藤己微乳喷雾剂的制备及其透皮特性的研究

叶秀波 岑帼英

（1 广州市海珠区中医医院，广东 广州 510240；2 中山大学第一附属医院药学部，广东 广州 510080）

藤己微乳喷雾剂的制备及其透皮特性的研究

叶秀波1岑帼英2

（1 广州市海珠区中医医院，广东 广州 510240；2 中山大学第一附属医院药学部，广东 广州 510080）

目的制备藤己微乳喷雾剂，比较单方青风藤微乳喷雾剂和藤己微乳喷雾剂的透皮特性。方法分别提取单方和复方中生物碱类成分，以吐温-80和异丙醇为乳化剂，油酸为油相分别制备青风藤微乳喷雾剂和藤己微乳喷雾剂。采用改良Franz扩散池，以青藤碱的渗透量为指标，比较二者的透皮性质。结果单方青风藤微乳喷雾剂中青藤碱的体外透皮释药方程为y=19.489x+2.155（R=0.9982），12h的累积渗透量为239.393µg/mL；藤己微乳喷雾剂中青藤碱的体外透皮释药方程为y=31.264x+11.975（R=0.9978），12h的累积渗透量为385.696µg/mL。结论两种制剂中青藤碱的均以零级动力学经皮渗透，而且藤己微乳喷雾剂中青藤碱的透皮效果比单方更好。

制备；藤己微乳喷雾剂；青藤碱；透皮特性

1 试剂与材料

LC2000高效液相色谱仪（上海天美色谱仪器公司）、GR-202AND分析天平（日本岛津）、TK-12A型透皮扩散试验仪，7mL立式玻璃扩散池，接口面积为2.92cm2（上海凯谐科技贸易有限公司）；HJ-3恒温磁力搅拌器（江苏医疗仪器厂）；雷磁pH计（型号：pHS-3C，上海精密科学仪器有限公司）。

藤己及单方青风藤提取物（实验室自制）；青藤碱对照品（中国药品生物制品检定所，编号为0774-200905）；油酸、吐温-80（天津市大茂化学试剂有限公司）；异丙醇（天津市富宇精细化工有限公司）；甲醇均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

SPF级大鼠（200～250g），雄性，广州中医药大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（粤）20080020。

2 方法与结果

2.1 青藤碱含量测定方法的建立

2.1.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱条件：Diamonsil C18（250mm×4.6 mm，5μm）色谱柱；流动相为甲醇-水（55∶45），水中加入0.2%的三乙胺；检测波长265nm；流速1mL/min；柱温为室温；进样量10μL。在此色谱条件下，青藤碱保留时间约为10.8min，阴性对照色谱图在青藤碱位置无干扰峰，青藤碱峰与其他组分达到基线分离，分离度不低于1.5，理论塔板数按青藤碱计算不低于5000。

2.1.2 对照品溶液制备及线性关系考察

精密称取青藤碱对照品5.6mg，于25mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，制成浓度为224μg/mL的青藤碱对照品储备液，密封，于4℃冰箱保存。分别精密量取上述储备液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4mL，分别置于6只25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制系列青藤碱对照品溶液。按上述色谱条件，分别吸取10μL依次进样。以测得的青藤碱峰面积积分值为纵坐标Y与其浓度为横坐标X进行线性回归，获得标准曲线方程为Y=8231357.2X-2356.4，R=0.9998。结果表明，青藤碱的质量浓度与峰面积积分值在2.24～35.84μg/mL范围内，保持良好的线性关系。

2.1.3 精密度

取同一对照品溶液，重复进样6次，每次10μL，按上述色谱条件测定峰面积，计算RSD为0.26%（n=6），表明精密度良好。

2.1.4 稳定性试验

取同一供试品溶液分别在0、2、4、6、8、10、12h进样测定峰面积，结果RSD=1.81%，说明在12h内青藤碱较为稳定。

2.1.5 回收率试验

精密称取已知含量藤己微乳喷雾剂约0.25mL，共6份，分别精密加入与样品中青藤碱含量相当的青藤碱对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备供试液，分别进样10μL，测定青藤碱含量，计算回收率。结果青藤碱平均回收率为100.10%，RSD=1.74%（n=6），表明本方法准确度良好。

2.2 藤己微乳喷雾剂的制备

2.2.1 藤己总生物碱的提取

[5]生物碱的提取方法，按处方配比分别称取各药饮片于圆底烧瓶中，加入6倍量70%乙醇，回流提取2次，每次2h，提取液用纱布压榨滤过，上清液减压回收乙醇至无醇味，加适量水稀释，用1mol/LHCl调pH至2，冷藏24h，滤过，滤液用1mol/LNaOH调pH至10，加等体积氯仿萃取4次，合并氯仿液，减压回收氯仿，并浓缩至相对密度1.30（50℃），真空干燥至恒重，得藤己总生物碱。另取相同量的青风藤同法制得青风藤总生物碱，备用。

2.2.2 藤己微乳喷雾剂的制备

根据预实验结果，按处方比例将22.5%吐温-80和22.5%异丙醇混匀置于具塞平底锥形瓶中，在25℃恒温磁力搅拌器搅拌下加入1%油酸，取3%藤己总生物碱加入上述混合溶液中，超声5min，然后按比例滴入水相，在磁力搅拌器下搅拌，制得的黄褐色澄清透明微乳，分装于喷雾瓶中，即得。单方青风藤微乳喷雾剂的制备方法同上。

2.3 藤己微乳喷雾剂离体透皮特性的研究

采用改良的Franz扩散池，有效渗透面积A为2.92cm2，接收介质为pH6.8磷酸缓冲盐（使用前超声脱气30min），接收池体积为7mL。分别精密称取藤己微乳喷雾剂，单方青风藤喷雾剂各1.0g置于供给池中，于（32±0.5）℃，200r/min条件下进行实验，预平衡60min后，分别于0.5、1、2、4、6、8，10，12h将全部接收液取出（同时补充同温等量磷酸缓冲盐），样液以0.45µm的微孔滤膜滤过，弃去前1mL的初滤液，精密吸取10µL，按2.1项下建立的青藤碱测定方法，测定扩散液中青藤碱的含量，然后按以下公式计算各时间点的单位面积累积透过量（Q，µg/cm2）。

在式中，Cn：第n个取样点测得的药物浓度（µg/mL）；Ci：第i（i≤n-1个取样点测得的药物浓度（µg/mL）；A：有效透皮面积（2.92cm2）。以Qn对时间t作图，并对曲线中的直线部分线性回归，求出直线斜率dQn/dt，即稳态渗透速率Js [µg/（cm2•h）]，结果见表1和图1。

图1 单方青风藤和藤己微乳喷雾剂渗透动力学曲线

表1 复方青风藤与单方青风藤喷雾剂透皮曲线方程（零级）

3 讨 论

风湿及类风湿性关节炎，属于传统医学“痹证”范畴。风寒湿邪侵袭机体关节，导致气血运行不畅，经络阻滞所致合痹，治宜祛风除湿，散寒逐痹，活血止痛。藤己方中用青风藤祛风通络，胜湿止痛以为君药；防己祛风散寒、通络止痛为臣药，两药合用，共奏祛风除湿、散寒痛痹，活血止痛之功，具有较好的免疫调节和抗炎镇痛作用，是一类值得推广的临床药物。

微乳是由表面活性剂、助表面活性剂、水相和油相按适当比例自发形成的透明或半透明、低黏度、各向同性的热力学稳定的液-液分散体系。微乳因为对水溶性及脂溶性药物均具有良好的溶解性，具有较小的表面张力、其粒径与毛囊孔相近以及能提高易溶性药物稳定性，还具有优良的促渗透作用等优点，近年来广泛的应用于经皮给药系统中。付毅华等[6]以卡波姆940（Carbomer）、羟丙基甲基纤维素（HPMC）和聚乙烯毗咯烷酮（PVP）为基质，制备祛风止痹凝胶剂。结果发现祛风止痹凝胶剂中的青藤碱的经皮特性与本实验结果一致，亦符合零级动力学经皮渗透。

从单方青风藤及藤己微乳喷雾剂的透皮结果，可以看出青藤碱在藤己微乳喷雾剂的透皮速率是单方青风藤的1.6倍，在藤己微乳喷雾剂的累积渗透量是385.696µg/mL，而在单方青风藤喷雾剂的累积渗透量是239.393µg/mL，这说明中药复方更加有利于青藤碱的透皮，其中具体的促渗机制还有待进一步研究。

参考文献

[1]黄际堂,唐勇.复方青风藤片的质量控制[J].中国药业,2009,18(20):27-28.

[2]唐黎明,张素慧,宁炼.复方青风藤胶囊的主要药效学研究[J].中国实验方剂学杂志,2007,13(9):50-52.

[3]马容梅.复方青风藤合剂的临床应用[J].河北中医,1994,16(6):27-28.

[4]周莉玲,李锐,周华等.青藤碱制剂药动学试验中药物累积法与血药浓度相关性研究[J].中成药,1996,18(9):1761.

[5]瞿发林,过伟,董文桑.阵痛宁胶囊中生物碱的提取工艺[J].中国药师,2009,12(5):591-593.

[6]付毅华,杜华碧.祛风止痹凝胶剂的制备及体外渗透性研究[J].医学信息,2009,22(10):2221-2222.

R961.1

B

1671-8194（2011）04-0048-02藤己方是由青风藤和防己组成的中药复方，具有 风湿，通络止痛，利水消肿之功，主治风湿痹痛，关节肿胀或风湿麻木。类似的制剂有复方青风藤片剂、胶囊以及合剂[1-3]，然而对于口服的青风藤制剂而言，其中主要有效成分口服后存在生物利用度低、半衰期短、有胃肠道不良反应、经体循环后到达病变部位药量少等缺点[4]。喷雾剂是指不含抛物剂，借助手动泵的压力或其他方法将内容物以雾状等形态喷出的制剂。喷雾剂携带方便，给药准确，不仅可以发挥局部作用，同时还可以使药物达到有效浓度而发挥全身治疗作用。青藤碱（sinomenine，SN）是从中药青风藤中提取的单体生物碱，具有明显抗炎、镇痛等药理作用，为本制剂抗风湿及类风湿关节炎的主要有效成分，在透皮过程中选择青藤碱为指标成分。方中两味药材均以生物碱类成分为主，因此提取藤己方中的生物碱类成分，再将其制备成外用的微乳喷雾剂，并比较了单方青风藤与复方藤己微乳喷雾剂中青藤碱的透皮特性，为其临床应用提供可靠的药学依据。