MSI和 LOH与慢性粒细胞白血病各期的关系

刘文秀 毛齐学 王 波 刘 薇 张洪宇

黑龙江省齐齐哈尔市中医医院检验科（161000）

MSI和 LOH与慢性粒细胞白血病各期的关系

刘文秀 毛齐学 王 波 刘 薇 张洪宇

黑龙江省齐齐哈尔市中医医院检验科（161000）

微卫星遗传不稳定性是CML发生和转化过程中的常见事件,不同位点微卫星不稳定性在CML病情演变中所起作用不同,AFMa127xg9位点附近可能存在与CML发生、发展密切相关的新抑癌基因。

杂合性缺失；微卫星重复；白血病

1 资料与方法

选择在我院住院的CML病人37例，包括慢性期（CP）27例，加速期和急变期（AP+BC）10例；男18例，女19例；年龄14～65岁。方法：收集CML病人的骨髓标本，正常对照组外周血，同时刮取口腔黏膜标本做自身对照，参考本室常规方法分别提取骨髓、外周血与口腔黏膜标本DNA备用。选取与CML病人不同时期染色体改变密切相关的8、9、17号染色体上5个微卫星位点:D8S555、D8S559、D9S67、TP53A1/A2、AFMa127xg9，从基因库中查出其引物序列，由上海生物工程技术服务有限公司合成所需引物。将引物分成两组，用多重PCR方法同时扩增病人的骨髓（或正常对照组的外周血）和口腔黏膜DNA。

将扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染，用凝胶成像分析仪分析是否存在MSI和（或）LOH。

2 结果

各期CML病人MSI和（或）LOH发生率比较 27例CP病人中14例发生MSI和（或）LOH，10例AP+BC病人中8例发生了MSI和（或）LOH，二者比较，差异无显著性（P=0.152）。不同微卫星位点MSI和（或）LOH的发生率及其比较 在D8S555位点，CML CP病人的MSI发生率为7.4%，AP+BC为40.0%，但未见LOH。进展期（AP+BC）病人的MSI发生率明显高于CP病人，差异有显著性（P=0.009）。同时出现两个和两个以上位点改变者10例，其中CP病人6例，AP+BC病人4例，二者差异无显著性（P=0.407）。8号染色体的D8S555、D8S559位点MSI的发生率明显高于9、17号染色体的3个位点，差异均有显著意义。17号染色体的AFMa127xg9 位点 LOH 的发生率为 29.7%，明显高于其他4个位点，差异有显著性。

3 讨论

慢性白血病是一种克隆性、多能造血干细胞疾病，发病率为1/100000，发病高峰在50～60岁之间。其临床特征为：髓系增生，白细胞增多伴嗜碱粒细胞增多，脾大。病情发展最终由慢性期进展到加速期，最后到致命的急变期。特征性的染色体异常t（9.22）（q34:q11）导致bcr-abl融合基因的形成，其产物bcr/abl酪氨酸激酶的活性比野生型abl酪氨酸激酶的活性更强，这在CML的发病中起重要作用。一般认为，CML急变时70%的病人可以出现额外的染色体异常，这种变化的出现比血液学和临床表现的恶化要早几个月，可作为估计预后的有价值的指标。分子生物学技术的发展对CML的发病机制及病程演变的研究起了进一步推动的作用。PCR技术检测微卫星的不稳定性在研究CML发生发展机制中被广泛应用。WADA等检测了19例CML进展期和20例慢性期病人的5个不同微卫星位点的MSI，结果显示，进展期有10例病人检测到至少2个微卫星位点的MSI，而20例慢性期病人中没有1例检测出同样位点的MSI，认为由于复制和修复机制缺陷导致微卫星不稳定性这一频繁事件的发生同CML进展关系密切。

OHYASHIKI等用荧光技术对73例不同类型白血病的7个微卫星标记进行连续研究发现，在CML慢性期没有微卫星不稳定性，而急变期时微卫星不稳定性出现的频率明显升高，达25%，且出现多个位点不稳定性者占50%以上，因此认为，多个基因位点的不稳定性与CML的急变有关联。李戈等[1]检测17例CML加速期和急变期病人的2个微卫星标记，发现有8例出现MSI或LOH，表明慢性白血病在加速期和急变期检出微卫星不稳定性的频率明显高于慢性期。本文结果显示，进展期病人D8S555位点处的MSI发生率明显高于慢性期病人，与文献报道相符；同时也观察到所选的其他4个位点上，加速期和急变期病人发生一个或多个位点的MSI和（或）LOH的频率与慢性期病人无显著性差异；8号染色体的2个位点D8S555、D8S559的MSI发生率明显高于9、17号染色体的3个位点，而17号染色体的AFMa127xg9位点LOH发生率明显高于其他4个位点，在9q34上的D9S67位点和17号染色体的TP53A1/A2位点上MSI和（或）LOH发生率都较低，且只发生在慢性期，这说明CML的演变是一个遗传学改变高度异质性的过程，微卫星遗传不稳定性广泛存在于疾病全过程，不同微卫星的改变在这一过程中发挥的作用也不同。MORI等[1]对17例处于由慢性期向急变期进展的CML病人的10个微卫星标记进行研究，也没有发现MSI，认为这些微卫星区域改变没有参与CML的进展。另外，MEZA等研究发现，CML出现额外染色体异常如+8、i（17q）的频率具有地区民族差异。所以，我们分析不同文献结果不同的原因除与所选择的微卫星位点不同有关外，可能还与人种、地域等因素造成的微卫星多态性有关。如何科学选择微卫星位点检测慢性白血病不同时期的MSI和LOH的临床意义还有待于更多、更进一步的研究。

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.10.178

1672-2779（2010）-10-0202-01

2010-03-24）