李春实,韩映晨,姜茁松
(1.吉林省食品药品检验所,吉林 长春 130033;2.吉林省延边州食品药品检验所,吉林 延吉 133000)
五加参归芪精质量标准研究
李春实1*,韩映晨2,姜茁松1
(1.吉林省食品药品检验所,吉林 长春 130033;2.吉林省延边州食品药品检验所,吉林 延吉 133000)
目的:建立五加参归芪精质量标准。方法:采用薄层色谱法对制剂中的刺五加、黄芪进行鉴别,采用高效液相色谱法对制剂中刺五加进行定量测定。结果:薄层色谱清晰,分离效果好,阴性无干扰;紫丁香苷在0.020 12~0.201 2μg与峰面积呈良好的线性关系,Y=2 991 491.4X-10 253.3,(r=1.000 0),平均回收率为99.7%,RSD=1.4%。结论:本方法可靠、有效、专属性强,可用于该制剂的质量控制。
五加参归芪精;TLC;刺五加;黄芪;质量标准
五加参归芪精是由刺五加、黄芪、当归3味中药组成,具有扶正固本,补气固表,补血养血等功效。用于久病衰弱,失眠自汗,腰膝酸软,气短心悸[1]。本品收载于 《卫生部药品标准·中药成方制剂》第二册,原标准中没有鉴别方法与含量测定方法。为有效控制其质量,对该产品的质量标准进行了研究,用薄层色谱法对制剂中的刺五加、黄芪进行定性鉴别,对刺五加中紫丁香苷的含量采用高效液相色谱法进行测定。
日本岛津LC-2010C高效液相色谱仪;紫丁香苷对照品(批号111574-200201)、异秦皮啶对照品(批号0837-200203)、黄芪对照药材均购自中国药品生物制品检验所。乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。
五加参归芪精(修正药业集团通化市制药有限公司,批号20060301,20060302,20060303;抚松县中药责任有限公司,批号20060902)。
2.1.1 刺五加的鉴别 取本品25mL,置分液漏斗中,用三氯甲烷提取2次,每次20mL,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取异秦皮啶对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照无干扰,见图1。
2.1.2 黄芪的鉴别 取本品10mL,加水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10mL,合并正丁醇液,加正丁醇饱和的氨试液洗涤2次,每次10mL,弃去氨试液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g,加甲醇20mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL溶解,同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液与对照品溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰,见图2。
2.2.1 色谱条件 采用 Agilent-HC C18(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-水(5∶95);流速:0.8mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:265nm;理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于4 000。
2.2.2 对照品溶液的制备 取紫丁香苷对照品适量,精密称定,加水制成每1mL含20μg的溶液,即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品10mL,加三氯甲烷20mL萃取,弃去三氯甲烷液,取水层滤过,取续滤液,即得。
2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例取相当于5mL中所含群药适量(无刺五加),按工艺制备阴性对照样品,再按2.2.3项下制备方法制备阴性对照溶液。量取5μL注入液相色谱仪,结果阴性对照无干扰,见图1。
图1 五加参归芪精中刺五加TLC图
图2 五加参归芪精中黄芪TLC图
2.2.5 系统适应性试验 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5μL,注入液相色谱仪,记录峰面积,按外标法以峰面积计算,即得。HPLC图见图3~5。
图3 紫丁香苷对照品HPLC图
图4 五加参归芪精供试品HPLC图
图5 缺刺五加的阴性对照HPLC图
2.2.6 标准曲线的绘制 取紫丁香苷对照品适量,精密称定,加水制成每1mL含20.12μg的溶液,分别精密吸取1,3,5,7,10μL测定,以对照品进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程Y=2 991 491.4X-10 253.3(r=1.000 0),紫丁香苷在0.020 12~0.201 2μg与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度试验 取紫丁香苷对照品溶液,照上述色谱条件,连续进样6次,每次5μL,记录峰面积,计算RSD=1.8%。
2.2.8 稳定性试验 取供试品溶液,按上述色谱条件测定,分别于0,4,10,15,24h进样5次,每次5μL,记录峰面积,计算RSD=2.1%,说明紫丁香苷的含量比较稳定。
2.2.9 重复性试验 取本品(批号20060301),照上述供试品溶液制备方法,分别配制6份供试品溶液进行测定,计算含量,其平均含量为0.018mg·mL-1,RSD=2.0%。
2.2.10 加样回收试验 精密量取本品(批号20060301)5mL与对照品溶液(0.020 12mg·mL-1)5mL,依法测定,结果见表1。
表1 紫丁香苷加样回收率试验
2.2.11 样品含量测定 按上述方法测定4批样品中的紫丁香苷含量,每批平行测定2份,结果见表2。
表2 样品中紫丁香苷含量测定mg/粒
本试验增加了刺五加、黄芪的薄层鉴别。所建立的方法斑点清晰,耐用性好,重现性好。曾考察过当归(水煎)的薄层鉴别方法,但没有找到合适的方法。在含量测定项下,预试验中曾采用 《中国药典》2005年版一部刺五加药材项下流动相[2],但分离效果不好。采用本试验的色谱条件分离效果好,而且灵敏度高,调节信噪比约为3,测得的最低检出限为1.006ng;调节信噪比约为10,测得的定量限为3.018ng,而且对不同品牌的色谱柱耐用性良好。本实验采取的方法可靠、有效、专属性强,可用于该制剂的质量控制。
[1]卫生部.卫生部药品标准·中药成方制剂(第二册)[S].1990:34.
[2]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005:143.
Quality Standard for Wujiashenguiqi Oral Liquid
Li Chunshi1,Han Yingchen2,Jiang Zhuosong1
(1.Jilin Provicial Institute for Food and Drug Control,Changchun Jilin130033,China;2.Jilin Provicial Yanbian Institute for Food and Drug Control,Yanji Jilin133000,China)
Objective:To set up the quality standard for Wujiashenguiqi oral liquid.Methods:Acanthopanax and membranous milkvetch in preparation were identified by TLC.The content of acanthopanax in the Wujiashenguiqi Oral liquid was determined by HPLC.Results:The spot on the thin layer plate was clear and the negative control was no disturbed.The linear range of syringoside was 0.020 12~0.201 2μg.The average recovery was 99.7%with RSD of 1.4%.Conclusion:The method is reliable,accurate and specific,It can be used for quality control of Wujiashenguiqi Oral liquid.
Wujiashenguiqi Oral liquid;TLC;Acanthopanax;Membranous milkvetch;Quality standard
*李春实,E-mail:piaozhe0007@yahoo.com.cn
2010-02-05)