榆黄蘑菇饮料抑制肿瘤和拮抗环磷酰胺毒副作用的研究

施溯筠，李秀国

(1.延边大学长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，吉林延吉133000; 2.延边大学基础医学院，吉林延吉133000)

榆黄蘑菇饮料抑制肿瘤和拮抗环磷酰胺毒副作用的研究

施溯筠1，李秀国2，*

(1.延边大学长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，吉林延吉133000; 2.延边大学基础医学院，吉林延吉133000)

目的:探讨榆黄蘑饮料抑制肿瘤和拮抗环磷酰胺毒副作用的影响。方法:在抑制肿瘤实验中，50只小鼠分成空白组、环磷酰胺组(85mg/kg)和3个榆黄蘑饮料组，分别灌胃蒸馏水或3个不同浓度(165、330和660g·L－1，0.1mL·10g－1体重)的榆黄蘑饮料，30d后，环磷酰胺组和榆黄蘑饮料组接种S180荷瘤。在接种肿瘤细胞的第1d和第5d，环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺85mg/kg。8d后，处死小鼠，检测胸腺指数和肿瘤块重。在拮抗环磷酰胺毒副作用实验中，分组同上，第22d及第27d环磷酰胺组和饮料组小鼠均灌胃85mg/kg的环磷酰胺，第30d小鼠眼眶取血，检测血清中NO和MDA的含量及SOD、ALT和AST的活性。结果:在抑制肿瘤实验中，榆黄蘑饮料对S180荷瘤的抑瘤率比空白组显著增高(P＜0.05或0.01)，胸腺指数比环磷酰胺组也显著增高(P＜0.01)。在拮抗环磷酰胺毒副作用实验中，与环磷酰胺组相比，榆黄蘑中、高剂量饮料组的SOD活性明显上升(P＜0.01)，榆黄蘑饮料组的MDA含量明显下降(P＜0.05)，ALT和AST活性明显下降(P＜0.05或0.01)。结论:榆黄蘑饮料能够抑制小鼠S180肿瘤和拮抗环磷酰胺对小鼠的毒副作用。

抗肿瘤，拮抗环磷酰胺毒副作用，榆黄蘑，小鼠

《神农本草经》中称:“蘑菇久服轻身不老”，蘑菇因具有抗肿瘤、免疫调节、抗动脉粥样硬化、降血脂、抗炎和保肝等药理活性作用而受到重视［1］，日本目前已开发出抗肿瘤的饮料，而我国尚未有相关报道。榆黄蘑(Pleurotus citrinopileatus Sing.)是担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属，具有滋补强壮和止痢作用［2］。其干燥子实体含丰富的粗蛋白和人体必需氨基酸，有较多粗纤维和较低的粗脂肪，富含钙、镁、钾、钠等常量元素及锌、铁、铜等人体必需微量元素，有很高的营养价值［3］。新鲜的榆黄蘑子实体由于具有味道鲜美、无毒而被普遍食用。本文用榆黄蘑的新鲜子实体制成不同浓度榆黄蘑饮料给小鼠灌胃30d后，探讨榆黄蘑饮料抑制肿瘤和拮抗环磷酰胺毒副作用。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

昆明种小鼠 质量18～22g，延边大学实验动物科提供，生产许可证号:SCXK(吉)2007－0003。

HH－501超级恒温水浴 江苏金坛市恒丰仪器厂;SARTOTIUS万分之一电子天平 北京塞多利斯仪器系统有限公司;VIS－723型分光光度计 上海精密科学仪器有限公司;KA－1000低速台式离心机上海安亭科学仪器厂;打浆机 顺德市容桂区甜康电器厂;门冬氨酸基转移酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)试剂盒 北京北化康泰临床试剂有限公司，批号:20081009和20081113;榆黄蘑 市售，由延边大学药学院吕惠子副教授鉴定为真品。

1.2 实验方法

1.2.1 榆黄蘑饮料制备 榆黄蘑新鲜子实体在50℃浸提30min后，过滤，加调味剂和稳定剂(pH3.6～3.8)，均质，采用巴氏分段灭菌后制得660g·L－1榆黄蘑饮料，使用时用蒸馏水稀释成330、165g·L－1。

1.2.2 荷瘤小鼠模型制备 取腹腔内传代7d的S180荷瘤小鼠，在无菌条件下抽取腹腔内瘤细胞，并以生理盐水洗涤3次，2500r/min离心3min，弃上清液，用无菌生理盐水调整瘤细胞浓度为 4×107个/mL。

1.2.3 榆黄蘑饮料抑制S180荷瘤小鼠实验 领取昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分5组，每组10只。在动物室适应饲养2d，每日灌胃量如下:空白组和环磷酰胺(Cyclophosphamide)组灌胃蒸馏水，低、中、高剂量组每日分别灌胃165、330和660g·L－1的榆黄蘑饮料(0.1mL·10g－1体重饮料)，第30d给每只小鼠右前肢腋窝部皮下注射0.2mL配制好的荷瘤细胞悬液。在接种肿瘤细胞的第1d和第5d，环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺85mg/kg。实验期间让实验动物自由进食和饮水。接种肿瘤细胞8d后，称重记录，脱臼处死小鼠，然后剥离肿瘤块和胸腺，称重。胸腺指数=胸腺平均质量(mg)/平均体重(g)，抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重－给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%［4］。

1.2.4 榆黄蘑饮料拮抗环磷酰胺毒副作用实验 领取昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分5组，每组10只。在动物室适应饲养2d，空白组和环磷酰胺组每日灌胃蒸馏水，低、中、高剂量组每日分别灌胃165、330和660g·L－1的榆黄蘑饮料(0.1mL· 10g－1体重饮料)，并在灌胃的第22d及第27d环磷酰胺组和饮料组小鼠均灌胃85mg/kg的环磷酰胺。第30d小鼠眼球取血，离心取血清，测定血清中SOD、MDA和NO及肝中AST和ALT等指标。SOD采用羟胺法检测［5］，MDA采用硫代巴比妥酸法测定［6］，ALT和AST采用试剂盒测定。

1.2.5 统计学方法 数据采用SPSS10.0软件处理，结果以(±s)表示，各实验组分别与空白组和模型组进行比较，采用t检验。

2 结果与分析

2.1 榆黄蘑饮料抑制S180荷瘤小鼠实验

如表1所示，环磷酰胺组抑瘤率达57.44%，但同时胸腺指数却比空白组下降显著(P＜0.05)。榆黄蘑饮料对S180荷瘤的抑瘤率比环磷酰胺组低，但与空白组相比呈浓度梯度增强(P＜0.05或0.01)，同时胸腺指数比空白组显著升高，其中低剂量组比空白组的胸腺指数有明显升高(P＜0.01)，中、高剂量组升高的更显著一些(P＜0.05)。实验结果表明，在接种肿瘤之前给小鼠口服榆黄蘑饮料，有良好的抑瘤作用。

表1 榆黄蘑饮料对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用(±s，n=10)

表1 榆黄蘑饮料对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用(±s，n=10)

注:与对照组相比*为P＜0.05，＊＊为P＜0.01;与模型组相比△为P＜0.05，△△为P＜0.01，表2同。

组别 胸腺指数(mg/g)瘤重(g)抑瘤率(%) 26.84 1.50±0.18 2.97±0.13环磷酰胺组 1.20±0.15* 1.26±0.16＊＊ 57.44低剂量组 1.81±0.19＊△△ 2.76±0.20＊△△ 6.98中剂量组 2.56±0.22＊＊△△ 2.27±0.26＊＊△△ 23.54高剂量组 2.78±0.17＊＊△△ 2.17±0.32＊＊△△空白组

2.2 榆黄蘑饮料拮抗环磷酰胺毒副作用实验

表2 榆黄蘑饮料拮抗环磷酰胺毒副作用实验结果(±s，n=10)

表2 榆黄蘑饮料拮抗环磷酰胺毒副作用实验结果(±s，n=10)

组别 SOD(UI/mg) MDA(nmol/mg) NO(μmol/L) ALT(UI/L) AST(UI/L) 76.90±3.70环磷酰胺组 35.77±2.08＊＊ 3.78±0.41* 26.27±1.74＊＊ 67.35±2.78＊＊ 91.21±5.29*低剂量组 41.84±3.58 2.26±0.35△ 36.81±1.39＊＊△ 54.21±3.18△△ 67.63±2.86△△中剂量组 60.12±3.43＊＊△△ 2.33±0.21△ 47.82±2.86＊＊△△ 45.32±2.55△△ 76.04±3.72△高剂量组 61.52±2.25＊＊△△ 2.47±0.31△ 53.31±2.18＊＊△△ 44.99±1.34△△ 81.30±5.25空白组 46.36±2.07 2.49±0.32 79.85±6.44 48.51±2.27△

如表2所示，与空白组比较，环磷酰胺组的SOD活性明显下降，而MDA的含量，ALT和AST活性有明显升高(P＜0.05或0.01)，说明造模成功。与空白组相比较，榆黄蘑中、高剂量饮料组的SOD活性明显上升(P＜0.01)，榆黄蘑饮料组的MDA含量、ALT和AST活性无明显差异。与环磷酰胺组相比较，榆黄蘑中、高剂量饮料组的SOD活性明显上升(P＜0.01)。榆黄蘑饮料组的NO含量明显上升(P＜0.01)，MDA含量明显下降(P＜0.05)，ALT和 AST活性明显下降(P＜0.05或0.01)。实验结果表明榆黄蘑饮料有拮抗环磷酰胺毒副作用的效果。

3 讨论

胸腺是体内最重要的中枢免疫器官之一，胸腺指数反映胸腺的发育和功能状况，间接反映了机体的免疫水平。实验结果表明榆黄蘑饮料在对S180荷瘤有抑制作用的同时，对小鼠的胸腺没有产生如环磷酰胺的毒害作用。

环磷酰胺是目前临床上常用的烷化剂类的抗肿瘤药物，抗瘤谱较广，对多种类型肿瘤有效，特别是对恶性淋巴瘤疗效显著，但环磷酰胺对肿瘤细胞和正常细胞的选择性不高，它在杀伤肿瘤细胞的同时，也损伤了正常组织细胞，特别是人体中生长旺盛的血液、淋巴组织细胞，产生了许多毒副作用，对肝脏也造成一定程度的损伤，所以环磷酰胺的毒副作用一直是困扰临床用药的一个突出的难题［7］。

实验结果表明，环磷酰胺模型组小鼠血清中ALT和AST活性较空白组明显降低，说明环磷酰胺对小鼠肝脏有一定程度的损伤。另外，环磷酰胺模型组小鼠血清中SOD活性和NO含量较空白组明显降低，而血清中MDA的含量却显著增加，说明环磷酰胺抑制了机体的抗氧化能力，使机体抗氧化能力下降，导致体内自由基不能及时清除，过多的自由基通过攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，导致小鼠血清中脂质过氧化物MDA的含量增加，造成组织细胞膜毒性反应，影响了正常组织形态和功能的完整性，这可能是环磷酰胺在临床治疗过程中出现某些毒副作用的原因之一。

实验显示，榆黄蘑饮料能明显抑制环磷酰胺致肝损伤小鼠血清ALT和AST的活性的升高，还显著升高血清中SOD活性和NO含量，降低MDA的含量，说明榆黄蘑有利于清除自由基，减少膜脂质的过氧化，其对环磷酰胺造成的肝损伤有良好的保护作用。从以上结果可知，榆黄蘑饮料有望开发成一种有价值的保健品。

［1］ Lindequist U，Niedermeyer TH，Julich WD.The pharmacologicalpotentialofmushrooms［J］.Evid Based Complement Alternat Med，2005，2(3):285－299.

［2］阮瑞国，丁李春，潘祥华，等.榆黄蘑［J］.食用菌学报，2006，13(4):33－38.

［3］张影，包海鹰，李玉.珍贵食药用菌金顶侧耳研究现状［J］.吉林农业大学学报，2003，25(1):54－57.

［4］苏云明，王文凯，王宏婷，等.灵芪胶囊对S180荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究［J］.天津中医药，2007，24(5):397－398.

［5］Choi HY，Song JH，Park YS，et al.Flow injiection－chemilum nescent assay for the determination of superoxide dismutase ativity［J］.Can J Chem，2001，79(1):337－341.

［6］Dawn－Linsley M，Ekinci FJ，Ortiz D，et al.Monitoring thiobarbituric acid－reactive substances(TBARs)as an assay for oxidative damage in neuronal cultures and central nervous system［J］.J Neurosci Methods，2005，141(2):219－222.

［7］辛晓明，张庆柱，王浩，等.杜仲总多糖的提取及其对环磷酞胺致肝损伤小鼠的保护作用［J］.中华中医药学刊，2007，25 (9):1896－1899.

Anti－tumor and antagonism of side effects caused by cyclophosphaide of Pleurotus citrinopileatus juice beverage in mice

SHI Su－yun1，LI Xiu－guo2，*
(1.Key Laboratory for Organism Resources of the Changbai Mountain and Functional Molecules，Ministry of Education，Yanbian University，Yanji 133000，China;2.College of Basic Medicine，Yanbian University，Yanji 133000，China)

Objective:To investigate the anti－tumor and anti－antagonization of side effects caused by cyclophosphaide of Pleurotus citrinopileatus juice beverage(PCJB)in mice.Methods:Mice were divided into a control，a cyclophoshaide(85mg/kg)and three PCJB groups for anti－tumor of S180 test.They were orally administered with distilled water(for control and cyclophoshaide groups)and three different doses of PCJB(165，330 and 660g·L－1，0.1mL·10g－1body)for 30d.The cyclophoshaide and beverage groups injected S180 ascites tumor at the right oxter of mice.The cyclophoshaide group was administered 85mg/kg of cyclophosphamide in the 1st day and 5th day.After 8d，the tumor weight and spleen index were measured.In antagonism of side effects caused by cyclophosphaide test，ibid division in mice.The control and model group mice were administered 85mg/kg of cyclophosphamide in the 22th and 27th day.The contents of NO and MDA and the activities of SOD，ALT and AST of serum in mice were determined in the 30th day.Results:The inhibiting tumor rates of PCJB were significantly higher than control(P＜0.05，0.01)and the spleen index(P＜0.01)of PCJB were significantly higher than cyclophoshamide group in the anti－tumor test.Compared with the model group，the PCJB treatments significantly increased the activity of SOD(P＜0.01)，and decreased the content of MDA(P＜0.05)and activity of ALT and AST(P＜0.05 or 0.01)on serum of mice in antagonism of side effects caused by cyclophosphaide test. Conclusion:PCJB improved the anti－tumor and antagonism of side effects caused by cyclophosphaide in mice.

anti－tumor;antagonism of side effects caused by cyclophosphaide;Pleurotus citrinopileatus;mice

TS201.1

A

1002－0306(2010)08－0332－03

2009－06－30 *通讯联系人

施溯筠(1972－)，博士，副教授，研究方向:长白山特色植物保健食品开发。

延边大学“211”工程项目(YB211－2)。