HPLC法测定六味地黄膏滋剂中丹皮酚的含量

史宏妍，潘成学(1.河南省中医院，郑州市450003；2.郑州大学药学院，郑州市450001)

六味地黄丸源于宋代钱乙所著的《小儿药证真诀》，由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成，具有滋阴补肾功效，可以达到脾、肝、肾三阴同补的效果，通常用来治疗小儿先天不足，发育迟缓等病症。膏滋剂系中医长期习惯用于治疗慢性病的一种浸出药剂，对久病体虚者具有滋补作用，结合二者的特点，笔者把六味地黄制成膏滋剂。丹皮酚是牡丹皮的主要有效成分，也是质量控制的主要指标之一，为进一步完善该制剂质量控制方法，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定该膏滋剂中丹皮酚的含量，方法简便易行，结果准确可靠。

1 仪器与试药

2695型Separations Module高效液相色谱仪、Empower数据采集系统(美国Waters公司)；纯水器(美国Millipore公司)。甲醇为色谱纯(天津市四友精细化学品有限公司)；丹皮酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号:0908-9704)；六味地黄丸膏滋剂取自本医院制剂；水为超纯水，其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶；流动相:甲醇∶水＝70∶30；流速:0.8 mL·min－1；柱温:25℃；进样量:10 μL；检测波长:274 nm。理论板数按丹皮酚峰面积计算≥3500[1]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备:取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成1 mL含0.020 mg的溶液，即得丹皮酚对照品溶液[2]。

2.2.2 样品溶液制备:精密称取六味地黄丸膏滋剂0.5 g，置于25 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，称定，超声提取30 min，放冷，加甲醇补足失重，摇匀，离心5 min，精密吸取上清液1 mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，混匀，即得[3]。

2.3 线性关系的考察

精密吸取对照品贮备溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 μL，依次注入液相色谱仪，记录色谱图。以丹皮酚进样量(X，μg)为横坐标，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝5081.61775X+5.69132，(r＝0.9999，n＝6)。结果表明，丹皮酚检测浓度在50～300 μg·mL－1范围内与峰面积积分值具有良好线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液重复进样6次，每次10 μL，按“2.1”项下色谱条件重复6次，测定峰面积[4]。结果RSD＝1.37%(n＝6)，表明仪器精密度较好。

2.5 重复性试验

精密称取同一批样品适量，共5份，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，并进行色谱分析。结果，RSD＝1.62%，表明方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

精密称取供试品溶液10 μL，分别于0、1、2、4、6、8、12、24 h进样，测定。结果，RSD＝1.53%，表明供试品溶液24 h内基本稳定。

2.7 空白对照试验

按处方比例和样品制备工艺制成不含丹皮酚阴性对照品，按“2.2”项下方法制成阴性对照品溶液并测定。结果，阴性对照品在丹皮酚吸收峰处无吸收峰，表明其对样品测定无干扰[5]。

2.8 加样回收试验

精密称取已知含量样品(批号:20091003)适量，精密加入丹皮酚对照品溶液(0.572 mg·mL－1)1.0 mL，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，平行6份，按“2.1”项下色谱条件测定样品含量，计算加样回收率[6]，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n＝6)Tab 1Results of recovery test(n＝6)

2.9 样品含量测定

取3批样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，取10 μL进样，按上述方法测定样品中的丹皮酚的含量，结果见表2。

表2 六味地黄丸膏滋剂丹皮酚含量测定结果(n＝3)Tab 2Content determination of paeonol in Liuwei dihuang soft extract(n＝3)

3 讨论

随着21世纪全球进入“崇尚自然”、“回归自然”的健康新概念阶段，人类疾病谱和医疗模式均发生了重大变化，加上合成药物带来的危害以及中药、天然药物等传统药物疗法取得的明显成效，均为中药、天然药物的发展带来了良好的机遇。本品制剂具有处方确定、剂型成熟，原料充足、成本低廉，药性滋润、口感好、便于服用等诸多优点。因此，该研究将其作为院内制剂，成为老少皆宜、独树一帜的剂型。六味地黄膏滋剂成品较黏稠，为便于服用，应用大口容器盛装，容器应洗净，灭菌干燥后使用，以免生霉变质。微生物检测应符合煎膏剂项下的各项检查，在此不再罗列。分装时应待煎膏充分冷却后再装入容器，然后加盖，切勿在热时加盖，以免水蒸气冷凝后回入煎膏中，久贮后易产生霉变现象。本品制成膏滋剂后具有药物浓度高、体积小、稳定性好等诸多优点，且制剂工艺简便，质量稳定可控，疗效较为显著。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:599.

[2]陈英红，姜瑞芝，高阳.HPLC法测定耳聋左慈丸中马钱苷和丹皮酚的含量[J].中国药事，2007，21(9):733.

[3]李娴，王本杰，袁桂艳，等.六味地黄丸中四种活性成分的HPLC法测定[J].中国医药工业杂志，2010，41(2):126.

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[5]程荷珍，王桂红，王萍.六味地黄丸(浓缩丸)溶出度的测定[J].中成药，2001，23(5):380.

[6]贾瑞艳，刘影.HPLC法测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚的含量[J].黑龙江医药，2009，22(2):120.