猪瘟活疫苗的田间免疫效果试验

李秀成

（张家口市桥东区农业委员会，河北张家口 075000）

猪瘟活疫苗的田间免疫效果试验

李秀成

（张家口市桥东区农业委员会，河北张家口 075000）

猪 瘟（Classical Swine Fever， CSF）是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus， CSFV）引起的一种烈性传染病，因其致死率高、危害严重，而受到各养猪国家的高度重视。目前该病主要通过疫苗来预防控制，因此，猪瘟疫苗质量的好坏直接影响到猪场的生产。当前，猪瘟疫苗主要有牛睾丸细胞苗、兔脾淋组织疫苗和ST传代细胞苗。牛睾丸细胞苗由于使用原代细胞培养，批间差异较大；病毒培养液中病毒含量不高；再加上牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的污染，对疫苗的稳定性和纯净性影响极大。兔脾淋组织疫苗是利用兔子组织来制作疫苗，由于兔的饲养量有限和兔对猪瘟病毒的敏感性也在下降，这些对兔脾淋组织疫苗的质量和稳定性都有较大的影响。ST传代细胞疫苗，采用国际认证的同源传代ST细胞培养，批间差异极小，稳定性好，病毒培养液中病毒含量高，而且避免了其他病毒污染的威胁，相对目前其他两种猪瘟疫苗来说是一种新型优质的疫苗。本试验主要对猪瘟活疫苗（传代细胞源）的免疫效果进行跟踪调查，通过对所收集数据的对比分析，评估猪瘟活疫苗（传代细胞源）的免疫效果。现将试验情况报告如下。

1 试验用疫苗与用量

1.1 猪瘟活疫苗（传代细胞源）

由广东永顺生物制药有限公司生产。

1.2 用法与用量

按照各试验场制定的免疫程序，每头猪接种猪瘟活疫苗（传代细胞源）1头份。

2 抗体检测方法

采用IDEXX-ELISA试剂盒进行检测。

2.1 操作方法

按试剂盒的使用说明进行。

2.2 判定标准

猪瘟抗体检测试验（阻断ELISA）成立条件：阴性对照的平均OD450值应大于0.50，阳性对照的阻断率应大于50%，试验方成立有效。样品阻断率=（阴性对照平均 OD450值-样品 OD450）/阴性对照平均OD450×100%

被检样品的阻断率大于或等于40%，该样品为猪瘟抗体阳性；样品阻断率小于或等于30%，该样品为阴性（无猪瘟抗体存在）；样品阻断率在30～40%，该样品为可疑。

3 试验方法与结果

3.1 猪瘟活疫苗（传代细胞源）与猪瘟活疫苗（细胞源）免疫效果的比较试验

在河北省张家口市选择一个饲养管理水平良好的种猪场，进行不同疫苗免疫效果比较试验，随机选取150头种猪，分成三组，每组50头，用猪瘟活疫苗（传代细胞源）1头份/头和国内两个厂家生产的猪瘟活疫苗（细胞源）5头份/头，各免疫一组，分别在免疫前和免疫后30天抽取部分免疫猪的血样，分离血清，用美国IDEXX公司的猪瘟抗体检测试剂盒检测其抗体，结果见表1、图1。结果显示，在免疫猪瘟疫苗前，3组猪的抗体平均值和离散度都相差不大，免疫后30天两个猪瘟活疫苗（细胞源）组的抗体水平与免疫前比较变化不大，而免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源）组在免疫后30天的抗体合格率则有明显的提高 （从74%上升到85%），抗体平均值也有一定的提高（阻断率从0.5上升到0.6），抗体水平较均一 （抗体离散度从37%下降到31%，减少了6%）。

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3.2 四个猪场免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源）试验

在四个不同猪场免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源）后猪瘟抗体离散度和猪瘟抗体平均值分布情况，见图2。

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3.3 猪瘟活疫苗（传代细胞源）对仔猪（60天和90天各免一次）的免疫效果试验

在河北省张家口市某原种猪场，按照该场原先免疫程序，其仔猪采用60天龄和90天龄各免疫猪瘟细胞活疫苗（传代细胞源）1头份/头的免疫程序，为探讨其猪瘟抗体水平的变化，分别在第一次注苗前（60天龄）、第二次注苗前 （90天龄）和第二次注苗后30天（120天龄）各抽取20头猪只的血样，分离血清，用美国IDEXX公司的猪瘟抗体检测试剂盒检测其抗体。结果见表2和图3。

从表2中的结果可以看出，仔猪在首免后30天的抗体合格率从30%提高到45%，二免后30天抗体水平则有大幅度提高，抗体合格率达到了100%，而且90%可达到较理想的保护滴度。

图3结果显示，免疫猪瘟细胞活疫苗（传代细胞源）后的猪瘟抗体水平呈逐渐上升的趋势，而抗体离散度则随着免疫次数和时间的增加而下降。

3.4 猪瘟活疫苗（传代细胞源）对仔猪（20天和60天各免一次）的免疫效果试验

在河北省张家口市选择一个饲养管理水平良好的种猪场，随机选取20头肉猪，用猪瘟活疫苗（传代细胞源）1头份/头，按照该场原先免疫程序（20天龄一免，60天龄二免）进行免疫，分别在一免前、二免前和二免后25天抽取免疫猪的血样，分离血清，用美国IDEXX公司的猪瘟抗体检测试剂盒检测其抗体，结果如表3和图4。结果显示，该试验猪群，一免前仔猪猪瘟抗体阳性率为65%，其中阻断率大于等于51的为55%，离散度高，母源抗体水平为偏高。第一次免疫后40天猪瘟抗体阳性率为75%，其中阻断率大于等于51的为65%，离散度变小，猪群一免后抗体合格率呈上升趋势。二免后，猪瘟抗体阳性率为95%，其中阻断率大于等于51的为85%，同时抗体离散度也大大缩小。

3.5 不同免疫程序的猪瘟ST疫苗对猪的免疫效果比较试验

选择5头经CSFV与PRV净化的健康母猪同天所产仔猪24头进行试验，每窝仔猪随机等分为2组，所有猪出生后在耳部作标记。其中A组的免疫程序为20天一免，60天二免，免疫13头；B组的免疫程序为35天一免，70天二免，免疫11头，免疫剂量为1.0头份/头。A组于 20天龄 （一免前）、35天龄、60天龄（二免前）、70天龄、90天龄、110天龄各采一次血。B组于35天龄 （一免前）、50天龄、70天龄（二免前）、90天龄、110天龄各采一次血。分离血清，用美国IDEXX公司的猪瘟抗体检测试剂盒检测其抗体，结果如表4、图5、6所示。

从表4中的结果可以看出，该场仔猪的猪瘟母源抗体维持时间不长，20天龄时合格率仅有27%，到35天龄合格率为0，在这种低母源抗体的情况下，采用两种免疫程序的均可达到比较理想免疫效果，到110天龄猪瘟的抗体合格率都可达到100%。比较两种免疫程序，在相同天龄下检测，A组的合格率高于B组。

从图5可以看出，在存在一定的母源抗体的猪群中免疫时，首次免疫后15天猪瘟的抗体水平会出现一定程度的下降，而且离散度也加大，但随着免疫时间的延长和二次免疫，抗体水平逐渐升高，离散度也逐渐缩小。

从图6可以看出，在母源抗体水平低（抗体合格率为 0）的情况下免疫，首免后15天的猪瘟抗体水平变化不大，在首免后35天，平均抗体水平达到了合格的标准；二次免疫后，抗体水平上升较快，离散度也逐渐缩小。

4 讨论

从不同疫苗免疫效果比较试验结果（见表1、图1）可见，猪群免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源）后抗体平均值有所上升，同时抗体离散度下降，使整个猪群抗体能保持在一个比较均一的水平，很好的保护猪群免受猪瘟强毒的侵害。

从河北不同地区的四个种猪群免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源）后的抗体平均值和抗体离散度（见图2）可见，免疫猪瘟细胞活疫苗（传代细胞源）后猪瘟抗体平均值保持在阻断率60%～80%，且抗体离散度较低。根据美国IDEXX公司的数据显示，猪瘟抗体的阻断率在60%～80%是最理想的滴度，说明猪瘟活疫苗（传代细胞源）对种猪群有很好的免疫效果。

从仔猪免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源） （60天和90天各免一次）后的抗体平均值和抗体离散度（见表2、图3）可见，仔猪在首免后40天的抗体合格率从30%提高到45%，二免后30天抗体水平则有大幅度提高，抗体合格率达到了100%，而且90%可达到较理想的保护滴度。而抗体离散度则随着免疫次数和时间的增加而下降。

从仔猪免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源） （20天和60天各免一次）后的抗体平均值和抗体离散度（见表3、图4）可见，在母源抗体较高（猪瘟抗体阳性率为65%）的情况下，一免后猪瘟抗体合格率呈上升趋势，一免后40天猪瘟抗体阳性率为75%，其中阻断率大于等于51的为65%，离散度变小；二免后猪瘟抗体平均值大幅度上升，猪瘟抗体阳性率为95%，其中阻断率大于等于51的为85%，同时抗体离散度也有大幅度的缩小，是否提示猪瘟活疫苗（传代细胞源）可突破较高母源抗体的干扰，使免疫猪达到理想的免疫效果。

比较20天和60天各免一次和35天和70天各免一次两种免疫程序（结果见表4和图5、6），在这种低母源抗体的情况下，采用两种免疫程序均可达到比较理想免疫效果，到110天龄猪瘟的抗体合格率都可达到100%。

以上试验结果显示猪群在首次免疫猪瘟活疫苗 （传代细胞源）后15～30天，猪瘟抗体水平提升并不显著，但二次免疫后猪瘟抗体水平大幅度提高，离散度显著降低，取得了理想的免疫效果。种猪和仔猪使用猪瘟活疫苗（传代细胞源）后，能突破高猪瘟抗体干扰，在免后30天猪瘟抗体水平处于理想状态。