六种中药水提物体外抗氧化活性研究

顾玮蕾,王春丽

(华东理工大学药学院,上海 200237)

六种中药水提物体外抗氧化活性研究

顾玮蕾,王春丽＊

(华东理工大学药学院,上海 200237)

从羟自由基清除率、还原力、抑制脂质过氧化能力和清除DPPH自由基等四个方面研究了旱莲草、积雪草、莱菔子、马齿苋、女贞子、枇杷核等六味中药水提物的体外抗氧化作用。结果显示,在羟自由基清除率方面,从强到弱清除能力依次是马齿苋、积雪草、旱莲草、枇杷核、女贞子和莱菔子。在还原力方面,六味中药从强至弱顺序依次是积雪草、马齿苋、旱莲草、枇杷核、女贞子和莱菔子。在抑制脂质过氧化方面,抗氧化能力从强到弱依次是马齿苋、女贞子、莱菔子、枇杷核、积雪草和旱莲草。在DPPH自由基方面,其清除能力从大到小依次是积雪草、马齿苋、枇杷核、旱莲草、女贞子和莱菔子。结论表明,六味中药的水提物均具有一定的体外抗氧化活性。

羟自由基,还原力,脂质过氧化,中药,DPPH

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

旱莲草、积雪草、莱菔子、马齿苋、女贞子、枇杷核 购于中药店;抗坏血酸、七水合硫酸亚铁、水杨酸、30%过氧化氢、三氯乙酸、氯化高铁、铁氰化钾、硫代巴比妥酸、正丁醇等 国药集团化学试剂有限公司,均为分析纯。

DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器、SHB-III型循环水真空泵 巩义市英峪予华仪器厂;JA31002电子天平 上海天平仪器厂;AL204电子天平 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;UV1900紫外分光光度计 亚研电子;SORVALL LEGEND RT离心机 美国赛默飞世尔科技公司。

1.2 实验方法

1.2.1 中药提取物的制备 分别取 5.00g莱菔子、枇杷核、女贞子、旱莲草、积雪草和马齿苋,分别加入100mL的去离子水,加热回流提取 1.5h,真空抽滤,置 4℃冰箱保存备用。

1.2.2 抗氧化作用评价

1.2.2.1 DPPH法[5]DPPH是一种商业化广泛应用,可用来检测抗氧化活性的人工合成有机自由基。2mL DPPH乙醇溶液 (6×10-5mol/L),加入 2mL样品溶液,混匀,室温静置30min,于517nm处测吸光度值。DPPH·清除率按下式计算：

式中：A0是不加样品而加入去离子水的空白对照吸光度值;A1是加入样品的吸光度值。

1.2.2.2 羟自由基的清除能力[6]清除羟自由基的能力是体外常用的评估抗氧化方法之一。本实验采用了水杨酸捕获法,利用 Fenton体系产生羟自由基,加入水杨酸来捕获,能在 510nm产生强吸收的有色物质,通过测定其吸光度来判定。

取 2mmol/L的硫酸亚铁溶液 1mL,6mmol/L过氧化氢 1mL,6mmol/L水杨酸 1mL,加入样品 1mL,静置 30min,以蒸馏水为参比,在 510nm处测定吸光度,计算羟自由基的清除率。

式中：A0为以溶剂代替药液的试剂空白管的吸光度;Ax为加了药液的吸光度;Ay为不加显色剂的药液的本底光密度,是为了减去药液本身颜色对于实验的影响。

1.2.2.3 还原力测定[7]还原能力的强弱,可以反映药物的潜在抗氧化性能,是体外抗氧化的一个重要指标。本实验用的是铁氰化钾法,取 2mL的样品,加入 2mL的磷酸缓冲液(pH为 6.6)和 1%铁氰化钾溶液 2mL,混匀,在 50℃下保温 20min,加入 10%的三氯乙酸溶液 2mL,振荡混匀后取 2mL的混合液,加入2mL去离子水和 0.1%的三氯化铁溶液 0.4mL,静置10min,用去离子水为空白,在 700nm下进行比色,吸光度的值越大,说明还原力越强。

1.2.2.4 脂质过氧化的测定[8]丙二醛是脂质过氧化的终产物之一,能够和硫代巴比妥酸反应产生红色的络合物,通过加入药液是否能够降低丙二醛的产生,能够一定程度上反映抗脂质过氧化能力的强弱。

取 0.5mL的鸡蛋黄匀浆(10%,v/v),加入 0.1mL的样品和 0.4mL的去离子水,再加入 0.07mol/L的硫酸亚铁溶液孵化 30min。随后加入 20%三氯乙酸溶液 1.5mL和 0.8%硫代巴比妥酸溶液(溶于适量氢氧化钠)1.5mL,振荡均匀,95℃水浴保持 60min。冷却后,每个试管中加入 5mL正丁醇,充分萃取,在3000r/min离心 10min,倾出上层红色有机层,在波长532nm处测定吸光度值。抗氧化指数按下式进行计算：

式中：Ac是不加样品而加入去离子水的空白对照吸光度值;As是加入样品的吸光度值。

2 结果与讨论

2.1 抗氧化实验结果

2.1.1 DPPH法 六种样品 (0.5mg/mL)对于羟自由基的清除能力如图 1所示,此六种中药水提液对DPPH均有不同程度的清除能力。清除率从强到弱依次是积雪草、马齿苋、枇杷核、旱莲草、女贞子和莱菔子,清除率 (n=3,means±SD)依次为 87.11%± 0.64%、78.00%±0.10%、77.42%±0.66%、70.04%± 0.29%、68.06%±0.55%和 48.21%±0.36%。

图 1 六种中药水提液对DPPH自由基的清除能力

2.1.2 羟自由基清除能力 六种样品 (5mg/mL)对于羟自由基的清除能力如图 2所示,此六种中药水提液均对羟自由基具有不同程度的清除能力。清除作用从强到弱依次是马齿苋、积雪草、旱莲草、枇杷核、女贞子和莱菔子,清除率 (n=3,means±SD)分别为 41.26% ±0.33%、29.71% ±0.49%、27.80% ± 0.24%、16.81% ±0.59%、13.56% ±1.07%以及10.60%±1.29%。

图 2 六种中药水提液羟自由基清除率的比较

2.1.3 还原力测定 中药样品浓度均为 5mg/mL,其还原力比较如图 3所示。还原能力从大到小依次是积雪草、马齿苋、旱莲草、枇杷核、女贞子和莱菔子,对应的吸光度值 (n=3,means±SD)分别是 1.046± 0.009947、0.9704±0.01214、0.7958±0.01203、0.7668 ±0.01640、0.6704±0.01074和 0.6584±0.002987。

图3 六种中药水提物还原力的比较

2.1.4 脂质过氧化 六种中药水提液(50mg/mL)对于脂质过氧化的抑制能力如图 4所示。在相同浓度下,抗氧化指数(n=3,means±SD)在 10%以上的有马齿苋 (20.24% ±2.44%)、女贞子 (18.54% ± 3.63%)、莱菔子 (13.11%±4.30%);枇杷核、积雪草和旱莲草的抗脂质过氧化作用微弱。

图 4 六种中药水提液的脂质过氧化抑制能力

2.2 讨论

从羟自由基清除率、还原力、抑制脂质过氧化和清除DPPH自由基四个体外抗氧化实验可以看出,六种中药水提物均表现出了不同程度的抗氧化能力,并以马齿苋、积雪草综合作用较好,可能与其清热功效相关。

从羟自由基和脂质过氧化两个方法来看,马齿苋水提物抗氧化活性最强。余庆皋等[11]对马齿苋的根、茎、叶分别水提,进行羟自由基实验,也显示了良好的作用,与本研究结果相一致。

在还原力和DPPH法方面,抗氧化能力最强的均是积雪草水提液,且积雪草还原力的吸光度超过 1,而DPPH清除率超过 80%。目前尚无积雪草抗氧化作用的相关报道,关于其抗氧化机制有待进一步研究。

3 结论

本实验利用四种体外评价方法,初步研究了旱莲草、积雪草、莱菔子、马齿苋、女贞子、枇杷核等这六味中药水提物的抗氧化活性,为其抗氧化机制的深入研究奠定基础,为其在抗氧化领域开发利用提供参考。

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Study on antioxidant activities of six Chinese traditional herbs in vitro

GUW ei-lei,WANG Chun-li＊
(School of Pharmacy,East China University of Science and Technology,Shanghai 200237,China)

The antioxidant ac tivities of extrac ts w ith de ionized wa te r of He rba Ec lip tae,He rba Cente llae,rad ish seed,He rba Portulacae,Ligus trum Luc idum and the loqua t core we re s tud ied.Extrac ts we re m easured by hyd roxyl rad ica ls scaveng ing ac tivity assay,reduc ing p owe r assay,lip id p e roxida tion assay and DPPH assay.O n the hyd roxyl rad ica ls scaveng ing ac tivity assay,He rba Portulacae,He rba Cente llae,He rba Ec lip tae,loqua t core, Ligus trum Luc idum,and rad ish seed we re showed antioxidant ac tivity from high to low.O n the reduc ing p owe r, He rba Cente llae,He rba Portulacae,He rba Ec lip tae,loqua t core,Ligus trum Luc idum,and rad ish seed we re showed antioxidant ac tivity from high to low.O n the l ip id p e roxida tion assay,He rba Portulacae,Ligus trum Luc idum,rad ish seed,loqua t core,He rba Cente llae and He rba Ec l ip tae we re showed antioxidant ac tivity from high to low.O n the DPPH assay,He rba Cente llae,He rba Portulacae,loqua t core,He rba Ec lip tae,Ligus trum Luc idum and rad ish seed we re showed antioxidant ac tivity from high to low.The results showed tha t a ll of the s ix he rbs had the antioxidant ac tivities in d iffe rent leve l.

hyd roxyl rad ica ls;reduc ing cap ac ity;l ip id p e roxida tion;Chinese trad itiona l he rbs;DPPH

TS201.2

A

1002-0306(2010)03-0190-03

目前,抗氧化剂已广泛应用于食品工业、医药行业和化妆品行业。中药日益成为天然抗氧化剂的主要来源之一[1-2]。本研究所选旱莲草、积雪草、莱菔子、马齿苋、女贞子、枇杷核等临床常用的中药,分别具有理气、化痰、清热、补益等方面的功效。莱菔子主要用于食积气滞症和痰盛气喘症[3];枇杷核主治咳嗽兼胸胁刺痛等症[4];女贞子主治眩晕耳鸣、腰膝酸软等;旱莲草可用于牙齿松动、须发早白等症;积雪草主治湿热黄疸、痈疮肿毒、中暑腹泻等[3];马齿苋用于热毒血痢等[3]。在上述六味药中,莱菔子和马齿苋是药食两用之品,旱莲草、积雪草和女贞子是可以用于保健品的中药。本文研究六味中药的体外抗氧化活性,为其进一步开发利用提供参考。

2009-04-30 ＊通讯联系人

顾玮蕾(1985-),女,硕士研究生,主要从事中药、食品抗氧化作用的研究。