HPLC法测定清喉利咽颗粒中柚皮苷的含量

广西梧州食品药品检验所（543002）陈江涛 林冬杰

清喉利咽颗粒是由黄芩、西青果、桔梗、竹茹、枳壳、胖大海、橘红等13种中药组成。我国药典2005年版一部质量标准只有黄芩苷含量测定指标，为更好地控制该药品的质量，本文采用HPLC法检测清喉利咽颗粒中柚皮苷的含量。

1 仪器与试药

Shimadzu LC-2010高效液相色谱仪 ，LCsolution 色谱工作站 ，紫外检测器，日本AND GR-202电子分析天平。清喉利咽颗粒厂家：桂龙药业（安徽）有限公司；柚皮苷（批号：110722-200309，供含量测定用），购于中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为纯化水；其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，4μm)；流动相甲醇－水（40:60）；流速1.0ml/min；波长：283nm。柱温：30℃，进样量10μl。

附表 柚皮苷回收率测定结果（n=6）

2.2 对照品溶液的制备 精密称取柚皮苷17.6mg置50ml量瓶中加甲醇，作为对照品储备液，浓度（柚皮苷）：352μg.ml-1，精密吸取对照品储备液12.5ml置25ml瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液，浓度（柚皮苷）：176μg.ml-1。

2.3 供试品溶液的制备 精密量称取本品2g，置50ml量瓶中，加甲醇约45ml超声提取30min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 分别取缺枳壳、橘红的样品按供试品溶液制备方法制备阴性阴性对照样品，按2.3供试品溶液的制备方法制备缺枳壳的阴性对照溶液。

2.5 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。由色谱图可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，阴性对照试验无干扰。

2.6 精密度试验 取同一份对照品溶液(柚皮苷浓度为176μg/ml)，按2.1项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积积分值，柚皮苷RSD为0.20%（n=6）。结果表明，仪器精密度良好。

2.7 线性关系考察 按2.1的色谱条件分别精密吸取上述对照品溶液2、5、10、15、20μl注入色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标（Y），对照品进样量（ng）为横坐标（X）绘制标准曲线，得柚皮苷的回归方程为：Y＝41.6X +7.6（r=0.9996）；结果表明：柚皮苷在352～3520ng范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.8 稳定性试验 取同样品溶液，分别在0，2，4，8，12h， 按2.1项下色谱条件进样测定峰面积积分值，柚皮苷RSD为0.73%（n=5）。结果表明12h内待测物稳定。

2.9 重复性实验 精密称取同一批(批号：090109 )样品 6份，按2.1色谱条件和2.3项下方法试验，结果柚皮苷平均含量是3.88mg.g-1，RSD＝0.95%（n=6）。结果表明，本方法重复性良好。

2.9 加样回收率实验 精密量取已测定含量的清喉利咽颗粒（柚皮苷平均含量3.88mg.g-1）0.8、1、1.2ml置50ml量瓶中，各取样2份，精密加入柚皮苷浓度为1.1mg.ml-1的对照品溶液3.2、4、4.8ml，按2.3项下的方法制备供试品溶液、按2.1色谱条件测定，计算回收率。结果见附表，表明本方法回收率良好，符合定量分析要求。

2.10 样品含量测定 本品3批样品批号为081103、090109和091046的柚皮苷含量分别为3.80、3.82和3.80。

3 讨论

3.1 检测波长的选择 参考《中国药典》2005年版一部枳壳中柚皮苷[1]的检测，柚皮苷经紫外扫描在283nm有较大吸收，因此选定283nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择 本方法考察了流动相甲醇-水（20：80）、甲醇-水（30：70）、甲醇-水（40：60）洗脱条件下对样品中柚皮苷分离度的影响，结果发现采用甲醇-水（40：60）洗脱时，样品中的柚皮苷能得到较好的分离，峰形良好，且流动相配制简单，效率较高，故采用甲醇-水（40：60）作为流动相。

3.4 阴性样品的制备 由于枳壳中含柚皮苷，故阴性样品为缺此物质的样品。