马齿苋对猪大肠埃希菌抑菌作用观察*

邬苏晓,肖正中

(广东省韶关学院农业科学系,广东韶关 512005)

猪大肠埃希菌病是由致病性大肠埃希菌感染引起猪的一种肠道传染病,临床主要引起仔猪黄、白痢和水肿病的发生,是猪场的常见病和多发病。随着我国养猪业集约化程度的不断提高,病原性大肠埃希菌对养猪业造成的损失日超严重,严重影响着养猪业的发展。抗菌药物和猪大肠埃希菌疫苗在养猪业上的广泛使用,极大地促进了现代养猪业的发展。但在养猪生产中对抗菌药的广泛使用及不规范用药不仅导致了大肠埃希菌多重耐药性的产生,同时也造成了畜产品药物残留而严重危害人类健康及公共卫生[1-2]。

我国中草药资源丰富,许多中草药已经被证实具有抗菌作用,并被广泛使用[3]。中草药以成本低廉、效果持久、毒副作用小、不易产生耐药性等特点日益受到人们的青睐。因此,使用中草药代替抗菌药物对促进畜禽生长及抗病都具有重要的意义[4-5]。马齿苋为马齿苋属植物的全草,其性味酸、寒,具有清热解毒、散血消肿、抑菌消炎、润肠止痢等作用[6-7]。马齿苋煎剂对各种类型的痢疾杆菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用,对某些致病性真菌也有抑制作用。近年来的多项试验也证明,马齿苋对提高畜禽生产力,减少和预防畜禽疾病起着重要作用[8-11]。本试验以猪大肠埃希菌为试验对象,以马齿苋为受试药物,通过对其体内外抗菌作用的观察和分析,旨在为猪大肠埃希菌病的临床防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 马齿苋,购自韶关市美康大药房。

1.1.2 培养基 普通琼脂培养基、牛肉膏汤培养基均按常规方法制备,高压灭菌,置4℃冰箱保存备用。

1.1.3 试验菌株 猪大肠埃希菌,由本实验室分离保存。

1.1.4 实验动物 清洁级ICR小鼠55只,购自中山大学实验动物中心,雌雄各半,体重18 g～22 g,3周龄～4周龄。

1.2 方法

1.2.1 马齿苋水提取物的制备 马齿苋50 g,水煎法制备水提物,经离心、过滤、浓缩使其浓度相当于1 g/mL生药,调 pH 至7.4左右,高压蒸汽灭菌,-20℃保存待用。

1.2.2 受试菌株的培养 将猪大肠埃希菌接种于牛肉膏汤培养基,37℃培养16 h～18 h,连续培养3代,以恢复其活力。用灭菌生理盐水稀释培养液,使其浊度分别达到1×107cfu/mL和1×109cfu/mL,备用。

1.2.3 马齿苋体对猪大肠埃希菌体外最小抑菌浓度测定 采用试管两倍稀释法测定马齿苋对猪大肠埃希菌的体外最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。取6支灭菌试管,分别加培养基2 mL,第1管加2 mL灭菌中药水提物,混匀后吸取2 mL加至第2管,依次类推,直至第4管,第4管吸取2 mL弃去,使之成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16的浓度梯度,然后在1号～4号试管内各加入1×107cfu/mL 菌液50 μ L,第5管、6管分别作培养基对照和中药对照。将6支试管置于37℃温箱培养24 h观察细菌生长情况,以无菌生长的最低稀释浓度为最小抑菌浓度(MIC)。

1.2.4 猪大肠埃希菌对小鼠最小致死量测定 小鼠20只,分为4组,每组5只;分别腹腔注射1×109cfu/mL大肠埃希菌新鲜培养液 0.1、0.2、0.3、0.4 mL,隔离饲养,连续观察72 h,记录小鼠死亡情况。

1.2.5 小鼠体内抗菌作用 小鼠35只,随机分为7组,每组5只。其中试验预防组在注射菌液前1 h先腹腔注射一定剂量的1 g/mL中药水提物,1 h后再注射最小致死量菌液;试验治疗组在注射最小致死量菌液后1 h用1 g/mL的中药水提物适量给以治疗,8 h后用同样剂量重复给药1次;感染对照组小鼠注射最小致死菌量,空白对照组注射蒸馏水。24 h～48 h后观察小鼠死亡情况。

2 结果

2.1 马齿苋对猪大肠埃希菌MIC测定

用试管二倍稀释法测定马齿苋对猪大肠埃希菌体外抑菌作用。结果表明,马齿苋对猪大肠埃希菌具有较强的体外抑菌作用,其最小抑菌浓度(MIC)为 0.125 g/mL(表 1)。

表1 马齿苋对猪大肠埃希菌体外最小抑菌浓度(MIC)Table 1 M IC of Portulaca on E.coli in v itro

2.2 猪大肠埃希菌对小鼠最小致死量测定

通过小鼠腹腔注射不同剂量猪大肠埃希菌新鲜培养菌液观察小鼠死亡情况,结果显示猪大肠埃希菌对小鼠最小致死量为0.3×109cfu(表2)。

表2 猪大肠埃希菌对小鼠最小致死量Table 2 Minimum lethal dose of E.coli in mice

2.3 马齿苋对感染猪大肠埃希菌小鼠的体内抗菌试验

以小鼠为试验动物进行马齿苋对猪大肠埃希菌的预防性和治疗性试验,结果表明,马齿苋在小剂量时对猪大肠埃希菌无抗菌作用,增大剂量药物本身的毒副作用会致死小鼠,剖检可见小鼠肠道胀气(表3)。

3 讨论

本试验表明,马齿苋对猪大肠埃希菌具有较强的体外抑菌作用,但体内抗菌作用显示无效,其中小剂量药物对猪大肠埃希菌无抗菌作用,增大剂量药物本身的毒副作用又会致死小鼠。

马齿苋在我国分布广泛,其诸多的生理功能及临床应用多见报导。张昆仲等[12]报导马齿苋对猫心收缩力有加强作用并使血压降低,伴随呼吸兴奋及肠管张力降低、肠蠕动减弱的作用;刘霞[13]报道,马齿苋对小鼠小肠运动具有抑制作用;李洋[14]报道,马齿苋提取物对离体大鼠的小肠平滑肌具有兴奋作用,但当马齿苋提取物超过一定量时,小肠平滑肌活动由兴奋转为抑制。本试验中马齿苋水提物1 500 mg/kg腹腔注射造成小鼠肠道胀气可能和马齿苋剂量过大导致小鼠肠道蠕动过慢有关。

表3 马齿苋对猪大肠埃希菌的预防性和治疗性试验Table 3 Prevention and therapy experiments of Portulaca against E.coli

马齿苋具有良好的清热解毒、抗菌消炎、散血消肿之功效,其能提高畜禽生产力,减少和预防畜禽疫病,且无药物残留,具有较高的开发利用价值,但兽医临床使用须注意选择合适的用药途径,适当的剂型及剂量,以提高其疗效,减少其毒副作用。

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