HPLC法测定加味香连丸中芍药苷的含量

徐 力

（长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021）

HPLC法测定加味香连丸中芍药苷的含量

徐 力

（长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021）

目的建立加味香连丸中芍药苷的含量测定方法，用于加味香连丸质量标准的研究。方法本实验采用HPLC法测定芍药苷含量，使用C18色谱柱，甲醇∶水∶冰醋酸（25∶75∶0.1）为流动相，检测波长为230nm。结果芍药苷在0.42～2.1μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999，n=5），平均回收率为98.92%（RSD为1.56%，n=6）。结论该法简便、快速、稳定、可靠，可用于测定加味香连丸中芍药苷的含量。

加味香连丸；芍药苷；HPLC法

加味香连丸由木香、黄连、黄芩、黄柏、白芍、当归等药物组成，本品祛湿清热，化滞止痢，主要用于慢性结肠炎、溃疡性结肠炎、产后痢疾等[1]。其中白芍为其主要成分，但其质量标准中未收载白芍含量的测定方法，且未见采用HPLC法测定加味香连丸中芍药苷含量的相关文献报道。为能更好的控制其质量，本文采用HPLC法对加味香连丸中芍药苷进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；METTLER–AE240型电子分析天平（瑞士METTLER公司），KQ-250B型超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司）等。

1.2 试剂

芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110529-200531）；水为蒸馏水；甲醇为色谱纯（美国Fisher公司）；加味香连丸（规格：6g/100丸）。其他试剂均为分析纯。

1.3 方法

色谱条件 Agilent-C18（5µm，4.6mm×250mm）；甲醇∶水∶冰醋酸（25∶75∶0.1）为流动相；检测波长为230nm；流速1mL/min，柱温40℃[1]。

1.3.1 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品，加稀乙醇溶解，制成每1mL含0.2mg芍药苷的对照品溶液。

1.3.2 供试品溶液的制备

精密称取本品25g，研细，置250mL容量瓶中，加稀乙醇200mL溶解，超声提取30min，放冷后加稀乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45µm滤膜过滤，所得续滤液即为供试品溶液。

1.3.3 含量测定方法

精密吸取对照品与样品溶液各20µL，注入高效液相色谱仪中，测定峰面积，用外标法计算芍药苷含量。

2 方法学考察

2.1 标准曲线的绘制[2]

精密量取对照品溶液（0.5mg/mL）1、2、3、4、5mL分别置10mL容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述溶液各20µL，注入高效液相色谱仪中，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=16598.35x + 68.356（r=0.9999），含量在0.42～2.1µg间呈良好的线性关系。

2.2 精密度试验

精密吸取对照品溶液20µL注入液相色谱仪中，重复进样6次，记录峰面积，计算峰面积的RSD=0.187%，表明精密度良好。

2.3 稳定性试验

取同一批次的加味香连丸供试品溶液，分别于配制后0、2、4、8、12、16、20h按上述方法测定峰面积，结果表明样品在20h内稳定性良好。

2.4 重复性试验

取同一批次的加味香连丸，分别精密称取6份，按1.3.2项下供试品制备方法制备，精密吸取上述溶液各20µL，注入高效液相色谱仪中，计算峰面积RSD=0.478%，说明重复性良好

2.5 回收率试验

精密称取同一批号的样品6份，每份5g，研细，同时加入芍药苷对照品4.00mg，置50mL容量瓶中，加稀乙醇40mL，超声提取30min，放冷后加稀乙醇至刻度，摇匀，用0.45µm滤膜过滤，精密吸取续滤液20µL，注入高效液相色谱仪中，测定，即得。计算芍药苷平均回收率为98.92%，相对标准偏差RSD=1.56%（n=6）。结果见表1。

2.6 样品测定

取加味香连丸3批，按“1.3.2”项下方法平行制备3份供试品溶液，测定含量，见表2。

3 讨 论

表1 回收率试验（n=6）

表2 加味香连丸中芍药苷的含量（mg/25g）

芍药苷对照品与加味香连丸样品在230nm处均有特征吸收，同时按照同样方法制备空白样品溶液，在200～600nm的波长范围内扫描，结果显示在230nm处无吸收，因此空白样品溶液不干扰芍药苷的含量的测定，故选择230nm作为芍药苷的检测波长。

同时参照药典对流动相进行了筛选，分别考察了乙腈∶水∶冰醋酸、甲醇∶水∶冰醋酸、乙腈∶水∶磷酸与甲醇∶水∶磷酸等系统，通过结果对比，并考虑到经济条件，最终选择价位相对低廉的甲醇作为流动相。同时冰醋酸和磷酸对于芍药苷的分离效果基本相同，考虑到色谱柱的使用寿命最终选择冰醋酸为流动相。

加味香连丸的原标准中无芍药苷的含量测定，因此无法更精准的控制该品种的质量。经多次测定，加味香连丸中芍药苷的含量限度为不低于21mg/25g。通过上述方法学考察，建立了加味香连丸中芍药苷的含量测定方法，使其质量标准更趋严谨科学完整，并且该方法简便快捷，结果准确，重现性、回收率好，能有效控制加味香连丸的质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) [S].北京:中国医药科技出版社,2010.

[2]张建中,吕迁洲.HPLC测定抗敏Ⅱ号中连翘苷、芍药苷的含量[J].中成药,2003,25(9):723-725.

Determination of Paeoniflorin in Jiawei Xianglian Pills by HPLC

XU Li
(Affi liated Hospital of ChangChun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130021 China)

ObjectiveA method of determination of paeoniflorin in jiawei xianglian pills, to s tudy on quality standard for jiawei xianglian pills.MethodsPaeoniflorin was determined by HPLC, and use of C18column, Methanol∶Water∶Acetic acid (25∶75∶0.1) as mobile phase, detection wavelength 230nm.ResultsIn the 0.42 ～ 2.1μg paeonifl orin peak area was a good linear relationship (r=0.9999, n=5), the average recovery was 97.91% (RSD was 1.56%, n=6).ConclusionThe method is simple, fast, stable, and reliable and can be used to determine the increase in jiawei xianglian pills paeonifl orin.

Jiawei xianglian pills; Paeonifl orin; HPLC

R282.710.3

B

1671-8194（2011）03-0013-02