实验室废弃DAB去毒性处理方法

陈彦杰

在生物医学领域，3，3’-二氨基联苯胺(DAB)作为过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物，反应产物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物而被广泛应用于蛋白印迹(WB)、免疫组织化学(IHC)和免疫细胞化学(ICC)、斑点印迹(Dot blot)和生物芯片(Biochip)等的染色和显色反应。自应用于组织化学染色四十年来，为人类的科研做出了伟大的贡献［1］。但是DAB属于联苯胺类化合物(BZC)中的一种，现已被证实具有免疫毒性、生殖毒性、遗传毒性、致癌性等毒性，尤其对泌尿系统可致膀胱癌，被国际癌症研究中心(IARC)确认为致癌物，已被世界多个国家禁止工业使用［2］。只在一些高等院校、疾病研究中心、医院病理科室等生物医学实验室允许少量使用。虽然使用量不大，但由于DAB的致癌性且其潜伏期可长达20年，所以除使用过程中要特别注意安全防护外，使用后的废液存放和去毒性处理也应引起高度重视。

DAB的毒性处理原则是DAB分子完全被破坏且反应副产物和终产物也必须不具备诱变性。最初使用5-10%次氯酸钠(漂白水)处理，并以标签形式粘贴在盛放DAB的器皿上，后被证明它虽然可以破坏DAB分子，可反应终产物只是变成了另外一个仍具诱变性的含氯的有机化合物，且这个含氯的有毒物质还需花费每加仑500元人民币的价格被焚化，所以用漂白粉处理的的方法早已被停用［3，4］。2002年Duke大学环境安全部颁布了两则处理方法:一是过氧化氢(H2O2)/辣根过氧化物酶(HRP)法，DAB与HRP反应沉淀下来后，再经抗坏血酸脱色后排入下水道。后经证明DAB被氧化为固体沉淀与液相分离后，剩余的液体是无诱变性的，但沉淀物质仍保留其致突变性，唯一的优点是减少了污染体积;而被沿用至今的是硫酸-高锰酸钾法，DAB被处理后不但分子被完全破坏，反应终产物也无诱变性，处理后可以按普通实验室废液处置［5］。具体处理步骤如下。

1 硫酸-高锰酸钾水溶液的配制

a.0.2 M高锰酸钾水溶液;高锰酸钾(KMnO4)，31.6 g，蒸馏水1000 ml;b.2.0M的硫酸水溶液，浓硫酸(H2SO4)，112 ml;蒸馏水 1000 ml。

2 收集废弃DAB液

包括显色后洗片、洗器皿的自来水和剩余的DAB显色液，稀释后DAB的浓度不超过0.9 mg/ml。

3 去毒性反应

废弃DAB液每10 ml加入上述5 mla液和5 mlb液，混合后静置不低于10 h或过夜，此时DAB的致癌性基本解除。

4 脱色

加入抗坏血酸或草酸脱色，边加边搅拌至废液退至无色。

5 中和

加入碳酸氢钠中和pH值6至8，经PH试纸检测。

6 处理

有废液回收条件的按普通实验室废液回收，没有回收条件的可以混合大量自来水倾入下水道冲走。与硫酸-高锰酸钾法相比，被公认更有效的处理方式是焚烧废弃物的处置方法，DAB废弃物加入燃料被焚烧后苯环完全被破坏，排出的有毒的氮氧化物可以通过洗涤器除去。但焚烧法需要有专业的回收和存放，较适合集中DAB的毒性处理，而硫酸-高锰酸钾法较适合实验室使用。在我国由于实验室比较分散，单个实验室产生的废液量较少，很少受到实验使用人员和有关部门的重视，大多实验室都是未经任何处理直接排入下水道，这种情况下日积月累、积少成多也是非常可怕的，所以硫酸-高锰酸钾法去毒处理方法是非常有必要推广使用的。为保护环境，减少污染，每个使用DAB的实验室应当把DAB废液的去毒性处理制定成一项实验室守则，严格执行。

［1］Dariush Fahimi H.Peroxisomes:40 years of histochemical staining，personal reminiscencesHistochem Cell Biol.2009，131(4):437-40

［2］陈庆，康维钧，联苯胺类化合物的毒性研究进展.河北医科大学学报，2007，28(6):460.

［3］Lunn G，Sansone EB.Safe disposal of diaminobenzidine.Trends Genet，1992，8:7.

［4］Horn H.Safe diaminobenzidine(DAB)disposal.Biotech Histochem，2002，77(4):229.

［5］王晋芬，王跃华.DAB废物处理程序中华病理学杂志，2005，34(12):775.