长柱金丝桃抗抑郁作用有效部位的实验研究

杨连荣,张哲锋,齐乐辉,杨军涛,王金杰,李彦冰

(1.黑龙江中医药大学,哈尔滨150040;2.黑龙江省兽药饲料监察所,哈尔滨150069)

长柱金丝桃又名红旱莲、湖南连翘,系藤黄科金丝桃属植物黄海棠(Hypericum ascyron L.)的全草[1],具有凉血止血、平肝消肿、散结排脓、清热解毒等功效.该植物可用于抗抑郁症、抗病毒、抗癌等[2-3].生于荒坡、山野、路边,我国东北地区及黄河、长江、珠江流域均有分布.近年研究表明,该属植物具有抗抑郁等药理活性[4-8].本研究在长柱金丝桃抗抑郁药效学研究的基础上[9],选用小鼠强迫游泳模型对其抗抑郁有效部位进行了筛选研究,以便为该植物的进一步开发提供理论依据.

1 实验材料

1.1 动物

昆明种雌性小鼠,(20±2)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供,饲养在25℃条件下,自由进食饮水,实验前稳定3 d.

1.2 药物

阳性对照药:百忧解(盐酸氟西汀),美国礼来公司生产,礼来苏州制药有限公司分装,批号A202606,实验前用蒸馏水配成1 mg/mL(以氟西汀计)的溶液;长柱金丝桃(产地为黑龙江省尚志市,经黑龙江中医药大学药学院于加宾教授鉴定为Hypericum ascyron L.);0.9%生理盐水.

2 实验方法

2.1 样品的制备

长柱金丝桃全草,用80%乙醇回流提取,回收乙醇,减压干燥,干浸膏经热水处理得A(溶于热水)部分,B(沉淀)部分,称取A、B部分适量,分别用蒸馏水溶解,配制成每毫升相当于0.5 g生药量的溶液,备用.经预实验后,称取A部分适量,上聚酰胺层析柱,分别以水、生药量质量分数30%乙醇、生药量质量分数95%乙醇和生药量质量分数3.5%氨水洗脱,得到各洗脱部分,备用.

2.2 小鼠强迫游泳实验

100只小鼠随机分组,每组10只.空白对照组和百忧解组实验前24、5 h均灌胃给予生理盐水20 mL/kg,实验前1 h空白对照组继续给予生理盐水,百忧解组灌胃给予配好的盐酸氟西汀溶液20mL/kg,其余组实验前24、5、1 h均分别灌胃给予配好的药液,按20 mL/kg给药.

小鼠绝望时间的测定:将小鼠放入高20 cm,直径14 cm的圆柱型玻璃杯中,每缸1只,用纸板隔离各玻璃杯,杯中水深l0 cm,水温控制在(25±1)℃,每做完一只后即换水.小鼠游泳时间为6 min,累计后4min内小鼠不动时间.整个过程用数码摄像记录,结果评判由非实验人员完成,以保证结果客观.所谓不动是指小鼠在水中停止挣扎,或呈漂浮状态,仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面.

2.3 统计学分析

数据以均数 ±标准差(¯x±S)表示,显著性检验采用SPSS16.0统计软件进行单向方差分析,以P≤0.05为差异有显著性统计学意义.

3 数据及结果

3.1 样品A、B部分对小鼠强迫游泳绝望行为的影响

表1结果表明,长柱金丝桃全草的质量分数为80%乙醇提取物,经热水处理所得的A部分能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间,与空白对照组比较,提取物A(按生药量计10 g/kg)有显著性差异,提取物B没有显著性差异,故对A部分进行进一步筛选.

表1 A、B部分对小鼠绝望行为的影响(n=10)

表1 A、B部分对小鼠绝望行为的影响(n=10)

注:与空白对照组比较*P＜0.05,**P＜0.01

组别 剂量/(g◦kg-1)游泳不动时间/s空白组-125.30±26.66百忧解组(以氟西汀计)0.02 73.90±22.25**提取物A组(含生药量)10 99.30±27.02*提取物B组(含生药量)10 115.60±23.22

3.2 各洗脱部分对小鼠强迫游泳绝望行为的影响

表2结果表明,提取物A的30%乙醇洗脱部分能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间,与空白对照组比较,30%乙醇洗脱部分(按生药量计10 g/kg)有显著性差异,其余部分没有显著性差异,表明此部分在行为绝望动物模型上有抗抑郁作用,是其抗抑郁有效部位.

表2 各部分对小鼠绝望行为的影响,n=10)

表2 各部分对小鼠绝望行为的影响,n=10)

注:与空白对照组比较*P＜0.05,**P＜0.01

组别 剂量/(g◦kg-1)游泳不动时间/s空白组-123.10±32.64百忧解组(以氟西汀计)0.02 63.50±31.70**水洗脱组(含生药量)10 112.80±22.61 30%乙醇洗脱组(生药量质量分数)10 88.70±16.10**95%乙醇洗脱组(生药量质量分数)10 115.70±29.56 3.5%氨水洗脱组(生药量质量分数)10 113.50±24.09

4 结 语

抑郁动物模型对抗抑郁药的研究至关重要,强迫游泳实验是利用动物行为绝望而设计的一种经典的抗抑郁评价模型,它提供了一个无法回避的压迫环境,作为一种应激源可诱导小鼠的绝望行为,不同作用机制的抗抑郁药物可选择性缩短小鼠强迫游泳不动时间,提高对应激的耐受性.由于该望模型操作简单快捷,被广泛用于抗抑郁药物的筛选和评价[10].

实验研究发现,生药量质量分数30%乙醇洗脱部分能明显缩短小鼠强迫游泳绝望时间,并在此基础上判断其为抗抑郁有效部位,对于具体的活性成分及其机制有待进一步研究.

[1]朱有昌.东北药用植物[M].哈尔滨:黑龙江科技出版社,1989:743.

[2]谢宗万.全国中草药汇编[M].北京:人民卫生出版社,2000:396

[3]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社.1997,1002-1003.

[4]徐 立,魏翠娥,赵明波,等.贯叶金丝桃总黄酮对小鼠抑郁症模型的实验研[J].中国中药杂志,2005,30(15):1184-1188.

[5]王卫星,胡新颖,刘 鹏,等.金丝桃苷等10个天然黄酮类化合物的抗抑郁活性筛选研究[J].中草药,2007,38(6):900-902.

[6]BUTTERWERK V,JURGENLIEMKG,NAHRSTEDTA,etal.Flavonoids from Hypericum perforatum show antidepres santactivity in the forced swimm ing test[J].Planta Med,2000,66:3-6.

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[9]李彦冰,杨 萍,范 锋,等.长柱金丝桃提取物抗抑郁作用的研究[J].中国中医药科技,2007,14(增刊):6-7.

[10]郑丽芳,明 亮.抑郁症动物模型的研究与应用[J].安徽医药,2005,9(11):801-804.