温和型禽流感的诊断和防治

周勇岐，毛火云，尹秀凤

（南京天邦生物科技有限公司，江苏南京 211102）

温和型禽流感的诊断和防治

周勇岐，毛火云，尹秀凤

（南京天邦生物科技有限公司，江苏南京 211102）

根据临床的致病性表现不同，临床上将禽流感分为了高致病性、温和性和无致病性三类。前者表现明显临床症状或高死亡率，后者不表现任何发病迹象，温和型禽流感则介于两者之间，而并非严格的学术分类类型。温和型禽流感常以低死亡率、轻度的呼吸道感染、产蛋率下降及抵抗力低下等为临床症候群。而发病严重程度与病毒毒力、动物敏感性、饲养条件和并发症等多种因素相关，所以，除部分高致病性的H5和H7亚型病毒外，几乎所有禽流感病毒株（如H1～4、H6和H8～15等，目前以H9最为常见）都可能成为温和型禽流感的原发性病原。温和型禽流感具有病原多样性、症状非典型性、宿主与流行范围广泛等特点，给本病的诊断与防治工作带来较大难度。

一、流行特点

（一）自然宿主在自然条件下温和型禽流感可以感染各种日龄的肉鸡和蛋鸡，该病毒也可感染各种野生鸟类、水禽和珍禽，但不一定发病。

（二）传播途径禽流感病毒可存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和脏器组织中，健康禽可通过与病禽直接接触或与病毒污染物间接接触而感染。眼、鼻、口腔分泌物、粪便或死禽尸体及其污染的任何物体，如饲料、饮水、禽舍、空气、笼具、饲养管理用具、运输车辆、昆虫以及各种携带病毒的鸟类等均可进行机械性传播。

（三）易感动物各种日龄的禽类均可发生，但临床多发或具备诊治价值的为蛋禽群和肉鸡群，特别是蛋鸡和肉鸡。

（四）发病诱因气候多变，饲养管理不当，密度过大，通风不良、有害气体过多损伤上呼吸道黏膜，都是温和型禽流感发生的诱因。本病一年四季均可发生，但多发于秋冬季节，尤其是秋冬交界、冬春交界气候变化大的时节。

二、临床症状

病毒的致病性对禽流感的临床表现影响很大，其他一些影响因素包括宿主种类、年龄、性别、并发感染情况、获得性免疫应答水平和环境等。温和型禽流感常常突然发生于非免疫或免疫后不久的鸡群，临床上多与传染性支气管炎病毒、新城疫、细菌和支原体等发生混合感染。

发病初期无论是肉鸡还是蛋鸡多出现轻微的呼吸道症状，有继发感染时可能出现严重呼吸困难，个别鸡只精神沉郁，采食缓慢下降。因症状轻微临床上往往被忽视，或为继发感染所掩蔽而误诊。

温和型禽流感在粪便上表现为初期只是拉稀，中后期拉黄、绿或黄绿融合的粪便，后期有部分或少量的拉橘黄色稀便，这个特点对鉴别非典型鸡新城疫具有重要意义，蛋鸡表现的更是明显。

蛋禽会出现产蛋量下降，2～3 d或1周时间下降10%～50%，高则可达70%，同时软壳蛋、褪色蛋、沙皮蛋、畸形蛋增多，鸡群康复后产蛋率恢复缓慢或达不到预期高峰。

随着病情发展，个别病鸡会有肿头，眼睑周围浮肿，有的冠和肉髯边缘因淤血呈暗紫色，肉髯可变厚、硬，触之有热感，有时出血，腿部鳞片有出血斑等症状。

种鸡、蛋鸡和产蛋鸭死亡率较低，病期每天死亡约0.5%左右，累计在10%以下；肉仔鸡混合感染较多发，死亡率可高达10%～40%。

三、病理变化

温和型禽流感一般极少有直接致死性现象，病死禽多伴有其它病原混合感染，病变部位与病变程度随宿主种类及并发感染情况而变化。因此，临床诊断应同时解剖死禽尸体和发病活禽，以综合判断。

发病鸡主要表现呼吸道出现卡他性、纤维蛋白性、浆液纤维素性、粘脓性或纤维素性脓性的炎症，气管黏膜充血水肿，偶尔出血。在发病后期继发细菌感染气管渗出物从浆液性变为干酪样物质，特别是肉仔鸡常见两侧支气管栓塞。

温和型流感也可能导致纤维素性腹膜炎，腹腔纤维素性炎性物多呈黄色。蛋鸡发病后期可能出现卵黄性腹膜炎或输卵管炎症，蛋壳钙沉积减少，蛋形变异并且易碎，色素沉着减少使蛋色变淡。

温和型禽流感的病鸡肝脏呈紫黑色，部分引起盲肠扁桃体出血、腺胃乳头边缘性出血，十二指肠淋巴集结弥散性出血，蛋仔鸡或肉鸡胸腺出血或肿大等。

水禽病变主要产生呼吸道病变如窦炎，结膜炎和其他呼吸道损伤。通常并发细菌感染。

四、诊断

本病的临床症状与病理变化呈多种病理形式，通常结合上述流行病学、临床症状和病理变化可做出初步诊断。进一步确诊，必须进行病毒分离、血清学诊断和分子生物学诊断。

（一）样品的采集和保存禽流感病毒存在于病禽的所有组织、分泌物和排泄物中，进行病毒分离时首先要采集病料。急性的病禽以肝、脾、脑为好，呼吸道症状明显的病禽以气管、肺、气囊、鼻窦渗出物为好，放到干净（最好是灭菌的）的包装物内快速送实验室检验。临床或亚临床症状鸡群可以采集气管或泄殖腔搽拭样品，置于灭菌的转移液中，并加入青霉素等抗生素以阻止细菌的生长，快速送检。如果样品能够在48 h内送实验室检测，可以放在4℃，样品需更长时间保存或运输，最好冷冻保存（-70℃～-15℃），温度越低可保存时间越久。

（二）病毒的分离和鉴定病毒分离最好使用SPF鸡胚（条件不具备的可选用健康非免疫鸡胚），在病毒分离前，应该将样品剪碎后用生理盐水配成5%～10%的悬液，冻融2～3次，通过离心来去除杂质，取上清通过液尿囊腔接种9～10日龄鸡胚，弃去24 h内死亡的鸡胚，将24 h后死亡的或72 h后没有死亡的鸡胚冷藏。抽取尿囊液进行鸡红细胞的血凝素测定，有血凝素活性即可进行病毒鉴定；没有血凝素活性，则需以尿囊液原液继续鸡胚传代(如果病毒效价不够，即使有病毒存在也不表现血凝素活性，一般AIV表现血凝素活性的效价为1×105～106EID50/ml） ，如第三代仍无血凝素活性被认为样品AIV阴性。

分离病毒的鉴定，即确定表面抗原HA和NA的亚型。HA亚型是利用已知的15种HA亚型的抗血清进行HI试验来确定；NA亚型是利用已知的9种NA亚型的抗血清通过微量NI试验来鉴定。

表1 禽流感血清学检测方法

（三）血清学诊断血清学诊断的方法较多，目前最常用的为血凝（HA）及血凝抑制（HI）试验，其它方法也有各自适用范围及优缺点（见表1），在诊断过程中最好根据特定情况选择适宜的方法。

（四）分子生物学技术诊断分子生物学诊断方法是近些年来发展起来的一种快速、先进的诊断方法，它为禽流感病毒快速、准确的检测提供了可靠的手段。此方法较常规分离法速度快，特异性高，而且可克服因野外取料时混入其它病原微生物的干扰。常用的有RT—PCR、放射性标记的基因探针检测、荧光RT—PCR、NASBA、试剂盒M法等方法。

总之，禽流感实验室诊断方法很多，但试验或处理过程需遵照农业部相关技术规范执行，严格执行生物安全措施，送检也应选择具备相应技术水平和资质的单位。

五、温和型禽流感的防治措施

（一）做好免疫接种工作，增强机体的特异性抵抗力免疫接种是保护禽群不受禽流感病毒侵害的根本，特别要接种H5、H9亚型禽流感疫苗，增强禽体特异性抵抗力。疫苗免疫之后，有条件的要进行使抗体监测，综合评价抗体水平的高低和整齐度，结合养殖状况和临床表现合理调整免疫程序。温和性禽流感虽然症状不明显、直接病死率不高，但它导致鸡群免疫力低下、继发感染死亡、产蛋下降等间接损失可能是巨大的，所以免疫工作一定要做好。蛋鸡开产前至少要进行两次免疫，肉鸡一周龄左右免疫一次（如果生长周期较长则需加强免疫）。南京天邦推出的新流二联疫苗，抗原含量高而稳定，免疫抗体水平整齐而持久，针对温和型禽流感的防疫实践证明值得推荐。

（二）建立良好的生物安全体系良好的生产管理制度和良好的禽群生存环境是温和型禽流感防治的基础，严格的隔离和消毒是温和型禽流感防治的关键。严格禁止从有疫病的场引进种源，保证种源健康，防止禽流感病毒进入禽场内。在禽舍内坚持定期消毒，在疾病的流行季节，必须做到每周喷雾消毒一次。粪便要及时清理，水槽、料槽定时用消毒液刷洗。养禽场必须“全进全出”，严格清理和消毒，并空舍20 d以上。

（三）加强饲养管理建立科学的饲养管理体系，按照大规模小群体的原则，分隔多个饲喂区间。根据禽的品种和日龄，以适宜的方式饲喂适量、优质的全价饲料，确保禽群营养均衡、个体均匀。根据季节与气温变化，采取相应措施，保证禽舍的温度、湿度及饲养密度适宜，同时必须有适当的通风换气，特别注意舍内有气味不得造成眼鼻不适感。在日常管理过程中，要尽量减少饲喂、清粪、清扫、消毒、转群、免疫注射等操作对禽群的刺激，避免应激及其诱发疾病。

（四）疫病处置发现疾病现象应及时封锁禽场或禽舍的人员、物品流通，禁止将病禽或可疑病禽上市，严重时采用尸体深埋或焚烧、污染物消毒、排泄物发酵等无害化处理措施。对病禽无特效疗法，可同时使用板蓝根、甘草、黄芪等中草药配方拌料，同时饮水中添加多维素、氨基比林以及阿莫西林或喹诺酮等药物，抑制病毒、提高机体抵抗力、缓解症状和预防继发感染等。蛋鸡可加入刺五加、当归、艾叶、党参、白术等成份的中药配方，以及多种维生素等，加速生殖系统和产蛋量的恢复。