高效液相色谱法测定丁桂儿脐贴中丁香酚和桂皮醛含量

王 也，裘国丽，黄 华

(1.浙江省衢州市食品药品检验所，浙江 衢州 324002; 2.杭州民生药业集团公司，浙江 杭州 310011)

高效液相色谱法测定丁桂儿脐贴中丁香酚和桂皮醛含量

王 也1，裘国丽2，黄 华1

(1.浙江省衢州市食品药品检验所，浙江 衢州 324002; 2.杭州民生药业集团公司，浙江 杭州 310011)

目的建立测定丁桂儿脐贴的丁香酚和桂皮醛含量的高效液相色谱法。方法采用Eclipse XDB－C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇－水(65∶35)为流动相，检测波长280 nm，流速1.0 mL/min。结果丁香酚进样量在0.172 9～2.074 2 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为 96.98%，RSD 为1.85%(n=6);桂皮醛进样量在0.003 4 ～0.273 2 μg范围内与峰面积线性关系良好 (r=0.999 9)，平均回收率为97.90%，RSD为1.55%(n=6)。结论该方法简便、准确、可靠、精密度高，可用于丁桂儿脐贴的质量控制。

丁桂儿脐贴;高效液相色谱法;丁香酚;桂皮醛;含量测定

丁桂儿脐贴是由丁香、肉桂、荜茇经加工制成，具有健脾温中、散寒止泻功效，用于小儿泄泻、腹痛的辅助治疗。为提高其质量控制标准，笔者采用高效液相色谱法同时测定丁香和肉桂中有效成分丁香酚和桂皮醛含量，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦);UV－2450型紫外分光光度计(日本岛津);Mettler AE240型电子天平;KQ－250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有效公司)。甲醇(色谱纯)，无水乙醇(分析纯)，水(超纯水);丁香酚对照品(批号为725－200209)，桂皮醛对照品(批号为710－9710)，均由中国药品生物制品检定所提供;丁桂儿脐贴(批号为091038，091229，090745，山西亚宝药业集团股份有限公司);其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Eclipse XDB －C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 －水(65 ∶35);检测波长:280 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

取本品3贴，剪碎，混匀，立即取约0.4 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加无水乙醇50 mL，密塞，称定质量，超声提取30 min，取出，放至室温，再称定质量，用无水乙醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上层溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。精密称取桂皮醛对照品8.537 5 mg，置250 mL量瓶中，用无水乙醇溶解并稀至刻度，摇匀，作为对照品贮备液A;精密称取丁香酚对照品17.285 mg，置100 mL量瓶中，用无水乙醇溶解并稀至刻度，摇匀，作为对照品贮备液B。取除丁香和肉桂以外的其他药材，按样品制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:精密吸取供试品溶液、阴性对照品溶液、对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，记录色谱图(见图1)。结果阴性对照品溶液色谱中，在与丁香酚和桂皮醛对照品溶液色谱峰相应位置处未检出色谱峰，表明处方中其他药物对含量测定无干扰，该方法有较好的专属性。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品贮备液A 10 mL，置100 mL量瓶中，用无水乙醇稀释成3.415 μg/mL的溶液，摇匀，分别取1，2，5 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积;另取对照品贮备液 A 1，2，4，6，8 μL，注入液相色谱仪中测定峰面积，以峰面积对对照品质量浓度进行线性回归，回归方程为 Y=8 492.277 X－4.023 2，r=0.999 9，桂皮醛进样量在 0.003 4 ～0.273 2 μg 范围内与峰面积线性关系良好。取对照品贮备液 B 1，2，4，6，8，10，12 μL，注入液相色谱仪中，测定峰面积，以峰面积对对照品质量浓度进行线性回归，回归方程为 Y=921.592 7 X －1.464 5，r=0.999 9，丁香酚进样量在0.172 9～2.074 2 μg范围内与峰面积线性关系良好。

检测限试验:将对照品溶液稀释后进样，以基线噪音2倍计算，桂皮醛和丁香酚的最低检出量分别为 0.002 μg 和 0.01 μg。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定对照品峰面积。结果丁香酚峰面积的 RSD为0.30%(n=6)，桂皮醛的 RSD 为 0.45%(n=6)。

稳定性试验:精密吸取供试品溶液 10 μL，于 0，2，4，6，8，12，24 h时进样测定峰面积。结果丁香酚的 RSD为0.47%，桂皮醛的RSD为1.0%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重现性试验:取同批(批号为091229)样品6份，精密称定，依法制备供试品溶液并测定。结果丁香酚和桂皮醛的 RSD分别为0.61% 和 0.94%(n=6)，表明方法重现性好。

加样回收试验:精密称取己知含量的样品9份，每份约0.2 g，按低、中、高3个剂量分别加入约3，6，8 mg的丁香酚对照品和10，15，20 mL的桂皮醛对照品贮备液A，每个剂量平行操作2份。按供试品溶液制备方法制备溶液，测定含量并计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

依法测定了3批样品中的丁香酚及桂皮醛含量。结果见表2。

3 讨论

紫外扫描结果表明，桂皮醛的最强吸收在290 nm波长处、次强吸收在280 nm，丁香酚的最强吸收在230 nm、次强吸收在280 nm，因丁桂儿脐贴的桂皮醛含量较低，故选桂皮醛吸收较强的280 nm波长为检测波长。

表1 丁香酚加样回收试验结果(n=6)

表2 样品测定结果

[1]，分别以甲醇、无水乙醇、乙腈为溶剂，考察超声30 min、60 min，水浴回流30 min、60 min以及硅藻土吸附的提取效果，结果硅藻土吸附回收率最低，超声提取优于回流提取，不同溶剂提取的丁香酚和桂皮醛含量无明显差异。考虑到环保和降低试剂毒性，选择无水乙醇超声提取。

参考文献:

[1]袁红宇，欧 宁，葛巧香.RP－HPLC法测定小儿腹泻外敷散中丁香酚的含量[J].中药新药与临床药理，2008，19(1):50－51.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:附录 172.

Determination of Eugenol and Cinnamaldehyde in Dingguier Umbilical Paste by HPLC

Wang Ye1， Qiu Guoli2， Huang Hua1
(1.Quzhou Institute for Drug Control，Quzhou，Zhejiang，China 324002;
2.Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Hangzhou，Zhejiang，China 310011)

ObjectiveTo establish a method for the determination of eugenol and cinnamaldehyde in Dingguier Umbilical Paste.Methods The Eclipse XDB － C18column(150 mm × 4.6 mm，5 μm)was used with the mobile phase of methanol－ water(65 ∶35).The detection wavelength was 280 nm and the flow rate was 1.0 mL/min.Results Eugenol had the good linearity in the range of 0.172 9 － 2.074 2 μg(r=0.999 9).The average recovery rate was 96.98% ，RSD 1.85%(n=6).Cinnamaldehyde had the good linearity(r=0.999 9)in the range of 0.003 4 － 0.273 2 μg.The average recovery rate was 97.90% ， RSD 1.55%(n=6).Conclusion The method is proved to be simple，accurate and reliable，which can be used to control the quality of Dingguier Umbilical Paste.

Dingguier Umbilical Paste;HPLC;eugenol;cinnamaldehyde;content determination

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)10－0043－02

王也，主管药师，从事药物分析及质量研究工作，(电话)0570－8281037(电子信箱)w －ye1979@163.com。

2010－10－14;

2011－01－11)