HPLC 法测定小儿肺热平胶囊中黄芩苷的含量

田雁钰（河南南阳市食品药品检验所，南阳市 473061）

小儿肺热平胶囊是由黄连、黄芩、柴胡、甘草、朱砂、珍珠、羚羊角、人工牛黄、冰片等17味中药制成的复方制剂，具清热化痰、止咳平喘、镇惊开窍之功效。黄芩的有效成分为黄芩苷，《中国药典》2010年版（一部）[1]对其标准仅规定了鉴别一项，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定小儿肺热平胶囊中黄芩苷含量，方法可靠、简单可行、专属性强、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

LC-2010CHT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；超声波清洗仪（上海金利超声公司）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200514）；小儿肺热平胶囊（吉林省华侨药业有限公司，批号：20090407、20090709、20090908）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为实验室自制Ⅰ级纯化水，磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－0.2%磷酸（30∶70）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：280 nm；柱温：35℃；进样量：20 μL。理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2 000，各组分间的分离度符合要求。

2.2 线性关系考察

精密称取经五氧化二磷减压干燥12 h的黄芩苷对照品约20.04 mg，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样，各20 μL，记录色谱图。以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度为横坐标（X），进行回归分析，得到方程为Y＝2 285.2X+39.6（r＝0.999 9）。结果，黄芩苷进样量在0.160 3～1.282 6 μg范围内线性关系良好。

2.3 阴性样品的干扰试验

取不含黄芩的阴性样品的装量差异项下的内容物约1 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇约40 mL，超声（功率220 W，频率50 Hz）处理30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为阴性样品溶液。按“2.2”项下色谱条件进样测定。结果表明，阴性样品对黄芩苷的测定无任何影响。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.黄芩苷对照品；B.小儿肺热平胶囊样品；C.阴性样品；1.黄芩苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.baicalin control；B.samples of Xiao’er feireping capsules；C.negative sample；1.baicalin

2.4 精密度试验

取黄芩苷对照品贮备液4.0 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。取此对照品溶液，重复进样5次，每次进样20 μL。结果，测得黄芩苷峰面积RSD＝0.32%，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验

取样品6份，分别测定黄芩苷含量。结果，平均含量为每粒1.26 mg，RSD＝0.46%，表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取样品的装量差异项下的内容物约1 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇约40 mL，超声（功率220 W，频率50 Hz）处理30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。在室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h，作为供试品溶液。按“2.2”项下色谱条件进样测定，测得黄芩苷峰面积RSD＝0.82%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 加样回收率试验

精密称取已知含量的小儿肺热平胶囊样品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，共6份，分置于50 mL量瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品贮备液4.0 mL，按照“2.6”项下供试品溶液制备方法处理，按照“2.2”项下色谱条件进样，测定黄芩苷，计算回收率，结果见表1。

表1 黄芩苷回收率测定结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test of baicalin（n＝6）

2.8 样品含量测定

取3个批号样品的装量差异项下的内容物，混匀，取约1 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇约40 mL，超声（功率220 W，频率50 Hz）处理30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品贮备液4.0 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。按“2.2”项下色谱条件，各进样20 μL，记录峰面积，按外标法计算样品中黄芩苷的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

3 讨论

3.1 供试品溶剂的选择

本试验分别考察了用盐酸-甲醇（1∶100）、甲醇超声提取[2]，结果显示供试品在甲醇中黄芩苷提取完全，故选甲醇作为供试品的溶剂。

3.2 超声时间选择

供试品采用甲醇超声提取，比较了超声提取20、30、40、50 min的提取效果，结果显示，超声30 min黄芩苷提取完全，故超声时间选择30 min。

3.3 流动相的选择

采用甲醇-磷酸[2]体系，黄芩苷与样品中其它成分分离效果不理想，而采用乙腈－0.2%磷酸（30∶70）为流动相，分离效果好，无干扰，故选择乙腈－0.2%磷酸（30∶70）为流动相。

综上所述，采用HPLC法测定小儿肺热平胶囊中黄芩苷含量，方法可靠、简单可行、专属性强、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：484.

[2]王安民，张亚军.高效液相色谱法测定鼻康宝胶囊中黄芩苷的含量[J].儿科药学杂志，2009，15（1）：43.