RP-HPLC法测定痛经康口服液中延胡索乙素的含量

肖若媚 赵伟国 李运景

RP-HPLC法测定痛经康口服液中延胡索乙素的含量

肖若媚 赵伟国 李运景

目的建立痛经康口服液中延胡索乙素的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法。色谱柱:C18柱(250×4.6，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(60∶40);流速为0.8 ml/min;检测波长280 nm;柱温为室温29℃;结果 延胡索乙素进样量在0.026～1.040 mg内线性关系良好，相关系数r=0.9998，平均回收率为99.18%，RSD=1.08%(n=9)。结论该方法简便、准确、重现性好，可用于痛经康口服液的质量控制。

痛经康口服液、延胡索乙素、高效液相色谱法

痛经康口服液由元胡、当归、川芎、香附等13味中药组成的纯中药复方制剂，来源于临床经验方，是人民医院制剂室开发的新的中药复方制剂，具有理气活血、通络止痛的功效，主要用于治疗各种原因引起的痛经、月经不调等病症。本制剂中元胡，具有活血、理气、止痛的功用为主要药物，而元胡中延胡索乙素为该药的主要药效成分，具有较强的镇痛作用。本研究拟应用高效液相色谱法对痛经康口服液中延胡索乙素含量进行测定，并以此作为痛经康口服液的质量控制指标之一。

1 仪器与材料

1.1 仪器 安捷伦1200高效液相色谱仪(包括G1311A在线真空脱气装置，G1322四元泵，G1314B二极管阵列检测器，G1329A自动进样器，安捷伦化学色谱工作站)(美国安捷伦科技有限公司)，电子分析天平(日本岛津AUW220D)。

1.2 供试品与试剂 延胡索乙素对照品(中国生物制品鉴定所批号:110726-200610)，痛经康口服液(中山市人民医院制剂科自制)，色谱甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司批号:20090310)，水为蒸馏水，氯仿等其他试剂分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(250×4.6×5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH值至 6.0)(60∶40);流速为0.8 ml/min;检测波长280 nm［1］;柱温为室温29℃;理论板数3000，分离度大于1.5。

2.2 对照溶液制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥过夜至恒重的延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含52 ug的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品10 ml，加氨试液调pH值至10置分液漏斗中，用氯仿萃取三次(20 ml，20 ml，15 ml)，合并氯仿液，用水20 ml洗涤1次，氯仿液挥干，残渣加甲醇溶解并定容至10 ml量瓶中，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 取缺延胡索药材的阴性制剂10.0 ml，同“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.5 专属性试验 取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按“2.1”项下色谱条件测定。结果供试品溶液在与延胡索乙素对照品相同保留时间处出现色谱峰，而阴性对照液在与延胡索乙素相同保留时间处无色谱峰出现，表明阴性对照无干扰。HPLC图谱见图1。

图1

2.6 线性关系考察 分别吸取上述对照品溶液0.5，1.0，2.5，5.0，10.0，20.0 ul，分别按“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，以对照品进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=1455X-8.0574(R2=0.9998，n=6)。表明延胡索乙素进样量在0.026 mg～1.040 mg之间与峰面积呈良好线性关系。

2.7 重复性试验 取批号为20100625的样品6份，分别按含量测定方法平行操作、测定，平均含量为0.031 mg/ml，RSD=0.6%，表明方法重复性良好。

2.8 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h各进样1次，测定延胡索乙素的峰面积。结果RSD=1.8%，表明延胡索乙素在24 h内基本稳定。

2.9 加样回收试验 精密吸取1 ml已知含量(0.031 mg/ml)的同一供试品溶液(批号:20100625)9份，分成3组，每组各分别精密加入延胡索乙素对照品溶液0.6，0.8，1.0 ml，按供试品方法提取、测定含量，计算加入量的回收率，结果见表1。

表1

2.10 样品含量的测定 取本品3批(批号:20100625、20100628、20100629)，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。在上述色谱条件下进样，测定峰面积，按外标法以峰面积计算延胡索乙素的含量，结果3批含量分别为，0.031 mg/ml，0.030 mg/ml，0.0294 mg/ml。

3 讨论

3.1 提取方法的选择 本研究供试品为口服溶液，并且延胡索乙素为叔胺类生物碱，极易溶于氯仿与乙醚［2］，因此拟选择先用氨试液碱化溶液，延胡索乙素游离，然后用氯仿进行萃取的方法。经薄层色谱检验证实，氯仿萃取后的溶液，延胡索乙素呈阴性，表明方法可行。

3.2 色谱条件选择 本研究参考2010版药典色谱条件选择流动相，并根据实际情况予以确定，流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(60:40)(药典为55:45［1］，但与相关研究相同［2，3］);流速为 0.8 ml/min;检测波长 280 nm;柱温为室温29℃。结果测得分离度高，峰型良好，保留时间适中。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典.2010版第一部.中国医药科技出版社，2010，130.

［2］潘云雪，诸葛陇，张芳芳.RP-HPLC测定骨健口服液中延胡索乙素的含量.中国现代应用药学杂志，2009，26(5):400-402.

［3］张明辉，蔺宁利，邵忙收.HPLC法测定胃安宁片中延胡索乙素含量研究.陕西中医学院学报，2010，33(1):61-62.

Determination of Tetrahydropalmatine in Tongjingkang Oral Liquid by RP-HPLC

XIAO Ruo-mei，ZHAO Wei-guo，LI Yun-jing.Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangdong 528400，China

Objective To determine tetrahydropalmatine content in Tongjingkang Oral Liquid by RPHPLC.MethodsThe chromatographic column of Agilent technologies C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)was used with the mobile phase consisted of the mobile phase consisted of 0.1%H3PO4(pH adjusted to 6.0 by triethylamine)-nethanol(40∶60)，the flow rate was 0.8 ml/min，the detective wavelength was set at 280nm and column temperature was 29℃.ResultsThe linear relation of tetrahydropalmatine was excellent within the range of 0.026 ～1.040 mg(r=0.9998，n=6)，and the mean recovery was 99.18%with RSD=1.08%(n=9).ConclusionThe method is simple，accurate，fast，stable and reliable，which can be used to determine quality conerol in Tongjingkang Oral Liquid.

Tongjingkang Oral Liquid;Tetrahydropalmatine;RP-HPLC

528400中山大学附属中山医院

李运景 zspylyj@163.com