VA、VD及其交互作用对肉鸡免疫机能的影响

冯永淼 闫素梅 杨鹏飞 张海琴

脂溶性维生素对家禽有重要的营养作用，在其细胞和体液免疫过程中也起着重要作用。维生素A是机体必需的维生素之一，还具有增加机体免疫力的作用。有研究报道不同剂量维生素A对肉鸡免疫器官指数影响（王利华，2009），维生素A、E交互对肉鸡免疫机能影响（陈艳君等，2008）；有研究表明，维生素A与D在动物体内存在相互作用，肉鸡对它们的需要量不仅要考虑各自添加水平，还需考虑二者之间的相互比例。有报道称维生素A过量添加可能会影响维生素D及其他营养素的吸收代谢，导致肉鸡体内代谢异常，但对于机体免疫机能的影响不清楚。本研究以免疫机能为指标，系统研究日粮维生素A、D水平对肉鸡免疫机能影响及其相互作用，为合理确定维生素A、D的最适添加量及其比例提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

VA（500 000 IU/g）、VD3（500 000 IU/g）由上海罗氏提供。肉鸡苗由北京华都鸡场提供。

1.2 试验动物

试验选择8日龄健康AA雄性肉鸡384只，随机分成16个处理组，每个处理设3个重复，每个重复8只鸡。各组鸡的初始体重经方差检验差异不显著（P＞0.05）。

1.3 基础日粮组成及营养水平

试验以玉米和大豆粕为主要原料，按照肉鸡生长发育阶段配制基础日粮，分2～3周龄和4周龄两阶段饲养，基础日粮除日粮VA、VD按照试验设计添加外，其它营养物质均满足需求，其配方和营养水平详见表1。

表1 基础日粮组成及营养水平

1.4 试验设计

试验采用4×4完全随机试验设计，在基础日粮中分别添加不同剂量的VA、VD构成试验日粮。VA、VD分别设4个添加水平，VA为1 500、3 000、15 000和 45 000 IU/kg日粮；VD 为 500、1 250、2 500和5 000 IU/kg日粮。

1.5 饲养管理

试验鸡采用涂塑肉鸡笼单层笼养，鸡笼均采用红外线加热装置自动控温，试验期内保持24 h/d恒定光照和机械通风。

1.6 测试项目

1.6.1 免疫器官指数

28日龄时，每重复组随机抽取2只鸡（每处理组共6只）称重后屠宰，取胸腺、法氏囊、脾脏称重，测定免疫器官指数。

免疫器官指数(g/kg)＝免疫器官重/体重

1.6.2 新城疫抗体滴度（HI）

试验肉鸡8日龄用新城疫Ⅳ系苗滴鼻点眼接种，同时皮下注射新城疫油苗加强接种。28日龄时，每重复组随机抽取2只进行采血，制备血清，采用微量血球血凝抑制试验法测定血清新城疫（ND）抗体滴度。

1.6.3 CD4+(辅助性T细胞TH)、CD8+(抑制性 T细胞TS)及 CD4+/CD8+比值

28日龄时，每重复组随机抽取2只，进行CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+比值测定。

1.6.4 单核-巨噬细胞吞噬指数

28日龄采用碳廓清试验方法（林清华，1999）进行测定。按如下公式计算碳廓清指数K值和吞噬指数a值。

碳廓清指数 k＝（lgOD10-lgOD2）/8

OD2：2 min 测得光密度值；OD10：10 min 测得光密度值。

吞噬指数a＝体重/（肝重+脾重）×k1/3

1.7 试验数据处理

数据利用SAS统计程序分析。

2 结果与分析

2.1 VA、VD及其交互作用对肉鸡免疫器官指数的影响

表2列出不同处理组肉鸡的免疫器官指数结果。结果表明：日粮VA、VD的添加剂量及其交互作用对肉鸡的脾脏指数均无明显影响（P＝0.51，P＝0.51，P＝0.45）；对胸腺指数也无显著影响（P＝0.25，P＝0.61，P＝0.89）。

日粮VA的添加剂量对肉鸡法氏囊指数有明显的影响趋势（P＝0.08），其中，1500、3000与15000IU/kgVA组法氏囊指数间无明显差异，但以15 000 IU/kgVA组最大，显著高于45 000 IU/kgVA组。日粮VD的添加剂量对肉鸡法氏囊指数无明显的影响（P＝0.48），但VD水平增加至2 500 IU/kg时法氏囊指数较高，增加至5 000 IU/kgVD时略有降低。说明日粮VA水平增加至15 000 IU/kg时，可进一步刺激肉鸡的免疫器官发育，但45 000 IU/kg的高剂量VA组不利于免疫器官的发育；日粮VD水平增加至1 250、2 500 IU/kg时，可刺激肉鸡的免疫器官发育，而5 000 IU/kg的高剂量VD组有抑制免疫器官发育的可能。

日粮VA与VD的交互作用对肉鸡法氏囊指数有明显的影响趋势(P＝0.11)。当日粮VA水平较低，在1 500 IU/kg 时，添加低、中剂量 VD（500～2 500 IU/kg）法氏囊指数较高，尤其VD为1 250 IU/kg时最高，而日粮VD水平增加至5 000 IU/kg时，法氏囊指数反而下降，提示高剂量的VD对VA有一定拮抗作用。当日粮添加高剂量的VD（5 000 IU/kg）时，添加不同剂量VA，其法氏囊指数与VA水平有关，低剂量VA（1 500 IU/kg）组法氏囊指数低于添加中剂量VA处理组，提示高剂量VD引起的法氏囊指数下降通过适当增加VA水平得以缓减；但VA水平过高时（45 000 IU/kg），法氏囊指数显著降低，说明VA水平增加过高时，缓减效果下降。当日粮添加高剂量的VA时，添加不同剂量VD，其法氏囊指数与VD水平有关，低剂量VD（500 IU/kg）组法氏囊指数低于添加中剂量VD组，但高剂量VD（5 000 IU/kg）时，法氏囊指数显著降低。提示高剂量VA对法氏囊指数的降低作用通过适当增加VD水平得以缓减，但VD水平过高时，缓减效果下降。这些结果提示，VA对VD间存在的互作效应主要体现在VA、VD水平添加过高的情况下，即高剂量VA对VD的拮抗作用，和高剂量VD对VA的拮抗作用。

2.2 VA、VD及其交互作用对肉鸡新城疫抗体滴度的影响

日粮VA水平对肉鸡新城疫抗体滴度的影响不显著（P＝0.22），随日粮VA水平增加，新城疫抗体滴度先呈现增加的趋势，之后又减小。日粮VD水平变化及其与VA的相互作用对新城疫抗体滴度的影响不显著（P＝0.91，P＝0.93）。

2.3 VA、VD 及其交互作用对肉鸡吞噬指数的影响

不同VA组的吞噬指数差异趋于显著(P=0.12)。日粮VA水平为1 500、3 000、15 000 IU/kg时，肉鸡的吞噬指数均较高，尤以15 000 IU/kg时最高；日粮VA水平增加至45 000 IU/kg时，吞噬指数有明显的降低趋势。日粮VD水平对肉鸡吞噬功能无显著影响（P=0.31），但其变化规律与VA影响相似，日粮VD水平增加至5 000 IU/kg时，吞噬指数呈下降的趋势。日粮VA、VD的交互作用对肉仔鸡吞噬指数无显著影响（P=0.69）。

2.4 VA、VD及其交互作用对肉鸡外周血T细胞亚群CD4＋、CD8＋比例影响

不同剂量VA对CD4＋亚群比例影响差异趋于显著（P=0.13），日粮 VA 水平为 1 500、1 5000、45 000 IU/kg时，CD4＋比例均较高，其中45 000 IU/kg时最高，有明显高于3 000 IU/kgVA组的趋势。不同剂量VD对CD4＋亚群比例影响组间差异也趋于显著（P=0.09），日粮VD水平为2 500 IU/kg时，CD4＋亚群比例明显高于500 IU/kgVD组，而与1 250、5 000 IU/kg处理组间无明显差异。日粮VA、VD的交互作用对肉仔鸡CD4＋亚群比例无显著影响（P=0.42）。

不同剂量VA、VD对肉鸡外周血CD8＋亚群比例没有显著影响（P=0.90，P=0.43），但VD水平为5 000 IU/kg时，CD8＋亚群比例有增加的趋势。日粮VA、VD交互作用对肉仔鸡CD8＋亚群比例有明显的影响趋势（P=0.12）。当VA水平较低（1 500 IU/kg）时，低剂量VD（500～1 250 IU/kg）CD8＋亚群比例较低；而VD水平增加至 2 500、5 000 IU/kg 时，CD8＋亚群比例增加，且VD水平为5 000 IU/kg时最高。提示在对CD8＋亚群比例的影响方面，高剂量的VD对VA有一定拮抗作用。高剂量 VD（5 000 IU/kg）时，添加低剂量 VA，其 CD8＋亚群比例较高，而高剂量 VA（45 000 IU/kg）使 CD8＋亚群比例降低。提示在对CD8＋的影响方面，高剂量VD对VA的拮抗作用通过增加VA水平得以缓减。VA与VD间存在的互作效应对CD8＋亚群比例的影响主要体现在VA、VD添加量过高的情况下，即高剂量VA对VD的拮抗作用和高剂量VD对VA的拮抗作用。

不同剂量VA及VD，对肉鸡外周血淋巴细胞亚群 CD4＋/CD8＋比值没有显著的影响（P=0.77，P=0.48）。日粮VA、VD的交互作用对肉仔鸡CD4＋/CD8＋比值有显著的影响（P=0.02）。由试验结果看出，日粮VA水平为1 500 IU/kg，VD水平为1 250 IU/kg时，二者比值最高，但VD水平增加至5 000 IU/kg时降到最低，说明在对CD4＋/CD8＋比值的影响方面高剂量VD对VA存在一定拮抗。

3 讨论

VA作为机体重要的营养素之一，在机体免疫反应中起到免疫调节作用，能提高鸡的免疫力。VD在动物体内主要是通过1，25-(OH)2D3发挥其生理功能，对机体的免疫机能起重要作用。关于日粮VA、VD水平与肉鸡免疫器官发育的影响研究报道较少，尤其关于高剂量的添加效应及二者的互作效应研究则更少。本试验结果得出，日粮VA水平在1 500～15 000 IU/kg范围内增加时，肉鸡法氏囊指数、胸腺指数呈增加的趋势，以15 000 IU/kg时较高，但日粮VA水平进一步增加至45 000 IU/kg时，二者又呈明显的降低趋势。日粮VD的添加剂量在500～2 500 IU/kg范围内时，肉鸡的脾脏指数、法氏囊指数较高，但VD水平增加至5 000 IU/kg时，二者呈降低的趋势。日粮VA与VD水平对肉鸡免疫器官法氏囊和胸腺发育的影响存在一定互作效应，主要表现在高剂量VA对VD的拮抗作用和高剂量VD对VA的拮抗作用。

高士争（1999）得出，日粮添加VA，肉鸡血清抗体滴度和淋巴细胞转化两项指标明显高于不添加VA组，而且抗体滴度和淋巴细胞转化在22 000 IU/kgVA水平时达到最大，在添加量为44 000 IU/kg时，抗体滴度和淋巴细胞转化开始下降。说明高水平VA，可显著提高肉鸡的体液免疫和细胞免疫功能，获得最大的免疫反应，但过高剂量的增加反而降低了免疫机能。本试验结果得出，15 000 IU/kgVA组的新城疫抗体滴度及吞噬指数最高，45 000 IU/kgVA组吞噬指数最低，新城疫抗体滴度也较低，低剂量VA（1500 IU/kg）组的新城疫抗体滴度水平最低。日粮VD水平变化及其与VA的相互作用对新城疫抗体滴度和吞噬指数无明显影响。说明提高日粮VA水平至15 000 IU/kg可促进肉鸡的体液免疫与非特异性免疫机能，而低剂量的VA（1 500 IU/kg），使体液免疫功能趋于下降，高剂量的VA（45 000 IU/kg）使体液免疫与非特异性免疫功能下降。

CD4＋/CD8＋变化常用作衡量免疫系统激活强弱的参数，其比例高表明机体免疫系统处于较强的激活状态，反之则表明免疫系统处于正常或较弱状态，比例过高或过低都暗示免疫系统功能紊乱。本试验结果表明，日粮VA水平在1 500～45 000 IU/kg、VD在 500～5 000 IU/kg范围内增加，CD4+亚群比例存在不同程度的差异，CD8＋亚群比例无明显变化。 CD4＋/CD8＋比值虽然也无显著变化，但高剂量VA（45 000 IU/kg）组最高，高剂量VD（5 000 IU/kg）组最低。日粮VA、VD的交互作用对肉鸡CD8＋亚群比例有明显的影响趋势（P=0.12），对 CD4＋/CD8＋比值有显著的影响（P=0.02）。说明日粮VA、VD对肉鸡细胞免疫的影响存在一定互作效应，而且主要体现在高剂量VA对VD的拮抗作用和高剂量VD对VA的拮抗作用，但详细的结果及影响机理还有待于进一步探讨。

（参考文献若干篇，刊略，需者可函索）