蒲公英多糖对四氯化碳肝损伤小鼠的保护作用

李春兰 赵 亮

1)河南中医学院第一附属医院药剂科 郑州 450000 2)河南许昌市中心医院药剂科 许昌 461000

蒲公英为菊科植物蒲公英(Mazz)或同属数种植物的全草,性寒,味苦、甘,入肝胃二经,具有清热解毒、消肿散结和利尿通淋的功效。对蒲公英的化学研究发现,其主要含多糖类、有机酸类、甾醇类、黄酮类等成分[1-4],蒲公英具有广泛的药理活性,有抗病原微生物、提高免疫力、抗氧化和保肝利胆等功效[5-7]。本实验首次研究了蒲公英多糖对四氯化碳急性肝损伤小鼠的保护作用,为开发利用蒲公英的丰富资源提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂:联苯双酯片:ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)、SOD(超氧化物歧化酶)和MDA(丙二醛)检测试剂盒均购至南京建成生物工程研究所。考马斯亮蓝,其他试剂均为分析纯。

1.1.2 主要仪器:UV-2000型紫外可见分光光度计,TG16B台式高速离心机,各种规格移液器等。

1.1.3 实验动物:昆明种小白鼠,雌雄对半,体质量(22±2)g,有河南省医学实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 蒲公英多糖对肝损伤小鼠的作用:小鼠(20±2)g随机分为6组,每组12只,空白对照组、模型组每天灌胃(ig)生理盐水;联苯双酯片阳性对照组每天灌胃150 mg/kg小鼠体质量的药物,蒲公英多糖高、中、低剂量组分别灌胃600 mg/kg、300 mg/kg、150 mg/kg 小鼠体质量的样品,给药 14 d,以末次给药2 h后,除空白组外均按照0.1 mL/10g腹腔注射0.4%四氯化碳花生油溶液,禁食不禁水16 h后,摘眼球取血,4000 r/min离心5 min,分离出血清,检测ALT和 AST,分离出肝脏称重,并用0～3℃生理盐水做成肝脏组织匀浆液,测定M DA和SOD,用考马斯亮蓝除蛋白。

2 结果

2.1 蒲公英多糖对四氯化碳肝损伤小鼠血清中ALT、AST的影响 见表1。

2.2 蒲公英多多糖对四氯化碳肝损伤小鼠的抗氧化能力的影响 见表2。

表1 蒲公英多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤血清中ALT和AST的影响 (±s)

表1 蒲公英多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤血清中ALT和AST的影响 (±s)

注:与空白组比,△△△P＜0.001,与模型组比,***P＜0.001,**P＜0.01,*P＜0.05

组别 剂量(mg/kg)n ALT(U/L) AST(U/L)空白组 12 28.51±6.96 57.27±5.14模型组 9 2177.82±438.30△△△ 1682.89±726.76△△△阳性对照组 150 10 425.81±149.33*** 449.07±237.46**高剂量组 600 10 564.79±182.99*** 440.10±281.09**中剂量组 300 10 867.91±347.28** 690.47±235.41*低剂量组 150 10 1206.48±456.53** 1004.86±338.12

表2 蒲公英多糖对四氯化碳肝损伤小鼠的抗氧化作用的影响

3 讨论

肝损伤是多种严重肝脏疾病的发生、发展及最终走向肝功能衰竭的始动环节和共同途径。通过建立实验性肝损伤动物模型,筛选保肝药物,研究肝病的发生机制,探索保肝作用原理,具有十分重要的现实意义。肝脏是含酶丰富的脏器,在肝内ALT主要分布于细胞浆内,AST则分布于细胞浆和线粒体中。在肝脏出现脏器组织损伤或破坏、坏死时,酶从细胞内逸出进入血液,故ALT、AST水平增高。因此,血清ALT、AST的升高是肝损伤的重要标志。本实验中,模型组较空白组AST和ALT值明显升高,说明肝损伤模型已经成功。

CCl4在细胞色素P450作用下,产生氯甲基自由基(◦CCl3)等,而◦CCl3等可使肝细胞膜或亚细胞结构的膜脂质发生过氧化作用,引起膜通透性升高,致使胞浆内ALT大量释放入血,或◦CCl3与肝微粒体脂质和蛋白质发生共价结合,损伤了肝细胞膜结构与功能的完整性[8]。蒲公英多糖各剂量组均能对抗四氯化碳肝损伤小鼠的AST和ALT的升高,说明蒲公英多糖能对抗◦CCl3引起的细胞膜脂质过氧化,保护肝细胞和亚细胞不受损伤。

MDA是脂质过氧化的主要降解产物,可进一步损伤肝细胞的结构,导致肝细胞坏死,其含量的大小可以间接反映自由基对组织的破坏程度。SOD能催化自由基进行歧化反应,使自由基不能与膜脂质和膜蛋白进行二次反应,阻止其破坏肝细胞。MDA通常和SOD或者GSH-Px联合使用,一起反映氧自由基对细胞的损伤程度。因此,肝组织中MDA、SOD的含量可间接反映肝细胞损伤的程度,而且血清中ALT、AST的升高,是肝细胞损伤的共同表现。本实验中,蒲公英多糖在剂量为600 mg/kg时显著升高肝损伤小鼠的SOD活力值(P＜0.01),在剂量为 150 mg/kg时,能显著降低肝损伤小鼠的MDA含量(P＜0.05),说明蒲公英多糖能提高肝损伤小鼠的抗氧化能力。

蒲公英多糖是蒲公英的主要活性成分,在蒲公英药材中含量较高,是一种物美价廉的药用材料。蒲公英的降血糖作用少有报道,但是并未见蒲公英多糖降血糖方面的报道。本文首次研究了蒲公英多糖的对四氯化碳肝损伤小鼠的保护作用,结果显示蒲公英多糖对四氯化碳肝损伤小鼠具有保护作用;能显著性抑制小鼠 AST和ALT的升高(P＜0.001,P＜0.01),并能提高肝损伤小鼠体内SOD的活力,降低肝损伤小鼠MDA含量,说明蒲公英多糖对四氯化碳肝损伤具有保护作用,抗氧化作用可能是其主要保肝机制,本文为研究蒲公英在肝损伤中的应用提供了一定的实验依据。

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