HPLC 法测定南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量

谭晓虹，田嘉铭，王治宝，杨晓媛，马 宁

（1．河北北方学院基础医学院药学系，河北 张家口075000；2．河北北方学院药学系2006级，河北 张家口075000）

HPLC 法测定南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量

谭晓虹1，田嘉铭1，王治宝1，杨晓媛2，马 宁2

（1．河北北方学院基础医学院药学系，河北 张家口075000；2．河北北方学院药学系2006级，河北 张家口075000）

目的 建立快速、准确的测定南五味子有效成分五味子醇甲和五味子酯甲含量的方法．方法 五味子醇甲和五味子酯甲的含量测定采用高效液相色谱法 （HPLC），色谱条件：Hypersil BDSC8柱 （4．6mm×150 mm，5μm），检测波长254nm，柱温30℃，流速1．0mL·min－1，流动相：甲醇－0．1%醋酸 （65∶35），进样量20μL．结果 HPLC测定五味子醇甲在4．950～15．43ng·μL－1（r＝0．9996）范围内线性关系良好，五味子酯甲在11．38～174．6ng·μL－1（r＝0．9999）范围内线性关系良好；南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的平均回收率分别为98．79%、99．23%，回收率的RSD分别为1．82%、2．20% （n＝5）．结论 该方法精密度、重复性和分离效果均良好，分析快速准确，可作为南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的质控方法．

南五味子；五味子醇甲；五味子酯甲；HPLC

南五味子为木兰科植物华中五味子 （Schisandra sphenanthera Rehd．Et Wils．）的干燥成熟果实，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效，中国药典2005年版一部将其与五味子 （北五味子）区别对待，并首次以南五味子为名称收载［1］．南五味子中主要含有木脂素类及挥发油成分．南五味子木脂素类主要包括五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲等［2］，南五味子的有效成分具保肝、镇静催眠、抗氧化和抗衰老、抗疲劳及免疫促进等作用［3］，对心血管系统、中枢神经系统、消化系统疾病的治疗均有良好的效果．

对南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量进行测定，为南五味子药材的质量控制提供实验依据．实验结果表明本方法快速准确、精密度、重复性均良好，可为南五味子质量控制的方法，并为临床合理用药提供科学参考．

1 仪器和材料

1．1 仪 器

美国Agilent1100高效液相色谱仪及化学工作站；756MC型紫外可见分光光度计 （上海精密科学仪器厂）；TG－328A型分析天平 （上海天平仪器厂）；JN－5200DT型超声波清洗仪 （宁波江南仪器厂）；DHG－9070AS型电热恒温鼓风干燥箱 （宁波江南仪器厂）

1．2 材料

南五味子药材购于张家口市药材公司，经鉴定为四川产南五味子，实验前将南五味子用蒸馏水快速漂洗后置70℃的干燥箱中干燥，然后研磨成粉末状，置干燥器中备用．

1．3 试剂

五味子醇甲标准品 批号：110857－200709；五味子酯甲标准品 批号：111529－200503（购于中国生物制品检定所）；甲醇 （色谱纯）；甲醇 （分析纯）；水 （三重蒸馏水），所用其它试剂均为分析纯．

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Hypersil BDSC8柱 （4．6mm×150mm，5μm）；柱温：30℃；流动相：甲醇－0．1%醋酸（65∶35）；流速：1．0mL·min－1；检测波长：254nm；进样量：20μL．

2．2 对照品溶液的制备

精密称取五味子醇甲标准品0．009 9g，五味子酯甲标准品0．009 9g，分别用甲醇溶解并定容至10 mL，摇匀，作为标准储备液．

2．3 供试品溶液的制备

准确称取同一批号的南五味子药材粉末1g各5份，分别置于50mL比色管中，用甲醇定容至刻度．超声提取30min，冷却后，常压过滤，在滤渣中加入甲醇50mL，再进行超声提取30min［4］，静置冷却，常压过滤，合并两次滤液定容至50mL，滤液经0．45μm微孔滤膜过滤，所得滤液作为供试品溶液．

2．4 线性关系考察

用甲醇将标准储备液稀释成下列浓度的标准溶液：五味子醇甲的质量浓度为4．950、7．425、9．900、12．380和15．430ng·μL－1，五味子酯甲质量浓度为11．38、54．72、101．30、139．30和174．60ng·μL－1．按照2．1色谱条件，分别对上述标准系列溶液进样分析测定，以含量 （C）为横坐标，峰面积 （A）为纵坐标进行回归计算，得到了五味子醇甲标准曲线方程A1＝40．33C1－5．732，r＝0．9996；结果表明五味子醇甲含量在4．950－15．430ng·μL－1范围呈现良好线性关系；五味子酯甲的标准曲线方程A2＝24．11C2＋32．93，r＝0．9999，结果表明五味子酯甲含量在11．38－174．60ng·μL－1范围内线性关系良好．

2．5 精密度试验

精密吸取五味子醇甲、五味子酯甲标准品溶液，按照 “2．1”项下色谱条件重复进样5次，记录色谱峰面积，计算五味子醇甲与五味子酯甲的含量，并用RSD表示．五味子醇甲的RSD为0．389% （n＝5），五味子酯甲的RSD为1．07% （n＝5）．

2．6 重复性考察

取同一批药材粉末，按供试品溶液的制备方法平行制备5份，依法测定，结果南五味子中五味子醇甲、五味子酯甲质量浓度的RSD分别为0．459%和0．659%．

2．7 稳定性考察

取同一供试品溶液，分别于1、2、4、8、12、24h测定峰面积，结果表明：南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲均在24h内稳定．南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的RSD为0．730%和1．25%．

2．8 回收率试验

采用加样回收法，精密称取已知含量的南五味子药材粉末，分别定量加入五味子醇甲对照品10．0ng·μL－1，五味子酯甲对照品156ng·μL－1，按照供试品溶液的制备方法操作，在上述色谱条件下进行测定，结果表明南五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的平均回收率分别为98．79%、99．23%，RSD分别为1．82%、2．20% （n＝5）．

2．9 样品测定

精密吸取上述供试品溶液，在2．1项色谱条件下进样20μL进行测定，记录色谱峰面积，以标准曲线方程求出样品中五味子醇甲和五味子酯甲的含量．结果见表1，色谱图见图1、2．

表1 南五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的含量 （，mg·g－1）（n＝5）

表1 南五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的含量 （，mg·g－1）（n＝5）

编号 五味子醇甲 五味子酯甲1 0．5046 7．826 2 0．5055 7．862 3 0．5037 7．804 4 0．5060 7．871 5 0．5021 7．776 ／mg·g－1 0．5044±0．0015 7．828±0．0397 RSD% 0．307 0．507

图1 五味子醇甲、酯甲标准品HPLC图

图2 南五味子样品HPLC图

3 讨 论

本实验采用超声波提取法用甲醇提取南五味子的有效成分，提取工艺简单，提取效率高，试剂用量少，操作简便．利用HPLC法测定南五味子中的五味子醇甲和五味子酯甲的含量，以甲醇－0．1%醋酸（65∶35）作为流动相，检测波长选择254nm，在此条件下、五味子醇甲和五味子酯甲的峰形尖锐，保留时间短，分离度高．该方法简便快速、精密度高且重复性及稳定性均良好，回收率符合要求可用于测定南五味子药材中五味子醇甲和五味子酯甲的含量．

五味子是临床常用中药，但传统上认为北五味子的质量优于南五味子，临床多以北五味子用药．现代研究表明五味子的主要成分木脂素具有镇静催眠等药理作用，本实验结果表明，南五味子中同样含有木脂素的主要成分五味子醇甲和五味子酯甲．这与文献报道的南五味子同样具有较强的药理学活性相一致［5－6］．近年来研究表明南五味子是一种具有开发潜能的药用植物，其在传统中医应用中的功效逐渐受到人们的重视．同时对南五味子有效成分及其药理作用的进一步研究将为在亲缘关系较近的植物中寻找新的药源提供实验依据，并为充分开发利用植物药物资源奠定基础．

［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典一部 ［M］．北京：化学工业出版社，2005．169

［2］ 金鑫，辛爱学．南五味子提取工艺研究 ［J］．中国现代药物应用，2009，3（6）：149－151

［３］ 程敏．南五味子化学成分、药理作用及炮制方法研究进展［Ｊ］．陕西农业科学，2010，（６）：26－25

［４］ 邓翀，颜永刚，梁婷，等．多指标综合评价南五味子木脂素提取工艺［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，2011，17（９）：４－６

［５］ 徐丽华，黄芳，孙萌，等．南北五味子镇静催眠活性部位共有成分的分析［Ｊ］．分析化学研究报告，2009，37 （６）：828－834

［６］ 王雯雯，仰榴青，李永金，等．南、北五味子提取物对小鼠镇静、催眠作用的影响［Ｊ］．江苏大学学报：医学版，2008，18 （２）：122－126

Determination of Schisandrin and Schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．by HPLC

TAN Xiao－hong1，TIAN Jia－ming1，WANG Zhi－bao1，et al
（Department of Pharmacy，Hebei North University，Zhangjiakou 075000，Hebei，China）

Objective To investigate a rapid and sensitive method for determination of schisandrin and schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．Methods To analyse Schisandrin and Schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．by high performance liquid chromatography（HPLC）on a Hypersil BDSC8column （4．6mm×150mm，5μm），detection wavelength was set at 254 nm and the column temperature was 30℃，The mobile phase was methanol－0．1%acetic acid（65∶35），with the flow rate of 1．0mL·min－1．Results Schisandrin showed a good linear relationship at range of 4．950～15．43ng·μL－1（r＝0．9996），and Schisantherin A showed a good linear relationship at range of 11．38～174．6ng·μL－1（r＝0．9999）．The average recovery rate schisandrin and schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．were 98．79%and 99．23%，and RSD of the method were 1．82%and 2．20%respectively；Conclusion The method is proved to be accurate，rapid，and sensitive．It can be used for quality control of schisandrin and schisantherin A in Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．

Schisandra sphenanthera Rehd．et Wils．；schisandrin；schisantherin A；HPLC

R 962

A

1673－1492 （2011）06－0070－03

来稿日期：2011－08－31

谭晓虹（1969－），女，河北张家口人，医学硕士，副教授，主要研究方向：药物分析化学．

李蓟龙 英文编辑：谢利锋］