栽培试验结果

表3 不同木屑培养基对松杉灵芝出芝影响结果

由表3可知,松杉灵芝在不同木屑培养基上均能正常生长,通过常规栽培出芝管理方式,当年没有形成灵芝子实体,菌丝体经过自然温度越冬后,进行常规出芝管理,第二年6月形成原基,长成子实体。落叶松木屑和阔叶木屑作为栽培原料,除子实体形状、孢子颜色相同外,配方1比配方2具有明显优势,配方1原基形成时间快,芝体成熟时间短,最大单个子实体干重达56g,生物学转化率高,孢子形成多,因此,落叶松木屑培养基比阔叶木屑培养基更适宜松杉灵芝子实体生长,是松杉灵芝理想的栽培原料。

3 结论与讨论

3.1 试验结果表明落叶松木屑培养基比阔叶木屑培养基更适宜松杉灵芝菌丝及子实体生长,人工栽培的松杉灵芝子实体形状与野生松杉灵芝基本相同。黑龙江省气候条件适宜松杉灵芝生长,是野生松杉灵芝产地,而且落叶松木屑资源丰富,因此,可发展松杉灵芝产业。

3.2 松杉灵芝人工栽培当年很难形成子实体,第二年形成子实体,可能由于人工栽培的温度、湿度等环境因子不适宜,达不到出芝条件,也可能与菌丝休眠、菌龄长短及温差刺激有关。

3.3 落叶松木屑栽培松杉灵芝形成孢子较多,阔叶木屑栽培松杉灵芝形成孢子少,可能落叶木屑含有孢子形成因子。

3.4 人工培育松杉灵芝生物学转化率较低,有待于创造适宜生长条件提高生物学转化率。

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