高效液相色谱法测定腹可安片中槲皮素含量

谭志艺 刘永路 容淑盈

高效液相色谱法测定腹可安片中槲皮素含量

谭志艺 刘永路 容淑盈

目的建立高效液相色谱法测定腹可安片中槲皮素的含量。方法色谱柱为Diamonsil(钻石)C18(150×4.6mm，5 μ)，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(52∶48)，检测波长为360nm，流速为1.0 ml/min，柱温为35℃。结果槲皮素进样量的线性范围是0.2～2.0 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率为99.88%，RSD=0.93%(n=6)。结论该方法简便、灵敏、结果准确、重复性好，可用于腹可安片的质量控制。

腹可安片;槲皮素;高效液相色谱法;含量

腹可安片是由扭肚藤、火炭母、车前草、石榴皮、救必应等五味中药提取加工制成，具有清热利湿，收敛止痛，用于急性胃肠炎、消化不良引起的腹痛、腹泻、呕吐等［1］。原标准中无含量测定项目。为了有效控制其内在质量，笔者采用高效液相法测定火炭母中槲皮素的含量，结果满意。

1 仪器与试药

岛津SHIMADZU LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A二极管阵列检测器。槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号为100081-200406);样品1(广东一力药业集团有限公司，批号为2090403)，样品2(扬州华天宝药业有限公司，批号为090702)，样品3(广东怡康制药有限公司，批号为090701)，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［2］色谱柱为Diamonsil(钻石)C18(150×4.6mm，5μ);流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(52:48);检测波长为360 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为35℃;理论塔板数按槲皮素峰计算达2500以上。

2.2 溶液制备 精密称取槲皮素对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇溶解并制成每1 ml含45μg的溶液，即得对照品溶液。取腹可安片20片，除去糖衣，称定总重量，研细，混匀，精密称取0.6g，加50%甲醇30 ml，盐酸1 ml，加热回流1 h，趁热滤过，滤液放泠，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 ml，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例及工艺制备不含火炭母的样品适量，按供试品溶液制备方法制成空白样品溶液。

2.3 方法学考察 阴性干扰试验:精密吸取对照品，供试品及空白样品溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果色谱图中在槲皮素峰相应的保留时间附近无干扰峰检出(见图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取浓度为0.1 mg/mL的对照品溶液 2，4，8，10，15，20 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y为纵坐标、槲皮素对照品进样量X为横坐标绘制标准曲线，得回归方程:Y=177406X-73615，r=0.9999。结果表明，槲皮素进样量在0.2～2.0 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液20 μl，重复进样6次，记录色谱图，按峰面积计算。结果的RSD=0.39%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一批号供试品溶液20 μl，按上述色谱条件，分别在 0，1，2，4，8，12 h 时测定。以峰面积计算，RSD为0.8%。结果表明，待测溶液至少在12 h内稳定。

重现性试验:取同一批号的样品6份，依法测定。其结果的RSD为0.36%，说明方法的重现性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品6份，分别精密加入槲皮素对照品适量，依法测定其含量，求出加样回收率。结果见表1。

表1 槲皮素加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定 精密吸取对照品及供试品各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算，结果3批样品(样品1～样品3)中槲皮素的含量分别为75.18，102.1，92.9 ug/片。

3 讨论

3.1 取槲皮素对照品溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果显示在360 nm波长处有最大吸收峰且不易受溶剂峰干扰，故选择360 nm为测定吸收波长。本试验表明，样品用50%甲醇和盐酸加热回流1 h，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，槲皮素已基本提取完全;以甲醇-0.4%磷酸溶液(52∶48)作为流动相，槲皮素色谱峰能与其他组分的色谱峰很好地分离，线性关系良好，重现性及回收率结果均符合要求。

3.2 HPLC法前处理简便，测量准确，精度高，重现性好，可作为腹可安片的一种质量控制方法。

［1］WS3-B-2255-96，卫生部药品标准·中药成方制剂(第十一册).北京:中华人民共和国卫生部药典委员会，1996:200.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工业出版社，2005:152.

Determination of Quercetin Contents in Fukean Tablet by HPLC

TAN Zhi-yi，LIU Yong-lu，RONG Shuying.Yunfu Institute for Drug Control of Guangdong，Yunfu，Guangdong，527300，China

Objective To establish a HPLC method for determination of Quercetin Contents in Fukean Tablet.MethodsThe column was Diamonsil C18(150 × 4.6mm，5 μ).The mobile phase was a mixture of methanol and 0.4%phosphoric acid solution(52∶48)at a flow rate of 1.0 ml/min，and the detecting wavelength was at 360 nm，the temperature was 35℃.ResultsThe linear range of Baicalin was 0.2～2.0μg(r=0.9999)and the average recovery rate was 99.88%(RSD=0.93%).ConclusionThe method is simple，high sensitivity and accurate with good repeatability and can be used for quality control in Fukean Tablet.

Fukean Tablet;Quercetin;HPLC;Content

527300广东省云浮市药品检验所