乙型肝炎病毒核酸DNA定量检测与标志物酶免检测的相关性分析

周 洪

重庆市渝北区人民医院检验科（401120）

中国是乙型肝炎病毒感染率较高的国家，已知的传播途径有多种[1-3]。乙型肝炎病毒治疗周期较长，病毒对药物也存在耐受性，乙型病毒肝炎如果治疗不规范、及时和彻底，可以引起肝硬化、转化为慢性肝肝纤维化、肝癌的可能。乙型肝炎病毒患者的诊断、治疗、疗效观察离不开对病毒的检查。现目前大多（尤其在区县级医疗机构）首选乙型肝炎病毒标志物酶免五项（两对半）测定，病毒标志物酶免测定不能直接真实地反应体内乙型肝炎病毒含量情况，乙型肝炎病毒核酸DNA定量测定才能直接反应乙型肝炎病毒存在、活动性复制及具传染性的可靠指标[4]。乙型肝炎病毒核酸DNA定量检测与乙型肝炎病毒标志物酶免检测不同模式之间的相关性评价已有文献报道[5,6]，本实验以核酸DNA扩增量级分组，不以组合模式分析结果，而分别以HBsAg（s/co）、HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1（s/co）单独分析各项之间的关系，希望能为乙型肝炎患者、临床提供更多的、有价值的信息。现将134例乙型肝炎患者同时作乙型肝炎病毒核酸DNA定量检测和病毒标志物酶免检测的相关性分析报道如下。

1 资料与方法

1.1 检测对象

随机留取重庆市渝北区人民医院检验科乙型肝炎病毒标志物检测HBsAg阳性患者标本134例。

1.2 仪器及试剂

中山达安DA7600基因扩增仪，中山达安HBV核酸DNA扩增试剂；上海科华实业公司乙型肝炎病毒标志物检测酶免两对半试剂。

1.3 方法

对134例血清标本分别进行HBV DNA基因扩增（荧光定量PCR法）和酶免标志物HBsAg、HBeAg、HBeAb、Pre-S1四项检测。以HBV DNA基因扩增数量级分组：DNA＜1×103为A组，1×103～1×104为B组、1×104～1×105为C组、1×105～1×106D组、1×106～1×107为E组、＞1×106为F组。HBV DNA基因扩增数取对数值表示，其他项值为s/co值。

1.4 统计学处理

采用SAS 6.12版统计学软件；HBV DNA基因扩增数取对数值，HBsAg、HBeAg、HBeAb、Pre-S1取“s/co”值，以χ—±s表示，行每组各项分别与A组比较进行t检验（表1）；列HBV DNA项各组分别与其他项各组进行相关性分析。

2 结 果

2.1 134例乙型肝炎HBsAg阳性血清标本，HBV DNA＞1×103有100例，阳性率74.6%。

2.2 HBV DNA各组别与DNA＜1×103比较有极显著性差异，P＜0.01。

2.3 标志物HBsAg酶免检测各组无显著性差异P＞0.05。

2.4 HBeAg、HBeAb和Pre-S1各项HBV DNA＜1Х105以下各组无显著性差异，HBV DNA＞1×105以上各组有显著性或极显著性差异P＜0.01或P＜0.05。

2.5 HBV DNA值与HBsAg（s/co）不相关r=0.091；HBV DNA值＜1×105以下组与HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1不相关r＜0.100；HBV DNA值＞1×105以上组与HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1相关r＞0.600，与HBeAb（s/co）呈负相关。

表1 乙型肝炎病毒DNA核酸扩增定量检测与酶免标志物检测结果 （±s）

表1 乙型肝炎病毒DNA核酸扩增定量检测与酶免标志物检测结果 （±s）

注：1.各组分别与A组比较：*表示 P＜0.01，⊿表示 P＜0.05，t、检验；2.DNA对数均值项各组分别与HBsAg（s/co）、HBeAg（s/co）、HBeAb（s/co）、Pre-S1（s/co）各项各组进行相关性分析：r表示P＜0.01，y表示P＜0.05

组别例数 DNA对数均值 HBsAg（s/co） HBeAg（s/co） HBeAb（s/co） Pre-S1（s/co）A 34 2.03±0.64 17.4±6.36 0.14±0.13 0.41±0.77 0.81±2.36 B 26 3.50±0.29* 17.9±7.09 1.85±3.92 1.64±2.96 2.29±4.17 C 12 4.25±0.15* 20.7±1.82 ⊿ 0.10±0.05 0.11±0.11⊿ 0.18±0.075 D 65.55±0.40* 24.9±2.66 9.44±9.33y 0.64±0.58 9.87±9.77*y E 24 6.51±0.29* 19.9±3.63 16.7±4.60*r 6.54±4.95*y 12.3±8.62*r F 32 7.37±0.24* 18.5±4.30 13.6 ±6.98 *r 4.83 ±2.67*y 10.9 ±7.81*r

3 讨 论

3.1 乙型肝炎病毒HBsAg为病毒蛋白质外壳、1963年在澳大利亚土著人血中发现，又称为澳大利亚抗原，HBV感染后，大多数感染者外周血中可出现HBsAg，它不能直接真实地反应乙型肝炎病毒体内复制和存活病毒情况，有的仅仅就一蛋白外壳，根本就无病毒核酸存在，也存在体内血液循环中，HBsAg仅为乙型肝炎病毒感染的标志，不能反应病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后，而HBV DNA为乙型肝炎病毒核酸。HBsAg与HBV DNA检测的不一致性可也排除标本脂血、溶血等的影响[7]。HBV DNA检测与HBsAg酶免检测不一致性有两种情况：一是HBsAg阴性，而HBV DNA检测阳性，这种情况可能是HBsAg酶免检测灵敏度低的原因造成的；另一种是HBsAg阳性，而HBV DNA检测阴性的原因：一是HBV DNA含量低，低于1×103以下，二是血中存在的HBsAg是由HBV DNA整合到人染色体与宿主基因共同表达所致，测不到血清中的DNA[8]。故HBsAg阳性血清HBV DNA核酸定量检测不一定都＞1×103。HBV DNA核酸定量检测与酶免HBsAg检测无相关性。

3.2 HBeAg 为HBcAg的可容部分，二者有75%共同的氨基酸序列。HBeAg与病毒Dance颗粒、HBV DNA具有伴随关系，是HBV复制活跃的血清学指标，所以，HBeAg项HBV DNA高低载量有极显著性差异。有文献报道，HBsAg/HBeAg/抗-HBc阳性模式与HBV DNA存在相关性，HBeAg阳性血清HBV DNA PCR检测几乎全为阳性，并且大部分含量＞107[9]。所以，HBeAg含量与HBV DNA高载量有相关性。

3.3 当血清HBeAg转阴后，可出现HBeAb，说明病毒复制减少，传染性减弱，HBeAb为病情好转的指标，也是乙型肝炎病毒治疗血清学转型的一个标准。所以HBeAb与HBV DNA负相关。

3.4 由以上实验结果可以得出，仅仅依靠乙型肝炎病毒标志物抗原抗体的检测，不能准确判断病毒复制的程度及传染性的强弱，也不是体内病毒的真实反应；可能存在的因试剂方法的局限性、病毒变异等所致假阴性和假阳性，以及对检测结果的进一步确认和适当的解释[10]，对HBV感染血清标志物检测的正确使用有重要意义PCR方法动态检测HBV DNA是评价病毒载量，疗效观察的最可靠方法。

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