酸枣仁安神酒中酸枣仁皂苷改善小鼠睡眠作用的研究

王红磊，汪芳安

(武汉工业学院食品科学与工程学院，湖北武汉430023)

随着社会的发展，人们工作以及生活的压力越来越大，失眠问题己经成为困扰人们生活的重要因素之一。WHO的一项研究表明，全球约有27%的人正面临失眠的困扰。目前改善睡眠状况的研究多集中在安定、褪黑素等方面，短期改善睡眠状况虽有一定的效果，但长期服用会产生药物依赖性与毒副作用。酸枣仁为鼠李科植物酸枣的干燥成熟种仁，酸枣仁为药食同源的保健食品原料，医书记载其味甘，性平，具宁心安神、养肝、生津敛汗之功效。主治虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴，为常用改善失眠中药。酸枣仁皂苷是酸枣仁中镇静催眠的有效成分之一，为三萜类化合物［1-2］。本实验旨在观察酸枣仁皂苷对小鼠改善睡眠功能的影响。

1 实验材料

1.1 仪器

秒表、分析天平、电子称、灌胃针、1 mL注射器等。

1.2 试剂

酸枣仁药材(武汉生达新世纪大药房(由本室鉴定))，戊巴比妥钠(北京强欣博瑞生物技术有限公司)，褪黑素(深圳喜力健生物科技有限公司)。黄酒(自制)，乙醇试剂(分析纯)，实验用水为蒸馏水。

1.3 试验动物

选用同济医学院实验动物中心繁殖的清洁级5—6周龄昆明种雄性小鼠，体重(20±2)g。

1.4 酸枣仁皂苷的提取

1.4.1 乙醇超声提取酸枣仁皂苷

精密称取酸枣仁皂苷50g，按料液比1∶10加入70%乙醇500mL，超声温度40℃，超声时间40 min，超声功率70 W，在上述条件下超声提取2次，合并提取液，应用旋转蒸发进行浓缩蒸干乙醇，得酸枣仁皂苷乙醇提取物。

1.4.2 蒸馏水回流提取酸枣仁皂苷

称取酸枣仁粉末20g，加5倍体积水浸泡1h，加热煎煮1h，过滤取滤液，其滤渣再加5倍体积水煎煮40min，过滤，合并滤液，旋转蒸发浓缩，得酸枣仁皂苷浓缩水煎液。

1.5 样品及供试液制备

酸枣仁安神酒：将酸枣仁皂苷乙醇提取物用适量黄酒溶解，配成400mg/kg、200 mg/kg酸枣仁皂苷酒溶液。

酸枣仁皂苷水煎液［3］：将酸枣仁皂苷浓缩水煎液配制成至相当于药粉浓度为2g/mL的溶液。

褪黑素水溶液：取褪黑素4片，3 mg/片，加水定容到50mL，配制成0.24mg/mL褪黑素水溶液。

戊巴比妥钠水溶液：精密称取戊巴比妥钠粉末500mg，加水溶解定容到100mL，配制成5mg/mL戊巴比妥钠水溶液

2 实验方法

实验方法依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中改善睡眠功能检测方法［5］。

2.1 对小鼠自主活动的影响［4］

选48只小鼠，随机分为4个剂量实验组和2个阴性实验对照组，每组8只。实验组分别灌胃给予1.5项中制备的样品溶液，阴性对照组给予等量的蒸馏水和等量的黄酒溶液，灌胃量为0.2 mL/10 g BW。各组每日上午9∶00-10∶00灌胃给药1次，连续5d，并在末次灌胃前禁食24 h。末次给药45 min后，将小鼠置于纸箱内，使其适应5 min后，记录5 min内活动次数(测定小鼠走动时间及双前肢向上抬举次数)。如实验组小鼠走动时间和双上肢抬举次数减少并与阴性对照组有显著性差异，即判定该项试验结果为阳性。

2.2 直接睡眠试验

小鼠和剂量试验组以及阴性对照组同2.1项。灌胃量0.2mL/10g BW，各组每日上午9∶00—10∶00灌胃给药1次，连续10d，末次样品给药后观察小鼠的睡眠情况。睡眠以翻正反射消失为判断指标，当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位，如超过60s不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠，从翻正反射消失至翻正反射恢复的时间为小鼠睡眠时间，观察各组小鼠的睡眠发生率、入睡动物数及睡眠时间。如试验组入睡动物数及睡眠时间增加并与阴性对照组有显著性差异，即判定该项试验结果为阳性。

2.3 延长戊巴比妥钠睡眠时间试验

小鼠分组及给样品方法同2.1项。在末次样品给药20min后，各组小鼠按50 mg/kg BW剂量腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为0.2 mL/20g BW。以小鼠的翻正反射消失为睡眠判断指标，观察小鼠对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间延长的影响。如实验组小鼠的睡眠时间比阴性对照组延长并有统计学意义，即判定该项试验结果为阳性。

2.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验

小鼠分组及给样品方法同2.1项。在末次样品给药20min后，各组小鼠按45 mg/kg BW剂量腹腔注射巴比妥钠。观察30 min内小鼠的睡眠情况，以翻正反射消失达60 s以上为入睡判断标准，记录各组的入睡的小鼠个数，计算入睡小鼠发生率。如实验组入睡小鼠发生率高于阴性对照组并有统计学意义，即判定该项试验结果为阳性。

2.5 实验数据统计

应用SPSS 17.0统计软件进行统计处理。小鼠自主活动计数、延长戊巴比妥钠诱导睡眠时间结果以(¯x±s)表示，显著性检验用t检验，协同戊巴比妥钠法结果用x表示，显著性检验用X2检验

3 结果与分析

3.1 对小鼠自主活动的影响

各剂量实验组动物在给予样品后，有部分小鼠表现为静卧，有少量活动，自主活动明显减少，阴性对照组活动正常。5 min内小鼠活动如下表1、表2所示。

表1 灌胃5d样品组对小鼠走动时间的影响(±s)

表1 灌胃5d样品组对小鼠走动时间的影响(±s)

注：褪黑素与皂苷水煎液与蒸馏水空白对照;皂苷酒溶液与黄酒空白对照;下同。

组别 只数/只 灌胃5d在5min内走动时间/s P值蒸馏水阴性对照组8120.37 ±10.74 ---黄酒阳性对照组 8113.50 ±14.13 ---褪黑素组 888.75 ±16.930.006酸枣仁酒大剂量 873.50 ±12.700.000酸枣仁酒小剂量 873.50 ±16.240.004皂苷水煎液874.38 ±25.920.006

表2 灌胃5d样品组对小鼠双前肢向上抬举次数的影响(±s)

表2 灌胃5d样品组对小鼠双前肢向上抬举次数的影响(±s)

对小鼠自主活动的影响实验表明，小鼠走动时间各样品组与对应空白组比较有显著性差异;小鼠双上肢抬举次数各样品组与对应空白组比较差异有显著性意义。

3.2 直接睡眠实验

各剂量实验组小鼠在给予样品后，小鼠多表现为安静和活动减少，但没有翻正反射消失者，阴性对照组动物全部清醒，表明各样品组对小鼠都没有直接睡眠作用，见表3。

表3 各组小鼠的直接睡眠实验结果

3.3 延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间实验

由表4可见，各剂量实验组小鼠的睡眠时间均比阴性对照组的时间长，且各剂量实验组与阴性对照组的差异均具有极显著性(P＜0.01)，皂苷水煎液组与对照组的差异具有显著性(P＜0.05)，表明该样品组能延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间。

表4 受试物对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响(±s)

表4 受试物对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响(±s)

3.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验

结果见表5，各剂量实验组的小鼠入睡率高于阴性对照组，且各剂量实验组与阴性对照组的差异均具有显著性(P＜0.05)，表明各样品组与阈下剂量的戊巴比妥钠有协同催眠作用。

表5 对阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率的影响

3.5 结果判定

延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验结果均为阳性，且无明显直接睡眠作用，可判定酸枣仁皂苷酒溶液以及皂苷水煎液均具有改善睡眠功能作用。

4 结束语

失眠是临床多发疾病，病因复杂多样。目前国内外常用的西医药镇静催眠药都有一定的副作用和药物依赖性，往往吃药有一定效果，停药又复发失眠，其中有的可能引起药源性疾病。而养心安神药酸枣仁为祖国医学中治疗失眠的常用中药，被广泛应用在很多治疗失眠的药方中，虽然其具体改善睡眠的机理目前并不是很明确，但其确切的疗效比较显而易见的［3］。

实验结果表明，酸枣仁安神酒、酸枣仁水溶液对小鼠的自主活动均有明显的抑制作用：均能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠的小鼠入睡率，能明显延长戊巴比妥钠诱导睡眠时间，这些结果说明酸枣仁中酸枣仁皂苷具有一定的镇静催眠作用。

［1］ 高剑锋，许万玉.酸枣仁皂苷的研究综述［J］.中国药师.2008，11(11)：1376-1378.

［2］ 郭胜民，范晓雯.酸枣仁总皂甙的中枢抑制作用［J］.西北医学志，1996.8(11)：166.

［3］ 游秋云，王平，章程鹏，等.龙骨、酸枣仁对小鼠镇静催眠作用的对比研究［J］.辽宁中医药大学学报，2007.9(5)：28-29.

［4］ 吴玉兰，许惠琴.酸枣仁不同炮制品及炒酸枣仁中总黄酮与总皂苷的镇静催眠作用比较［J］.时珍国医国药.2005.16(9)：868-869.

［5］ 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范［M］.北京：清华同方电子出版社(3 版)，2003.