酱油渣发酵物对小鼠免疫功能影响的初步研究

2010-09-12 01:16活泼周利南戴德慧张艳萍俞远志

浙江农业科学 2010年5期

活泼，冯纬，周利南，戴德慧，张艳萍，李惠，俞远志

(1.浙江科技学院生物与化学工程学院，浙江杭州 310023;2.杭州市食品酿造有限公司，浙江杭州 310021)

食用菌多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成的功能，从而加强机体防御能力，促进白细胞对病毒和异常细胞吞噬功能，消除体液中自由基的产生，防止细胞膜质的氧化，保护正常细胞，对病毒、细菌有良好的抑制作用等［1－2］。酱油渣是酱油生产的副产物，由于饲用价值低，大部分作为废物被丢弃，造成资源浪费。采用微生物将其进行发酵，可生产具有功能性的饲料，提高其利用价值［3－4］。试验以酱油渣为原料，采用灵芝、平菇发酵，生产的富含多糖的发酵物进行动物实验，研究其对动物机体免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

菌种:平菇 P105(Pleurotus ostreatusP105)，灵芝 (Ganoderma Lucidum)。为本实验室收藏并编号。

斜面培养基 (PDA培养基):马铃薯200 g，葡萄糖 20 g，酱油渣 200 g，琼脂 20 g，水1 000 mL，pH自然。

发酵培养基:玉米粉1%，葡萄糖1%，麸皮粉1%，米糠1%，稻草粉1%，酱油渣30%，水100 mL，pH自然。

1.2 实验动物

实验用ICR小鼠由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2007－0005，清洁级，雌性，体重 (20±2)g。实验动物使用许可证号为 SYXK(浙)2008－0106。

饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB 14924—2001。动物于试验前在动物房环境中适应3 d。

1.3 方法

1.3.1 发酵物原液的制备

500 mL三角瓶装发酵培养基250 g，灭菌消毒后，接菌种接种量 10%，置于28℃，168 r·min－1条件下培养4 d，菌球长满，发酵液粘稠时，停止培养，80℃灭活，然后均质，冰箱保存备用。

1.3.2 剂量设计

设3个剂量组和1个阴性 (蒸馏水)对照组。以灵芝发酵液原液含1 g·100 mL－1灵芝多糖计，低、中、高 3个剂量分别为 50、100、200 mg·kg－1灵芝多糖。50、100 mg·kg－1灵芝多糖剂量组分别称取原液25、50 g加蒸馏水至100 mL，配制成浓度为 2.5和 5mg·mL－1样品，200 mg·kg－1灵芝多糖直接用原液，灌胃给样品，灌胃容量按 0.02 mL·g－1计。

1.4 检测项目

1.4.1 足跖增厚 (DTH)和血清溶血素 (血凝法)

各组灌胃给受试物，每天1次，连续30 d。

在25 d，每只鼠腹腔注射0.2 mL 2% (V/V)压积绵羊红细胞 (SRBC)悬液，进行免疫。

免疫后4 d，测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射20% (V/V)SRBC，每只鼠20 μL(约1×108个 SRBC)，注射后24 h测量左后足跖部厚度，同一部位测量3次，取平均值。

免疫后5 d，取血离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，37℃温箱孵育3 h，观察血球凝集程度，计算抗体积数。

1.4.2 碳廓清吞噬指数和胸腺/体重及脾脏/体重值

各组灌胃给受试物，每天1次，连续30 d。

在30 d，每鼠尾静脉注入用生理盐水稀释3～4倍的印度墨汁，按 0.01 mL·g－1计算，墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10 min分别从内眦静脉丛取血 20 μL，并将其加到 2 mL 0.1%Na2CO3溶液中，用721分光光度计在600 nm波长处测光密度值，以Na2CO3溶液作空白对照。第2次采血结束后，立即处死小鼠，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。计算吞噬指数。

在30 d，处死动物，取其胸腺及脾脏，称重，计算胸腺/体重和脾脏/体重值。

检测环境条件，温度20～24℃，相对湿度40%～70%。数据处理采用SPSS11.5统计软件分析。