新城疫抗体水平与免疫保护相关性试验

汪文斌,张小荣,焦库华,吴艳涛

(扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏 扬州 225009)

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性、高度接触性传染病,给养禽业带来巨大的经济损失。免疫接种是控制ND的重要措施,而科学合理的免疫程序是确保免疫效果的关键。随着疫苗的广泛应用,近年来ND的流行已得到明显控制。但由于我国养殖模式多样,生物安全水平不一,以及免疫程序混乱,免疫鸡群仍经常发生ND[1-4]。本试验从免疫保护抗体水平临界值、疫苗的免疫期等方面研究了影响ND免疫程序的因素,为制定合理的免疫程序提供依据。

1 材料

1.1 疫苗与抗原 NDV标准抗原和阳性血清购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,用于测定NDV HI抗体效价。ND活疫苗(LaSota株):武汉中博生化有限公司,兽药生字(2006)170262007;ND灭活疫苗:齐鲁动物保健品有限公司,兽药生字(2006)150252008。

1.2 仪器和设备 96孔V形血凝板,定量移液器,微型振荡器,恒温箱,离心机,水浴锅等。

1.3 SPF鸡胚及试验鸡 SPF种蛋购自山东家禽研究所;1日龄伊莎(褐)雏鸡250羽,购自无锡种鸡场有限公司。

2 方法

2.1 NDV强毒株的ELD50测定 将NDV F48E9强毒株(本室保存)经SPF鸡胚复苏后,按文献[5]测定其ELD50。

2.2 免疫保护抗体临界值的确定

2.2.1 母源抗体对雏鸡的保护 将100羽1日龄雏鸡随机分成 A、B、C、D、E 5组,每组 20羽。当NDV HI抗体上升到峰值后相应下降为8、6、4、2和0左右时,经颈部皮下注射NDV F48E9强毒株,105ELD50/羽。攻毒后第3天和第5天采集泄殖腔棉拭子,分离病毒,方法见文献[6]。

2.2.2 疫苗免疫抗体对鸡群的保护 取60羽1日龄雏鸡,在7日龄时经颈部皮下注射ND灭活疫苗0.2mL/羽,27日龄分别经颈部皮下接种ND灭活疫苗0.5mL/羽、经滴鼻和点眼接种ND活疫苗2头份/羽。从最后一次免疫开始,每周随机采集10份血样,检测血清中 NDV HI抗体,方法见文献[5]。根据检测结果,将上述试验鸡随机分为F、G、H 3组,每组20羽,分别于 NDV HI抗体上升到峰值后下降为6、4和2左右时,注射NDV F48E9强毒株,107ELD50/羽。攻毒后第3天和第5天采集泄殖腔棉拭子,分离病毒。

2.3 疫苗免疫期的观察 将40羽1日龄雏鸡随机分成2组。34日龄时经检测NDV HI抗体为0,2组试验鸡分别经颈部皮下接种ND灭活疫苗0.5mL/羽和滴鼻免疫活疫苗2头份/羽,此后每周随机采集10份血样,检测血清中NDV HI抗体。

2.4 母源抗体的监测 30羽1日龄雏鸡,从1日龄起每天采血1次,1周龄后每隔1 d采血1次,每次随机采集15份血样,检测血清中NDV HI抗体,直至母源抗体消失。

3 结果

3.1 NDV强毒株的ELD50 每0.1mL F48E9的尿囊液其病毒含量为108.78ELD50。

3.2 免疫保护抗体临界值 ND母源抗体以及疫苗免疫抗体对NDV强毒攻击的保护效果见表1和表2。从表中可看出,当抗体效价＞6时,攻毒保护率均为100%,且在攻毒后第3天第和第5天未检出泄殖腔排毒;当抗体效价在4至6之间时,攻毒保护率均为100%,但有少量鸡被检出泄殖腔排毒;当抗体效价＜4时,攻毒保护率为0%～85%,攻毒后排毒检出率为40%～100%。

3.3 疫苗的免疫期 ND灭活苗和弱毒活疫苗的免疫期观察结果见图1。ND灭活疫苗免疫后1周内没有检测到HI抗体,2周后上升为5.8,6周后达到峰值9.2,之后随着日龄增加缓慢下降,至23周时为3.8。在抗体监测期间,从免疫后2周开始,抗体合格率(当抗体≥5时判定为合格,以下同)都在90%以上,直到免疫后19周抗体合格率降到75%以下。

ND活疫苗免疫鸡1周后HI抗体平均为4.4,免疫后2周达到峰值6.6,免疫后5周迅速下降到4.5,之后维持在4～4.5;免疫后17周抗体水平降为3.9。在抗体监测期间,除免疫后第2周和第3周抗体合格率分别为100.0%、80.0%外,其他时间段的抗体合格率都在75.0%以下,其中从免疫后19周开始抗体合格率降为0。

表1 新城疫母源抗体对强毒攻击的保护试验

表2 新城疫免疫抗体对强毒攻击的保护试验

3.4 母源抗体的消长规律 1日龄雏鸡HI抗体平均为9.4,3日龄时上升至峰值10.4,之后随着日龄增加抗体缓慢下降,17日龄时为4.4,19日龄和27日龄时分别降为3.5和0.9,34日龄时抗体降为0。

4 讨论

许多学者曾研究了新城疫的免疫保护抗体临界值,但结论不一[6-7]。本试验中,母源抗体以及疫苗免疫抗体≥4时对F48E9强毒株的攻击可提供完全的保护,且能有效地抑制泄殖腔排毒;而抗体水平＜4时不能提供完全的免疫保护,泄殖腔排毒现象严重。所以对NDV强毒株的攻击,抗体水平为4仍然是起免疫保护作用的临界值。

随着疫苗的广泛应用,近年来ND的暴发流行已明显受到控制,但经常在免疫鸡群中出现以产蛋下降为主要症状的非典型新城疫。导致其发生的因素有很多,NDV强毒在养殖场长期存在得不到净化,一旦动物机体抵抗力下降或在应激下便容易发病。从本试验的攻毒后排毒检测结果来看,当ND母源抗体平均值为4.9时对F48E9强毒株的攻击,虽然可提供完全保护,但不能完全抑制泄殖腔排毒。这提示我们,在评价疫苗效果时,不能简单地只看攻毒保护率高低,还应结合疫苗对野毒排出体外的抑制能力等做出综合判断。

疫苗免疫期的动态观察结果显示,两种疫苗的免疫期(HI抗体≥4以上的时间,以下同)都达到了15周。这提示我们,并非免疫次数越多而效果越好,而应根据抗体监测结果,适时加强免疫,才能避免抗体干扰获得良好的免疫保护。

从监测结果可以看出,母源抗体于1日龄时便可检测到,随后很快上升,3日龄达到峰值,之后随着日龄增加抗体缓慢下降,19日龄时抗体降为4以下,而维持在4以上的时间长达17 d,这与文献[8]报道的结果相似。在1～3日龄,由于雏鸡不断从体内卵黄囊获取了大量的免疫球蛋白,使得母源抗体水平升高,但吸收完毕后随着雏鸡的生长,母源抗体水平又不断下降。从本试验结果来看,建议ND的首免时间为15～17日龄,但各个鸡场(群)应根据母源抗体监测的实际结果来确定首免日龄。

在生产中,需要结合实际情况,发挥ND灭活疫苗和低毒力活疫苗各自的优势,给鸡群提供良好的免疫保护。对于雏鸡和产蛋高峰期蛋鸡,多采用低毒力活疫苗,其原因是短期内快速产生的免疫可为鸡群提供及时的保护,而产蛋鸡也不至于因灭活疫苗接种引起的应激导致产蛋下降。ND灭活疫苗可刺激机体产生高抗体水平并维持较长时间,多用于加强免疫以及产蛋前的鸡群。

[1]王红宁.禽呼吸系统疾病[M].北京:中国农业出版社,2002:63-86.

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[5]殷震,刘景华.动物病毒学[M].北京:科学出版社,1997:232-235.

[6]程相朝,张春杰,李银聚,等.新城疫野毒株与F48E9强毒株对不同抗体水平雏鸡的感染试验[J].中国兽医科技,2002,32(6):24-25.

[7]靖宁,罗国喜.鸡新城疫母源抗体消长规律和免疫保护抗体临界值的测定[J].当代畜牧兽医,2007,3:9-10.