黄桂颗粒的质量标准研究

牛获山 黑龙江中医药大学（150025） 吴悦涛 黑龙江省呼兰区中医医院（150500）韩 雪 哈药集团世一堂制药厂（150088） 刘 颖 北京新创生物工程有限公司（102209）

黄桂颗粒的质量标准研究

牛获山 黑龙江中医药大学（150025） 吴悦涛 黑龙江省呼兰区中医医院（150500）
韩 雪 哈药集团世一堂制药厂（150088） 刘 颖 北京新创生物工程有限公司（102209）

目的 建立黄桂颗粒的质量标准。方法 采用TLC对芍药苷、桂皮醛进行鉴别，采用HPLC测定黄芪甲苷的含量。结果 薄层色谱鉴别分离度好，专属性强；黄芪甲苷对照品在125～1 000 ng呈良好的线性关系，平均加样回收率为98.9 %，RSD 为1.37 %。结论 该法简单方便、准确，重现性好，可用于黄桂颗粒的质量控制。

质量控制；黄芪甲苷；芍药苷；桂皮醛；高效液相色谱

黄桂颗粒是由传统经方黄芪桂枝五物汤经现代工艺提取改良而成。黄芪桂枝五物汤出自《金匮要略》，由黄芪、桂枝、白芍、大枣和生姜组成，具有益气温经，合营通痹之功效。早期用于治疗血痹证，症见肢体麻木，肌肉关节酸痛，中风后半生不遂等症。现代多用于末梢神经炎，原发性低血压，产后身痛等症。还可用于雷诺氏病、风湿性关节炎、肩周炎、慢性滑膜炎等证属营卫不足，寒克血脉者。为更好的控制制剂质量，本实验采用HPLC，TLC法对其进行了质量标准研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪；510 型泵；490E型多功能紫外检测器；745 型数据处理仪；80-2型离心沉淀器：上海手术器械厂。

1.2 试药与试剂 对照品：桂皮醛、芍药甙、黄芪甲甙对照品由中国药品生物制品检定所提供；样品：黄桂颗粒（自制，批号：090803，090804，090805）；试剂：乙腈为色谱纯，甲醇、正丁醇、乙醚均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 芍药苷的薄层色谱鉴别 取本品5g，加水20ml溶解，用乙醚提取3次，每次30ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵb）试验。吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶g薄层板上，以氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸（40:5:10:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.1.2 桂皮醛的薄层色谱鉴别 取本品5g，置于离心管中，加10ml石油醚(60～90℃)，轻轻振摇1min，离心2min(2 500r/min)，取石油醚层作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，取上述两种溶液各5µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 YWG C18柱(3.9mm×250mm，10µm)，流动相为乙腈-水（1:2.3），流速为 1.1ml/ min，检测波长为 203nm，灵敏度为 0.08AUFS。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含50µg的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品适量研细，精密称取5g，至于索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流1h，甲醇提取液减压浓缩至干，残渣加30ml水溶解后，用30ml乙醚洗涤，取水层加水饱和正丁醇萃取3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加40ml氨试液洗涤，取正丁醇层蒸干，残渣加10ml甲醇定容，即得。

2.2.4 线性关系考察 精密称取黄芪甲苷对照品5.10mg，以甲醇溶解并定容于50ml 容量瓶中。分别吸取此溶液2.5，5，10，15ml，用甲醇稀释并定容于20mL 容量瓶中，分别精密吸取上述溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度及峰面积的对数求回归方程为：Y=10 102.89 X-211.67，r=0.999 2，线性范围为 125～1000ng。

2.2.5 专属性试验 取缺少黄芪的其它药材，按照制法制备成阴性品，再按照“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液，取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10 µl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，测定结果为供试品溶液在与对照品溶液相同位置的地方出峰，且分离效果较好，阴性样品溶液无干扰。见图1、2、3。2.2.6 精密度试验 精密称取黄芪甲苷对照品5.00mg，用甲醇溶解并定容于100ml容量瓶中，吸取10µl 进样，连续6次，测定峰面积，其RSD 为0.98 %。

图1 对照品HPLC色谱

图2 供试品HPLC色谱

图3 阴性样品HPLC色谱

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h进样10µl，测定黄芪甲苷峰面积，其RSD为1.02%，表明供试品溶液在10h内稳定。

2.2.8 重现性试验 取同一批样品6份，按“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液，测定其含量。结果平均含量为0.15mg／g，RSD为0.74%。

2.2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量（0.15mg／g）的黄桂颗粒6 份，每份2.50g，分别加入黄芪甲苷对照品0.375mg，按“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液，按上述方法测定含量，测定回收率。结果见表1。

2.2.10 样品含量测定 取090803，090804，090805 3批供试品，分别按对照品溶液、供试品溶液制备方法制备对照品溶液及供试品溶液，并按上述色谱条件与系统适用性、测定法测定样品中黄芪甲苷含量，结果分别为0.14、0.15、0.14 mg/g。

表1 黄芪甲苷加样回收率

[1] 何娟,何秀英.黄芪四物汤颗粒的质量标准研究[J].中国中医药科技，2009,16(3):217.

[2] 杜迎翔.薄层色谱法分离鉴定复方葛根合剂中桂皮醛、芍药甙和甘草次酸[J].化工时刻,2000,7:30.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社，2005:附录X Ⅶ.

[4] 徐玖环,徐秀丽,米振清.高效渡色谱法制定黄芪精中黄芪甲苷含量[J].中国药事,2002,11(15):701.

Quality Control of Huanggui Granula

Niu Huoshan Wu yuetao Han Xue Liu Ying

Objective To establish a quality standard for Huanggui granula. Methed Adopting TLC method to make a qualitative determination of peony glucoside and cinnamic aldehyde and using HPLC method to determine the content of astragaloside in Radix scutellariae. Result TLC has a high identification and separating degree，strong specificity. The reference substance of astragaloside has a good linear relationship in 125ng ～ 1000ng range . The average recovery is 98.9 %，RSD=1.37 %. Conclusion The method is proved to be simple and specialized with a good reproductivity and can be used to control the quality of Huanggui granula.

Quality control；Astragaloside；Peony glucoside；Cinnamic aldehyde；HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.24.010

1672-2779（2010）-24-0016-02

2010-09-29）