Survivin与Bax蛋白在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达及临床意义

张伟健 车小群 钟 倩 练晓勤

（广东省江门市中心医院妇科，广东 江门 529030）

Survivin与Bax蛋白在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达及临床意义

张伟健 车小群 钟 倩 练晓勤

（广东省江门市中心医院妇科，广东 江门 529030）

目的研究Survivin、Bax在宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈癌中的表达，探讨二者在宫颈癌发生、发展机制中的作用及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测Survivin和Bax蛋白在83例宫颈上皮内瘤变及71例宫颈癌中的表达，另取12例正常宫颈组织作为对照。结果Survivin 蛋白的阳性率在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中分别为76.1%、45.8%和0%，Bax蛋白的阳性表达率分别为7%、39.8%和75.0%（P＜0.05）。Survivin蛋白表达在CIN Ⅲ高于CIN Ⅱ，CIN Ⅱ高于CIN Ⅰ，在宫颈癌Ⅲ期高于Ⅱb期，Ⅱb期高于Ⅰ～Ⅱa期，在淋巴结转移组高于无淋巴结转移组（P＜0.05）。在宫颈癌与CIN中Survivin与Bax的表达呈负相关。结论Survivin和Bax的异常表达可能参与宫颈癌的发生、发展过程，在抗凋亡作用增强、促凋亡作用下降两方面协同发挥作用，二者的表达程度与不良预后有关。

Survivin；Bax；宫颈癌；宫颈上皮内瘤变

宫颈癌是女性最常见的生殖道恶性肿瘤。细胞癌基因的激活、抑癌基因的失活和细胞凋亡的抑制是肿瘤发生发展的重要机制。Survivin是新近发现的一种凋亡抑制基因，具有抑制凋亡效应蛋白酶Caspase的活性、参与细胞周期调控及调节细胞有丝分裂等多种生物学作用[1]。Bax是一种促凋亡基因，可以通过激活Caspase信号转导途径、破坏ATP合成功能、改变细胞氧化还原反应等机制发挥促凋亡作用[2]。本研究通过检测宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈癌组中的Survivin与Bax的蛋白表达，探讨二者在宫颈癌前病变及宫颈癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2006年1月至2010年12月江门市中心医院收治的宫颈癌患者71例，按国际妇产科联盟（FIGO）宫颈癌分期标准进行分期：Ⅰ～Ⅱa期18例、Ⅱb期26例、Ⅲ期27例，淋巴结转移49例。CIN患者83例，CINⅠI级（轻度不典型增生）24例，CIN Ⅱ级（中度不典型增生）31例，CIN Ⅲ级（中度不典型增生）28例。宫颈正常者12例。3组年龄均为29～68岁，平均年龄44.6岁。所有患者术前均未进行化疗和放疗。

1.2 主要试剂

鼠抗人Survivin单克隆抗体、鼠抗人Bax单克隆抗体、一抗及二抗试剂盒和染色剂均购于上海晶美生物技术有限公司。

1.3 方法

1.3.1 标本处理

所有标本及时以4%多聚甲醛（含有1/1000DEPC）固定，石蜡包埋，4μm连续切片。

1.3.2 免疫组织化学染色

采用免疫组织化学S-P法，实验步骤按试剂盒说明书进行，以柠檬酸缓冲液高温高压进行抗原修复，DAB显色，用公司出售阳性切片作阳性对照，以PBS液代替一抗作为阴性对照。

1.3.3 结果判定

Survivin阳性判定标准：Survivin阳性表达定位于细胞浆，偶见于细胞核，以细胞浆或胞核出现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒为阳性信号；Bax表达阳性为细胞浆呈棕黄色或棕褐色颗粒。每例均随机观察5个高倍视野（×400），用半定量积分法判断结果，阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为 1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞ 75%为4分；阳性强度黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两项积分相乘：0分为阴性（一），1～4分为弱阳性（+），5～8分为中度阳性（++），9～l 2分为强阳性（+++）。

1.3.4 统计学处理

采用SPSS11.5软件对Survivin和Bax在各组中表达的阳性率进行比较，采用χ2检验或四格表的Fisher确切概率法；相关性分析用Spearman等级相关分析法，P＜0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1 Survivin蛋白在3种组织中的表达

Survivin阳性表达主要定位于细胞浆，偶见于细胞核。Survivin在宫颈上皮内瘤变及宫预癌组织中有非常丰富的表达。但是在正常宫颈组织中的表达为阴性。Survivin阳性程度：宫颈癌高于CIN（χ2=14.58，P＜0.05），CIN高于正常宫颈组织（χ2=11.21，P＜0.05），见表1。且随病变临床分期和组织分化程度的升高而升高：CIN Ⅲ高于CIN Ⅱ（χ2=4.16，P＜0.05），CIN Ⅱ高于CIN Ⅰ（χ2=4.99，P＜0.05），宫颈癌Ⅲ期高于Ⅱb期（χ2=4.34，P＜0.05），Ⅱb期高于Ⅰ～Ⅱa期（χ2=4.85，P＜0.05）。而CIN Ⅲ与宫颈癌之间（χχ2=3.34，P＞0.05）差异无统计学意义。Survivin蛋白在有淋巴结转移组的阳性率高于无转移组（χ2=7.48，P＜0.05），见表2。

表1 Survivin和Bax在3组中的表达 n（%）

表2 宫颈组织中Survivin和Bax蛋白表达与临床病理特征的关系

2.2 Bax蛋白在3组织中的的表达 Bax蛋白阳性表达主要存在于细胞浆，在宫颈上皮内瘤变、宫颈癌及正常宫颈组织中均有表达。Bax阳性程度：宫颈癌低于CIN（χ2=22.04，P＜0.05），CIN低于正常宫颈组织（χ2=5.28，P＜0.05），见表1。在CIN阳性率随CIN级别的升高而降低：CIN Ⅲ低于CIN Ⅱ（χ2=0.60，P＞0.05），CIN Ⅱ低于CIN I（χ2=0.6，P＞0.05），但差异无统计学意义。在宫颈癌阳性率随临床分期的增高而降低：Ⅲ期低于Ⅱb期（χ2=0.39，P＞0.05），Ⅱb期低于Ⅰ～Ⅱa期（χ2=0.15，P＞0.05），但差异均无统计学意义。Bax蛋白在有淋巴结转移组的阳性率低于无转移组（χ2=0.20，P＞0.05），但差异无统计学意义，见表2。

2.3 CIN和宫颈癌组织中Sruvivin的表达强度与Bax蛋白表达强度之间均呈负相关关系（r1=-0.83，P1＜0.05；r2=-0.86，P2＜0.05）。

3 讨 论

宫颈病变从良性病变发展为CIN、原位癌、浸润癌是一个多阶段、多步骤的连续过程，与多种癌基因和抑癌基因的表达、调控以及细胞凋亡有关。Survivin属于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族新成员，是具有细胞凋亡和调节细胞分裂的双功能蛋白，是至今发现最强的凋亡抑制因子[3]。Survivin可直接作用于Caspase这一凋亡核心机制，主要通过粘附于活化的Caspase-3、Caspase-7[4]，从而阻断凋亡过程，这说明Survivin是在凋亡通道汇聚点的部位起作用。Survivin在成人终末分化的成熟组织（除胸腺、生殖腺）中不表达或极低表达，而在人类大多数肿瘤中都可检测到Survivin。本研究显示，正常宫颈组织无Survivin表达，CIN阳性表达率为45.8%，宫颈癌为76.1%，这一结果与李婷等[5]的报道一致。Kim等[6]通过免疫组织化学的方法对41例CIN及宫颈浸润癌的研究发现，随着病变的发展，Survivin的表达逐渐升高。本研究表明Survivin蛋白表达在CIN和宫颈癌组织中逐渐升高，差异有统计学意义。随着CIN级别的升高、宫颈癌分期的进展和向远处淋巴结转移，Survivin的表达随之增强。以上结果提示Survivin蛋白表达与宫颈癌的发生、发展密切相关，其可能通过抑制细胞凋亡、促进细胞增殖而发挥作用，可能预示肿瘤具有较高的侵袭性和不良预后。

Bax是Bcl-2家族的重要成员，对细胞凋亡的调控起着重要作用。Bcl-2可以抑制多种组织的细胞凋亡，延长细胞生存而参与肿瘤的发生，是目前公认的抗凋亡基因。Bax是水溶性蛋白，能与Bcl-2形成二聚体，具有抑制Bcl-2从而促进细胞凋亡的作用。本研究发现，Bax蛋白表达水平在正常宫颈组织中高于CIN，在CIN中高于宫颈癌，与文献报道较一致[7]。研究结果提示Bax在正常组织中的高表达可以促进细胞凋亡，不致引起细胞异常增殖从而引发肿瘤的形成。而在肿瘤组织的表达下调，细胞增殖不能得到有效控制，细胞凋亡减少，异常细胞恶性转化，致使肿瘤的发生。

同时，本研究发现Survivin的表达与Bax存在负相关性，提示二者在抗凋亡作用增强、促凋亡作用下降两方面协同发挥作用，目前二者的相互作用机制尚不清楚。有研究表明，Survivin能抑制由Fas/Caspase -8和Bax /细胞色素C诱导的Caspase活化和凋亡[8]，但二者作用于何种序列、如何抑制Caspase级联反应从而协调转录引发宫颈癌变尚有待于进一步研究。

[1]Borbely AA,Murvai M,Szarka K,et al.Survivin promoter polymorphism and cervical carcinogenesis[J].J Clin Pathol,2007,60(3):303-306.

[2]Kepp O,Rajalingam K,Kimmig S,et al.Bak and Bax are nonredundant during infection and DNA damage-induced apoptosis[J].EMBO J,2007,26(3):825-834.

[3]Ambroxini G,Adida C,Altieti DC,et al.A novel anti-apoptosis gene,surviving,expressed in cancer and lymphoma[J].Nat Med,1997,3(8):917-921.

[4]Shin S,Sung BJ,Cho YS,et al.An anti-apoptotic protein human surviving is a direct inhibitor of caspase-3 and -7 [J].Biochemistry,2001,40(4):1117-1123.

[5]李婷,刘凤英,徐晓明等.Survivin与高危型人乳头瘤病毒在宫颈癌及癌前病变中的表达和意义[J].实用妇产科杂志,2005,21(2):106-109.

[6]Kim HS,Shiraki K,Park SH.Expression of surivin in CIN and invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J].Anticancer Res,2002,22(2A):805.

[7]王晓琴,戴穹,杨志惠.bcl-2、Ki-67和bax蛋白在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达及临床意义[J].中国医疗前沿,2008,3(2):27-28.

[8]薛军.凋亡蛋白抑制因子家族成员(IAPs)之一survivin的研究进展[J].国外医学内科学分册,2003,30(1):28.

Expression and Clinical Significance of Surviving and Bax in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cervical Carcinoma

ZHANG Wei-jian, CHE Xiao-qun, ZHONG Qian, LIAN Xiao-qin
(Department of Gynecology, Jiangmen Central Hospital, Jiangmen 529030, China)

ObjectiveTo investigate the expression of surviving and Bax in cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma, and to explore the role of them in cervical carcinoma pathogenesis.MethodsThe exprssion of Survivin and Bax was detected with immunohistochemical method in situ in CIN and cervical carcinoma. Normal cervical tissues were acted as the control.ResultsThe positive rates of Survivin protein in cervical carcinoma, CIN and the normal cervical tissues were 76.1%, 45.8% and 0%,respectively. While the expression of Bax were 7%, 39.8% and 75.0% in the above three groups(P＜0.05). The expression of Survivin in CIN Ⅲ was obviously more signifi cant than those in CIN Ⅰ/Ⅱ. And the differences were obviously more signifi cant in cervical carcinoma at stage Ⅱb-Ⅲ than those at stage Ⅰ～Ⅱa. The expression of Survivin in cervical carcinoma with lymphatic metastasisi was more signifi cant difference than those with lymphatic metastasis. Negative correlation between Survivin and Bax protein was observed in cervical carcinoma.ConclusionThe abnormal expression of Survivin and bax may participate in the occurrence and development of cervica carcinoma, and suggest malignant degree of tumor and patients' poor prognosis.

Survivin; Bax; Cervical carcinoma; CIN

R737.33

B

1671-8194（2011）03-0011-02