嵌顿痔患者外周血Th1/Th2检测分析

1 一般资料与方法

1.1 对象 本组共32例，其中，男18例，女14例，年龄20～60岁。全部为混合痔嵌顿患者。32例均行手术治疗，分别于术前、术后2周抽静脉血5ml肝素钠抗凝。

1.2 检测目的 应用流式细胞仪检测外周静脉血中细胞表面分子标记为CD3+和CD8-的T淋巴细胞中的IL-4 和IFN-γ含量，从而判断外周血中的Th1、Th2漂移现象。

1.3 检测方法 主要仪器：流式细胞仪Epics XL·MCL，美国BECKMAN COULTER公司，低温高速离心机Contifuge Stratos，德国Heraeus公司，旋涡混合器XW－80A江苏省海门市麒麟医用仪器厂。

试剂：PMA、Ionomycin、Monensin美国Sigma公司出品，抗体和破膜剂。以下均为法国Immunotech公司出品：细胞表面标记抗体：CD3-Pc5，CD8-FITC；细胞内因子抗体：IL-4-PE，IFN-γ-PE；同型对照：Rat IgG1-PE(对应于IL-4-PE)，Mouse IgG1-PE(对应于IFN-γ-PE)；破膜剂：IntraPrep破膜剂。

1.4 实验方法 晨起空腹血5ml用肝素纳抗凝。取一只试管，加入200μl血液和200μlRPMI1630。加入10μlPMA工作液＋8μl50μg/ml Ionomycin工作液＋6.8μl 0.1mg/mlMonensin工作液，混匀。置于37℃，5%CO2培养箱4～6小时。取出混匀，加入20μlCD3-PC5和20ulCD8-FITC，室温避光孵育15分钟。分成4管，每管加入100μl已染色的全血，编号为A1,A2,A3,A3。每管中加入100μl IntraPrep中的Reagebt A（固定液），室温，避光孵育15分钟。每管中再加入3mlPBS，1500rpm离心5分钟，弃除上清。再每管中加入100μlIntraPrep中的Reagent B（破膜和溶血液），同时各管中按附表1加入相应的抗体各10μl，室温，避光孵育15分钟。每管中加入3mlPBS，1500rpm离心5分钟，弃除上清。取0.5ml PBS重悬细胞，上机检测。

2 结果

手术前后的外周血单个核细胞经PAM诱导后CD3+/CD8-/IFN-γ+和CD3+/CD8-/IL-4+流式细胞分析结果。见附表。

经Excel平均值的成对双样本分析，对各组数据进行两两检验。手术前与手术后各组数据比较均有非常显著性差异（P＜0.001），手术前组患者的CD3+IL-4+含量高于手术前组的CD3+IFN-γ+（P＜0.05），手术前组患者的CD8+IL-4+含量也高于手术前组的CD8+IFN-γ+（P＜0.05），而手术后各组数据比较没有显著性差异（P＞0.05）。

附表1 试管抗体对照

附表2 各组PBMC中CD3+/CD8-lL-4+和CD3+/CD8-lFN-γ+的含量（ng/l）比较 （）

附表2 各组PBMC中CD3+/CD8-lL-4+和CD3+/CD8-lFN-γ+的含量（ng/l）比较 （）

3 讨论

关于痔疮病因的解释，目前大都只停留在解剖学的层面上。

临床发现，各期的痔疮病人，都有静止期和发作期。只有发作期的病人会有出血或疼痛出现。发作期的痔疮表现为充血水肿、血栓形成，呈现急性炎症反应，但细菌感染的迹象不明显，极少出现化脓性结局。

痔疮发作常常有“情志”方面的病因，如情绪激动特别是大怒，痔疮出现的炎症反应无法完全用局部“括约肌痉挛”等单一因素解释。全身性因素应该在痔疮发作的过程中扮演重要角色。

人体各个部位的炎症反应，都与免疫反应有关。免疫反应不外乎体液免疫和细胞免疫。辅助T细胞Th1/Th2功能上的划分大大提高了人们对免疫反应极化的认识。近年的研究揭示，体内的T辅助细胞（严格意义上是Th0细胞）在各种生理与病理条件下可分化为Th1和Th2细胞。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-α和IFN-γ，最特异分泌的细胞因子是IFN-γ+，Th2细胞则主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10,最特异分泌的细胞因子IL4 +，IL-4和IFN-γ常互相排斥。Th1细胞是细胞毒性T细胞，活化I型免疫效应在抗病毒感染和细胞内细菌感染的免疫应答中发挥作用。而Th2细胞活化II型免疫反应与感染的持续进展和慢性化有关，对微生物感染具有负反馈调节作用。Th1细胞可抑制Th2细胞的作用，反之亦然，外源性IL-4可使T前体细胞向Th2细胞分化，而IFN-γ则可抑制其向Th2细胞分化。

本文检测表明，嵌顿痔病人发病时血中T细胞免疫系统被激活，外周血中Th2细胞占优势，Th2型反应模式处于优势状态。推测嵌顿痔的发病是在 Th2优势反应模式状态下，出现的血管扩张明显、血管通透性显著增强等。这种血流变学动态变化使白细胞外渗阈值明显降低。这样的结果首先是出现水肿，继而是疼痛和括约肌痉挛，导致静脉淋巴的回流受阻，从而引发更严重的水肿及血管破裂出血、血栓形成。

然而，由于体内细胞因子的网络调节系统非常复杂，不同的细胞因子可以产生相同的作用，而同一个细胞因子在不同的细胞和不同条件下亦能产生相反作用。只测定一种细胞因子或研究一个环节，而推测整个过程或整个网络作用的结论，很可能会出现偏差。因此，对于Th1和Th2细胞免疫功能对血栓性痔的影响，必须充分认识细胞因子作用的多样性和复杂性，全面分析和综合考虑。