桂西地区幽门螺杆菌耐药性影响因素分析＊

黄衍强,欧 平,黄赞松,周喜汉,李晓华,韦红玉

(1.右江民族医学院医学微生物学与免疫学教研室,广西百色533000;2.贺州学院,广西542800;3.右江民族医学院附属医院,广西百色533000)

桂西地区幽门螺杆菌耐药性影响因素分析＊

黄衍强1,欧 平2,黄赞松3△,周喜汉3,李晓华1,韦红玉1

(1.右江民族医学院医学微生物学与免疫学教研室,广西百色533000;2.贺州学院,广西542800;3.右江民族医学院附属医院,广西百色533000)

目的 了解桂西地区幽门螺杆菌(Hp)对甲硝唑等抗菌药物产生耐药性的影响因素。方法 采集右江民族医学院附属医院2006年1月至2008年12月确诊为 Hp感染患者的胃窦部黏膜标本进行 Hp分离培养和鉴定,经鉴定后选择374株 Hp菌株,采用纸片扩散法测定其对甲硝唑等抗菌药物的敏感性;利用单因素分析χ2检验及精确概率法分析 Hp对抗菌药物耐药与患者性别、民族、疾病及年龄的关系。结果 Hp对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐药率与患者性别、民族、疾病及年龄的关系差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Hp对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐药与患者性别、民族、疾病及年龄无密切关系。

幽门螺杆菌;耐药性;桂西

目前,幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)对抗菌药物的耐药性是影响 Hp感染根治效果的主要原因,尤其对甲硝唑、克拉霉素和阿莫西林的耐药率逐年增加。因此,Hp耐药菌株的研究已引起人们普遍关注[1]。为了解桂西地区 Hp对甲硝唑等抗菌药物产生耐药的因素,指导临床用药,克服耐药菌株的产生,提高根治率,本研究于2006年1月至2008年12月选择右江民族医学院附属医院就诊的胃溃疡及胃炎患者,从其胃黏膜中分离培养 Hp,并进行了耐药性观察和耐药影响因素分析,现将结果报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象(1)菌株来源:选择2006～2008年在右江民族医学院附属医院就诊并经病理诊断为胃溃疡、胃炎患者共482例,利用胃镜活检钳采集患者胃窦部黏膜,进行 Hp培养鉴定。(2)培养基与试剂:哥伦比亚血琼脂培养基、脑心浸液培养基、螺杆菌添加剂(广州迪景微生物科技有限公司产品);酪蛋白绵羊血(本实验室自制);1%盐酸二甲基对苯二胺溶液、1%α-萘酚-乙醇溶液、3%过氧化氢溶液;Hp快速尿素酶试纸;甲硝唑(5μg/片)、阿莫西林(10μg/片)、克拉霉素(15μg/片)药敏纸片(杭州天和微生物试剂有限公司产品);微需氧袋(含5%氧的小型厌氧产气袋、厌氧塑料袋、厌氧塑料袋封口夹、厌氧指示剂,广州迪景微生物科技有限公司产品);Hp J99标准菌株(中国 Hp保藏中心赠送)。

1.2 Hp培养 把采集的胃窦部黏膜先利用 Hp快速尿素酶实验进行筛选,阳性者则收集保存于脑心浸液培养基中,把培养基置保温瓶中冷冻送回实验室。在无菌工作台上把采集的胃黏膜和脑心浸液倒置在配制好的哥伦比亚血琼脂培养基中,使用手术剪刀快速把黏膜组织剪碎,然后使用L棒在哥伦比亚血琼脂培养基表面把黏膜碎粒涂布均匀,迅速放入厌氧塑料袋,剪开小型厌氧产气袋,放入厌氧指示剂,最后使用厌氧塑料袋封口夹封闭厌氧塑料袋,放置孵箱35℃培养7 d[2]。

1.3 直接涂片染色检查 对分离培养出来的菌落进行革兰染色,染色方法按文献[3],经过染色镜检发现革兰阴性杆菌或革兰阴性弧菌即初步判断为 Hp。

1.4 生化鉴定 对初步判断是 Hp的细菌进行氧化酶试验、触酶试验、快速尿素酶试验[4],3个试验结果均为阳性者即鉴定该细菌为 Hp[5]。

1.5 药物敏感试验 采用纸片扩散法(K-B法)观察 Hp对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐药性。称取哥伦比亚血琼脂培养基38 g,加入1 000 mL蒸馏水,制备血琼脂平板,按每个平皿(直径9 mm)25 mL进行分装。将孵育4 d的 Hp接种于生理盐水试管中,校正浓度至0.5麦氏浊度(相当于1.0×107CFU/mL)。用无菌棉签蘸取菌液,在试管内壁旋转挤去多余菌液后,在哥伦比亚血琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60°,最后沿平板内缘涂抹1周。平板在室温下干燥3～5min后,用无菌镊子将药敏纸片紧贴于琼脂表面,放入微需氧袋,置35℃孵育3～4 d,测量抑菌环大小,记录抑菌圈直径。抑菌环直径大于10 mm判定为敏感,直径为0时判定为耐药;使用 Hp J99标准菌株作为对照。

1.6 统计学方法 应用SPSS12.0统计软件进行统计学数据分析,使用χ2检验及精确概率法。

2 结 果

2.1 Hp对甲硝唑的耐药与患者年龄、性别、民族及疾病的关系 共分离培养 Hp 374株,其中对甲硝唑耐药300株,耐药菌株与患者年龄、性别、民族及疾病的关系相比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1 Hp对甲硝唑的耐药与患者性别、民族、疾病及年龄的关系[n(%)]

2.2 Hp对克拉霉素的耐药与患者年龄、性别、民族及疾病的关系 在分离培养的374株 Hp中,对克拉霉素耐药95株,耐药菌株与患者年龄、性别、民族及疾病的关系相比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表2。

2.3 Hp对阿莫西林的耐药与患者年龄、性别、民族及疾病的关系 在分离培养的374株 Hp中,对阿莫西林耐药49株,耐药菌株与患者年龄、性别、民族及疾病的关系相比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表3。

2.4 Hp耐药株不同地区分布 分布在百色市、田阳县、田林县、凌云县者分别有 117、89、86、82 株,见表4。

表2 Hp对克拉霉素的耐药与患者性别、民族、疾病及年龄的关系[n(%)]

表3 Hp对阿莫西林的耐药与患者性别、民族、疾病及年龄的关系[n(%)]

表4 桂西地区4县 Hp耐药情况[n(%)]

3 讨 论

Hp的感染率在不同国家或地区不尽相同[6～7],耐药率也是一样,发达国家的耐药率比发展中国家低[8-9]。耐药率差异可能与地理分布、民族、经济水平、用药习惯、时间跨度和所采用的药敏实验方法有一定的关系[10-11]。桂西地区处于滇、黔、桂3省交界处,属于边远山区,经济发展比较落后;该地区有壮、汉、谣、苗等民族分布,主要以壮、汉族为主。近几年,由于国家药品采购制度以及抗菌药物使用制度逐渐完善,医师的用药习惯也逐步规范,滥用抗菌药物的现象明显减少,迅速增长的抗菌药物耐药率得到了有效控制[12],但是,由于原发性和继发性耐药的发生,耐药率还是逐年上升。诱导原发性和继发性耐药发生的原因是什么,是否真的与地理分布、民族、经济水平、用药习惯等因素有关?本研究使用了单因素χ2分析 Hp耐药与性别、民族、疾病及年龄的关系,寻找产生耐药性的影响因子,研究结果显示差异无统计学意义。由此可见,桂西地区人群的性别、民族、疾病及年龄并不是 Hp耐药产生的主要影响因素。

本研究结果还显示了桂西地区 Hp耐药菌株的区域分布情况,4县市各抗菌药物耐药率比较没有超过1%。原因可能是该地区地理位置、经济情况、卫生条件等因素的影响,各医院医师的治疗方法以及用药习惯比较一致,致使原发性耐药和继发性耐药的发生差异无统计学意义。

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Study on the affecting factors of helicobacter pylori to the drug resistance in west-Guangxi＊

HUANG Yan-qiang1,OU Ping2,HUANG Zan-song3△,et al.
(1.Department of Microbiology and Immunology of Youjiang Medical College for Nationalities,Baise,Guangxi533000,China;2.Hezhou College,Guangxi542800,China;3.Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities.Baise,Guangxi533000,China)

Objective To study on the affecting factors of resistance of Helicobacter pylori(Hp)to metronidazole,amoxicillin,clarithromycin in west-Guangxi.Methods Gastric mucosa biopsy specimens were taken from the patients in west-Guangxi during 2006-2008.Three hundred seventy-four strains were diagnosed.These strains resistant to metronidazole,amoxicillin and clarithromycin were determined by using K-B diffusion test.The affectting factors of resistance were determined by analyzed the sex,nationality,types of diseases,age of patient.Results The data showed that the resistance rates were no statistical significant difference in the sex,nationality,types of diseases,age of patient(P>0.05).Conclusion The data show that the resistance rates are not a close relationship with the sex,nationality,types of diseases,age of patient.

helicobacter pylori;drug resistance;west-Guangxi

10.3969/j.issn.1671-8348.2010.19.005

R378;R969.3

A

1671-8348(2010)19-2555-03

广西自然科学基金资助项目(0499002);广西教育厅基金资助项目(2004)。△

,电话:(0776)2846532;E-mail:huangzansong@hotmail.com。

2010-04-22

2010-06-08)