依达拉奉对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马Chat、NR2B表达的影响

李妍博，张生林

（山西医科大学第一临床医院老年病科，山西太原 030001）

依达拉奉是一种新型的脑保护药，具有清除自由基、抗细胞凋亡和神经保护作用[1]。临床研究结果表明，依达拉奉在脑梗死中有显著的神经保护作用[2-3]。血管性疾呆（VD）是一组由于缺血或出血性的脑血管病及全脑缺血低氧引起的认知功能障碍综合征。本文通过观察依达拉奉对VD大鼠海马Chat、NR2B表达的影响，研究依达拉奉的预防及治疗作用，为VD的治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 动物分组及模型制备

实验动物由山西医科大学实验动物中心提供，选用雄性Wistar大鼠 36只，体重 200～250 g，适应性饲养 2周，采用“两血管阻断+硝普钠降压法”[4]制备VD大鼠模型，B组（VD组）、C组（依达拉奉治疗组）、D组（预防治疗组）行双侧颈总动脉反复缺血-再灌注2次，每次10 min，同时在缺血-再灌注前给予硝普钠2.5 mg/kg腹腔注射，A组仅暴露双侧颈总动脉而不结扎，且不注射硝普钠。

1.2 给药方法

C组大鼠于术后第7天给予依达拉奉皮下注射3mg/kg，D组于造模麻醉前给予同等剂量的依达拉奉，每天1次给药，共20 d；A组与B组给予等量生理盐水皮下注射。

1.3 学习记忆能力的测定

根据Morris水迷宫实验进行大鼠学习记忆功能测定，历时5 d，前4 d记录在2 min内找到并爬上平台的时间为大鼠的逃避潜伏期，即学习成绩；第5天撤掉平台后，记录大鼠穿越平台的次数以测试其记忆能力。

1.4 制备组织切片

各组动物分别于造模后第30天处死，灌洗固定后剥取海马组织，石蜡包埋，脱蜡，应用免疫组化方法制片。

1.5 灰度值分析

各组取海马CA1、CA3区各10个测试点，求平均值进行分析。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 水迷宫实验结果 见表 1。

表1 各组大鼠水迷宫实验结果（）

表1 各组大鼠水迷宫实验结果（）

与 A 组比较，▲P＜0.05；与 B 组比较，●P＜0.05；与 C 组比较，■P＜0.05

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2.1.1 定位航行实验结果 B组逃避潜伏期均较A、C、D组延长（P＜0.05），D 组较 C 组逃避潜伏期缩短（P＜0.05）。

2.1.2 空间搜索实验结果 B组穿越平台次数较A、C、D组减少（P＜0.05），D 组较 C 组次数增加（P＜0.05），说明 B 组记忆能力较其他三组均降低，D组较C组记忆能力提高。

2.2 图像灰度值分析

与A组比较，B组海马CA1、CA3区的Chat及NR2B表达明显，差异有高度统计学意义（P＜0.01），C组、D组与B组比较，海马 CA1、CA3 区的 Chat及 NR2B 表达增加（P＜0.05），但较 A 组减少（P＜0.05）。 见表 2。

表2 各组大鼠海马 CA1、CA3区Chat、NR2B表达（）

表2 各组大鼠海马 CA1、CA3区Chat、NR2B表达（）

与 A 组比较，■P＜0.05，▲P＜0.01；与 B 组比较，●P＜0.05

3 讨论

本实验结果表明，B组大鼠逃避潜伏期明显延长，而C组与D组较B组均缩短，且D组与A组比较，差异无统计学意义，说明依达拉奉能够改善VD大鼠的认知，同时说明依达拉奉有预防VD发生的作用。其机制可能与依达拉奉能够抑制脂质过氧化、清除过量自由基、保护细胞线粒体、阻止自由基释放而引起的迟发型的组织损害有关[5]。

Chat是胆碱能神经元的特殊标志，Chat免疫反应阳性神经元减少与大鼠学习记忆障碍程度呈正相关[6]。本实验发现，Chat蛋白在B组海马区表达极少，可能是因为脑组织遭受自由基的氧化损伤，导致神经细胞凋亡。在C组与D组中其表达增加可能是因为依达拉奉清除过量生成的自由基保护细胞线粒体，抑制脂质过氧化作用和血管内皮细胞损伤[2]，阻止了caspase-3的活化[7]，提高了Bcl-2的表达[8]，减少了缺血区神经细胞的凋亡。

NR2B是NMDA受体的调节亚单位，在学习和记忆中起关键作用[9]。脑缺血引起神经元去极化，导致谷氨酸（Glu）的大量释放，Ca2+内流主要由谷氨酸受体的一种亚型NMDA受体通道介导，Ca2+超载造成神经元损伤，这就是Glu对神经元的兴奋毒性损伤[10]。本研究中，VD大鼠海马NR2B表达减少的机制可能与海马缺血、低氧致神经元死亡或结构受损有关，也可能与神经元低代谢影响神经传递有关，而经依达拉奉干预后NR2B表达增加可能与依达拉奉能够抑制谷氨酸释放[11]，进而改善局部脑血流量和脑微循环及脑能量代谢有关。

本实验发现，C组Chat及NR2B表达与D组比较，差异无统计学意义，但水迷宫实验中D组较C组学习记忆能力提高，可能仍有其他机制的影响，有待于进一步研究。

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