乳酸恩诺沙星对实验性鸡大肠杆菌病及沙门氏菌病的药效

2010-09-12 01:16唐一鸣姜中其方兰勇
浙江农业科学 2010年5期
关键词:恩诺沙星沙门氏菌

唐一鸣,姜中其,方兰勇,陈 俭

(1.浙江大学 农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室,浙江 杭州 310029;2.浙江省畜牧兽医局,浙江 杭州 310020)

恩诺沙星自1987年由德国拜尔公司研制成功并投入使用以来,已成为兽医临床上重要的喹诺酮类广谱抗菌药物。近年来,恩诺沙星的盐类产品逐渐增多,常见的有盐酸恩诺沙星、恩诺沙星钠等,它们对大多数病原微生物均具有很好的抗菌活性,尤其是对大肠杆菌和沙门氏菌等革兰氏阴性菌作用很强。恩诺沙星乳酸盐对胃肠道刺激小,其在兽医临床上尚未正式推广应用,国内外关于该药的研究报道很少[1],临床上又迫切需要新的抗菌药物来防治鸡大肠杆菌病和沙门氏菌病。鉴此,我们以雏鸡为动物模型,开展了乳酸恩诺沙星对实验性鸡大肠杆菌病和沙门氏菌病的药效试验,旨在探索其在兽医临床的应用前景,并为合理应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 受试药物

乳酸恩诺沙星可溶性粉,由新昌国邦化学工业有限公司提供,含乳酸恩诺沙星10%,批号:081001。

1.1.2 对照药物

盐酸环丙沙星可溶性粉,由新昌国邦化学工业有限公司提供,含盐酸环丙沙星10%,批号:090320。

1.1.3 试验动物

1日龄雏鸡400只,从杭州市某大型鸡场购入,在实验条件下饲养3 d后供试。

1.1.4 菌种

鸡源大肠杆菌C84051、鸡源沙门氏菌C79-13,购自中国兽药监察所。

1.1.5 器材

微生物分离培养及鉴定器皿,鼠笼、鸡舍及相关饲养设备等。

1.2 试验方法

1.2.1 体外抑菌试验

采用微量肉汤稀释法,根据NCCLS标准测定[2]。精确称取适量乳酸恩诺沙星和盐酸环丙沙星,用灭菌蒸馏水分别配成一定浓度药液,加入96孔板做2倍稀释。分别接种鸡源大肠杆菌C84051和鸡源沙门氏菌C79-13于MH肉汤,37℃培养至对数生长期,调节菌悬液浊度至0.5麦氏标准,再以无菌肉汤稀释100倍后,在含不同浓度药物的板孔中加入100 μL。以上各步均要求无菌操作。最后,置96孔板于35℃孵育18~20 h,以肉眼观察无菌生长的最低浓度孔为 MIC(μg·mL-1);置96孔板于35℃再孵育24 h,以肉眼观察无菌生长的最低浓度孔为 MBC(μg·mL-1)。

1.2.2 体内药效试验

从3日龄鸡群中随机抽取雏鸡20只,逐羽取血进行细菌分离培养,并用抗大肠杆菌C84051和沙门氏菌C79-13标准血清对培养物作玻片凝集反应,确认试验鸡群无接种菌自然感染后,再通过预试验确定正式试验感染菌的适宜接种量。取健康鸡330只,随机均分成11组。除阴性对照组外,其余各组鸡每只分别经胸肌注射大肠杆菌C84051菌液0.25 mL(培养液含活菌数约5×109CFU·mL-1)或沙门氏菌C79-13菌液0.35 mL(培养液含活菌数为20×109CFU·mL-1),接种后各药物治疗组分别给予乳酸恩诺沙星 75,125,175 mg·L-1及对照药物盐酸环丙沙星100 mg·L-1的饮水,连续用药3 d,所用药液均于当日新鲜配制。接种及给药后观察和记录各组雏鸡的发病情况、临床变化及死亡等,连续观察7 d,剖解死亡鸡,观察病理变化并从心、肝血采样进行细菌分离培养及鉴定以确定死因,最后以雏鸡的发病情况、临床症状、死亡率以及增重等为指标,评判乳酸恩诺沙星对雏鸡大肠杆菌病及沙门氏菌病的疗效。

2 结果与分析

2.1 体外抑菌

乳酸恩诺沙星可溶性粉和对照药物盐酸环丙沙星对大肠杆菌C84051和沙门氏菌C79-13均产生明显抑菌作用,表1结果表明,鸡大肠杆菌C84051和沙门氏菌C79-13对乳酸恩诺沙星可溶性粉和对照药物均敏感。

表1 乳酸恩诺沙星和盐酸环丙沙星对鸡大肠杆菌C84051和沙门氏菌C79-13的抗菌作用

2.2 体内药效

2.2.1 对大肠杆菌病的疗效

阳性对照组雏鸡在经胸肌注射接种大肠杆菌C84051后约5 h开始,鸡只陆续出现不同程度的临床发病症状,主要表现为精神萎靡,卧地沉睡或呆立反应迟钝,食欲减退甚至废绝以及排白色、黄绿色稀粪等,发病率100%。各给药组雏鸡在感染当天有轻微发病症状,主要是精神稍差,食欲较感染前略有下降,但给药后2 d开始症状明显改善,并很快消失。

表2可见,各给药组雏鸡的死亡率显著低于阳性对照组。剖检死亡鸡只,急性死亡鸡未见明显病变,病程较长的可见渗出性纤维素性心包炎、肝周炎、气囊增厚、有渗出物等病变。分离培养死亡鸡的心、肝血,用标准抗血清对分离菌进行玻片凝集反应呈阳性,表明雏鸡死亡是由大肠杆菌C84051感染引起败血症所致。接种细菌后7 d内乳酸恩诺沙星 (75,125,175 mg·L-1)组雏鸡的相对增重率显著高于盐酸环丙沙星 100 mg·L-1药物对照组,另外,与阴性对照组相比,乳酸恩诺沙星(125,175 mg·L-1)组雏鸡的相对增重率无显著性差异。

2.2.2 对沙门氏菌病的疗效

阳性对照组雏鸡在经胸肌注射接种沙门氏菌C79-13后约5 h开始,鸡只陆续出现不同程度的的临床发病症状,主要表现为精神萎靡,扎堆,呆伏不动,缩颈闭眼,反应迟钝,食欲减退或废绝,呼吸困难,排白色稀粪等,发病率100%,在接种后9 h开始死亡,死亡高峰集中在感染后24 h内。各给药组雏鸡在感染当天有轻微发病症状,主要是精神稍差,食欲较感染前略有下降,但给药后2 d开始症状明显改善,并很快消失。

表2 雏鸡的死亡率和相对增重率

由表3可见,各给药组雏鸡死亡率显著低于阳性对照组。剖检死亡鸡只,急性死亡鸡未见明显病变,病程较长的可见出血性肺炎,内脏器官充血,嗉囊空虚,肝肿大脆弱,心脏坏死性结节等病理变化。分离培养死亡鸡的心、肝血,用标准抗血清对分离菌进行玻片凝集反应为阳性,表明雏鸡死亡是由沙门氏菌C79-13感染引起败血症所致。接种细菌后7 d内乳酸恩诺沙星试验组雏鸡的相对增重率分别显 著 (75mg·L-1)或 极 显 著 (125,175 mg·L-1)高于盐酸环丙沙星对照组;另外,与阴性对照组相比,乳酸恩诺沙星175 mg·L-1组雏鸡的相对增重率无显著性差异。

表3 各组别雏鸡的死亡率和相对增重率

3 小结及讨论

大肠杆菌病和沙门氏菌病,是目前危害养鸡业最常见的细菌性疫病[3],经济损失很大。近年来,鸡大肠杆菌和鸡沙门氏菌对抗菌药的耐药性逐渐增强[4-6],除了合理应用现有药物[7-9],有必要着力开发新药来防治大肠杆菌及沙门氏菌病。

恩诺沙星是第一个动物专用的第3代喹诺酮类药物,其对G+和G-细菌的抗菌作用与环丙沙星相似[10]。20多年来,恩诺沙星在兽医临床上广泛用于治疗畜禽细菌性疾病和支原体感染,对大肠杆菌和沙门氏菌的 MIC平均值为0.008~0.75 μg·mL-1,其药理学特点已有详尽阐述[11-12],然而恩诺沙星在水中的溶解度极低[10],故在生产实践中其盐类应用更广[1,13-14]。但迄今尚未有乳酸恩诺沙星治疗鸡大肠杆菌病和沙门氏菌病的报道,而乳酸盐相对较温和,对胃肠刺激性小[15]。本试验所用的恩诺沙星乳酸盐为白色粉末,无臭,易溶于水。体内药效结果显示,在较大剂量强毒攻击下,乳酸恩诺沙星对受大肠杆菌及沙门氏菌感染雏鸡有良好保护作用,保护率均为100%,雏鸡相对增重率略低于阴性对照组,但高于药物对照组。

综上所述,认为乳酸恩诺沙星能有效地控制雏鸡大肠杆菌病及沙门氏菌病,迅速缓解发病症状,降低发病鸡群的死亡率,并保持良好的增重速度,混饮的有效浓度为75~175 mg·L-1,连续用药3 d,在临床上应有良好的应用前景。

[1]曾振灵,刘建新,邹明,等.三种恩诺沙星盐对人工诱发鸡巴氏杆菌病的疗效比较[J].中国兽药杂志,2000,34(2):15-17.

[2]NCCLS.PerformanceStandards forAntimicrobialDisk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animal[M].Second Ed.940 West Valley Road, Suite 1400,Wayne,Pennsylvania 19087-1898USA:NCCLSdocument M31-A2[ISBN 1-56238-461-9].NCCLS,2002:21-31.

[3]Namata H,Welby S,Aerts M,et al.Identification of risk factors for the prevalence and persistence of Salmonella in Belgian broiler chicken flocks[J]. Preventive Veterinary Medicine,2009,90(3-4):211-222.

[4]郝智慧,肖希龙,邱梅,等.不同区域鸡大肠杆菌对抗菌药的耐药性比较[J].中国兽医科学,2009,39(1):84-88.

[5]张志峰,喻华英,贾桂珍.鸡沙门氏菌的分离鉴定及药物敏感试验[J].河南科学,2008,26(12):1499-1503.

[6]Ask B,van der Waaij E H,van Eck J H H,et al.Defining susceptibility of broiler chicks to colibacillosis[J]. Avian Pathology,2006,35(2):147-151.

[7]姜中其,方兰勇,曾卫东,等.氟罗沙星对鸡实验性大肠杆菌病及沙门氏菌病的药效研究[J].浙江农业大学学报,1998,24(2):211-214.

[8]李海邦.硫酸阿米卡星可溶性粉对人工诱发鸡大肠杆菌和沙门氏菌的疗效试验[J].上海畜牧兽医通讯,2008(2):42-43.

[9]Arshad N,Neubauer C,Hasnain S,et al.Peganum harmala can minimizeEscherichia coliinfection in poultry,but long-term feeding may induce side effects[J].Poultry Science,2008,87(2):240-249.

[10]陈杖榴.兽医药理学[M].2版.北京:中国农业出版社,2002:237-238.

[11]Seo K H,Holt P S,Gast T K,et al.Elimination of EarlySalmonellaenteritidisInfection After Treatment with Competitive-Exclusion Culture and Enrofloxacin in Experimentally Infected Chicks[J].Poultry Science,2000,79(10):1408-1413.

[12]de Lucas J J,Navarro J L,Rubio S,et al.Pharmacokinetic behaviour of enrofloxacin in greater rheas following a single-dose intramuscular administration[J].Veterinary Journal,2008,175(1):136-138.

[13]刘金凤.盐酸恩诺沙星可溶性粉对鸡大肠杆菌感染的治疗试验[J].中国兽医杂志,1997,23(10),50-51.

[14]张传津.两种恩诺沙星盐对人工感染及杆菌及沙门氏菌的疗效[J].畜牧兽医杂志,2003,22(4):11-13.

[15]姜中其,曾卫东,方兰勇.三种诺氟沙星盐急性毒性及体外药效的比较[J].浙江农业学报,1997,9(6):320-322.

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