顶空毛细管气相色谱法测定盐酸地芬尼多原料药中有机溶剂的残留量

宋更申，曹凤习，闫凯，姜建国(河北省药品检验所，石家庄市050011)

盐酸地芬尼多(Difenidol hydrochloride)是临床上常用的抗晕止吐药，用于治疗高血压、美尼尔氏综合征等引起的眩晕症，口服吸收迅速，疗效确切。盐酸地芬尼多在合成过程中，使用了乙醇、异丙醇、四氢呋喃等有机溶剂，这些溶剂会对人体健康和环境造成危害，控制其残留量对保证药品质量和用药安全有重要意义。关于盐酸地芬尼多残留溶剂的研究，尚未见文献报道。本文根据药品注册的国际技术要求·质量部分(ICH)[1]的指导原则和《中国药典》2010年版[2]的相关规定，并参考有关文献[3，4]，采用顶空气相色谱法，以二甲亚砜为溶解介质，同时测定上述3种溶剂。结果表明，该方法操作简便，精密度好，结果准确可靠。

1 仪器与试药

6890型气相色谱仪、7694E型顶空进样器、B.02.01-SR1工作站(美国Agilent公司)；BP 211D型电子天平(德国Sartorius公司)。

盐酸地芬尼多原料药(江苏四环生物股份有限公司，批号:071122、071215、071225，含量:99.8%、99.7%、99.9%)；乙醇、异丙醇、四氢呋喃均为色谱纯(天津光复精细化工厂)；试验用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为DB-624毛细管柱(60 m×530 μm×3 μm)，柱温:85℃；氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度:250℃；不分流进样，进样口温度:150℃；载气:氮气，流速:5.0 mL·min－1；顶空进样，平衡温度:90℃，平衡时间:30 min，顶空瓶加压时间:0.2 min，进样时间:1 min，定量环体积:1 mL，定量环温度:100℃，传输线温度:110℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液:精密称取乙醇250 mg、异丙醇250 mg、四氢呋喃36 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液:精密量取对照品贮备液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液:精密称取本品约0.25 g，置于20 mL顶空进样瓶中，精密加二甲亚砜5 mL，密封，振摇使溶解，即得。

2.3 系统适用性试验

取“2.2”项下的对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，记录色谱，见图1。

图1结果表明，3种溶剂分离良好，理论板数均不低于5000。

2.4 线性关系

精密称取四氢呋喃36 mg，置于100 mL容量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取10、10、5、5、5、2 mL，分别置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，摇匀；再精密称取乙醇250 mg、异丙醇250 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取10、5、5、5、2、0.2 mL，分别置于25、25、50、100、100、100 mL容量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，摇匀。分别精密量取5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，进行线性回归，结果见表1。

表1 3种溶剂线性关系考察结果(n＝6)Tab 1Linear ranges of 3 kinds of organic solvents(n＝6)

2.5 精密度试验

精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，共6份，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，计算乙醇、异丙醇、四氢呋喃的RSD分别为1.0%、0.8%、1.3%。

2.6 重复性试验

精密称取本品(批号:071122)约0.5 g，置于20 mL顶空进样瓶中，共6份，精密加二甲亚砜5 mL，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，检出本品中乙醇含量平均为0.02%，RSD＝1.1%；异丙醇为0.02%，RSD＝0.7%；四氢呋喃未检出。

2.7 中间精密度试验

取批号为071122样品，由3名不同试验者在不同时间、以不同仪器、采用不同色谱柱测定本品的有机溶剂残留量，结果检出本品中乙醇残留量平均为0.02%，RSD＝1.3%；异丙醇残留量平均为0.02%，RSD＝1.7%；四氢呋喃均未检出。表明本方法中间精密度良好。

2.8 回收率试验

精密称取已知各溶剂残留量的样品(批号:071122)0.5 g，置于20 mL顶空进样瓶中，共9份，分别精密加入对照品贮备液0.40、0.50、0.60 mL，各3份，再分别用二甲亚砜稀释至5.0 mL，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，以外标法计算。结果，乙醇、异丙醇、四氢呋喃的平均回收率分别为99.1%、99.6%、98.5%，RSD分别为0.7%、0.8%、1.3%。

2.9 稳定性试验

取“2.2.2”项下的对照品溶液，于室温下放置0、1、2、4、8、12 h，分别按“2.1”项下的色谱条件进行分析。结果，乙醇、异丙醇、四氢呋喃在12 h内测定的峰面积的RSD分别为0.6%、1.1%、1.2%，表明本溶液在12 h内稳定。

2.10 定量限试验

用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为10时计算乙醇、异丙醇、四氢呋喃的定量限。结果定量限分别为5.05、3.05、0.91 μg·mL－1。

2.11 样品中有机溶剂的残留量测定

取乙醇、异丙醇、四氢呋喃和3批样品，按“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，以外标法计算3种有机溶剂的残留量，结果3批样品中乙醇的残留量均为0.02%，异丙醇的残留量均为0.02%，四氢呋喃均未检出。

3 讨论

试验中先后选择了HP-1、HP-INNOWax、DB-624等不同极性的色谱柱，结果以供试品在DB-624上的峰形和分离度最佳。

盐酸地芬尼多在甲醇中易溶，在乙醇和二甲亚砜中溶解，在水、N，N-二甲基甲酰胺和三氯甲烷中略溶，由于选用顶空进样方式，所以不宜用甲醇作溶解介质，故选择二甲亚砜作溶解介质。

试验考察了不同的顶空温度和顶空平衡时间对样品测定的影响。结果表明，样品在70、80、90℃的顶空温度下均稳定，为了提高检测灵敏度，本试验选择90℃作为顶空平衡温度；由于本品在30、40 min的顶空平衡时间内得到的峰面积基本一致，因此本试验选择30 min作为顶空平衡时间。

本方法3种有机溶剂的定量限为0.91～5.05 μg·mL－1，灵敏度完全可以满足盐酸地芬尼多中有机溶剂残留量测定的需要。

ICH[1]和《中国药典》2010年版[2]都规定，四氢呋喃属第2类残留溶剂，在药品中应限制使用，限度均为0.072%；乙醇、异丙醇属第3类低毒性溶剂，限度均为0.5%。本试验测得3批样品中3种有机溶剂的残留量均符合ICH和《中国药典》2010年版的规定。

[1]周海钧主译.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京:人民卫生出版社，2001:343.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:63.

[3]宋更申，姜建国，张西如.顶空毛细管气相色谱法测定罗库溴铵中的残留溶剂[J].中国现代应用药学，2009，26(10):849.

[4]李珂珂，谭丰苹.毛细管气相色谱法测定拉米夫定中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2007，18(19):1502.