中药阳起石温肾作用实验研究

杨明辉，王久源，张蜀武，杨苏文，戴德银，李泽兴

（1.中国人民解放军452医院，四川 成都 610021； 2.成都中医药大学，四川 成都 610061）

阳起石是传统温肾壮阳药，《神农本草经》记载：“主崩中漏下，破子脏中血，瘕结气，寒热腹痛，无子，阴痿不起，补不足。”[1]后世本草逐渐突出其温肾壮阳功效。历代医家也多运用单味阳起石或配伍成复方治疗肾阳虚型阳痿、早泄，并推崇为治疗阳痿的要药，“于阳之不能起者，克起”[2]。由于阳起石被大量采用，阳起石伪品在古代就已出现，使得人们对其药用价值和安全性产生了怀疑。孙文倩的局部抽样调查发现，67份阳起石商品药材鉴定结果为17种矿物（岩石）[3]。为此，对于阳起石是否具有温肾壮阳作用，应当加以研究，给予科学评价。

1 材料与方法

1.1 仪器、动物及试药

CB 3201型数字、描记式小动物测定仪（中国川北电子工业公司）。昆明种小白鼠，雄性，体重（28±5）g，由四川抗生素工业研究所动物房提供。氢化可的松注射液（湖北郧北制药厂，批号为20050109）；阳起石购自成都市中药材公司，经成都中医药大学药学院中药鉴定教研室、西南冶金地质勘探公司地质研究所共同鉴定为绢云母化透闪石岩，含铁透闪石岩，为药用正品阳起石；黄酒，豌豆淀粉，蒸馏水；男宝（天津力生制药厂，批号为200506054）；0.9%氯化钠注射液（生理盐水）。补体致敏及未致敏酵母菌药（1×108/mL），由成都中医药大学微生物教研室提供。

1.2 试验药液制备

阳起石末制备[4]：刷净阳起石表面，砸碎，碎至约1 cm大小，单层，置陶瓷盘中，用箱式电阻炉在700℃恒温加热，待样品变红时再煅15～25 min，至红透时取出，黄酒淬，反复煅、淬7次，阳起石与黄酒的比例为5∶1（均按质量计算，以下同），将煅淬后的阳起石阴干，研成细末，过100目筛，备用。

淀粉溶剂制备：将豌豆淀粉过100目筛，筛后将淀粉溶解于蒸馏水中（事先用烧杯盛好蒸馏水，淀粉均匀投放，自然溶解，淀粉与蒸馏水的比例为3∶100），将烧杯加热，边加热边用玻棒轻轻搅拌，以溶液沸腾为度，制成淀粉胶体助溶剂。

各药物混悬液制备：取各种试验药物，均以淀粉胶体助溶剂为溶剂，配制各种质量浓度的药物混悬液，即高（200 g/L）、低（100 g/L）质量浓度的阳起石混悬液及男宝（药末过100目筛）混悬液（16 g/L）。

1.3 动物分组方法

让小鼠在实验环境下适应3 d，随机分为6组，即正常对照组（A组）、模型组（B组）、淀粉溶剂试验组（C组）、阳起石高质量浓度试验组（D1组）、阳起石低质量浓度试验组（D2组）、男宝试验组（E组），每组各12只小鼠。

1.4 阳虚小鼠造模方法

[5]方法，按25 mg/kg剂量，用皮试针管、5号针头行小鼠臀部肌肉注射氢化可的松注射液，每天1次，连续7 d。

1.5 给药方法

A组每天臀部肌肉注射生理盐水0.1 mL（与造模时所给氢化可的松容量相当），胃管喂饲生理盐水0.5 mL；其余各组每天除臀部肌肉注射氢化可的松25 mg/kg外，B组胃管喂饲生理盐水0.5 mL。各组各试验组灌胃给予相应药物，给药容积为0.5 mL/d。各组给药从肌肉注射氢化可的松（或生理盐水）后第2天开始，共6 d。

1.6 观察项目及方法

一般状态：观察被毛、姿态、摄食、活动、皮肤温度变化、死亡情况。

体重变化：于试验前1 d和末次给药后12 h时分别称量小鼠体重。

自主活动计数：于末次给药后12 h时，用数字、描记式小动物测定仪测定各组小鼠活动情况。在暗环境下，先将小鼠放入笼内适应3 min，开动秒表，计数小鼠5 min内笼内活动次数。

红细胞免疫指标测定：采用红细胞C3b受体花环试验（RBCC3bRR）和红细胞免疫复合物花环试验（RBC-ICR）测定[6]。取小鼠尾血1～2滴，加入2 mL生理盐水中，洗涤离心3次，每次以1000 r/min离心5 min，配成1.25×107/mL的RBC悬液，备用。取两支试管，每管加入待测RBC悬液0.075 mL，第1管再加补体致酸酵母菌液（1×108/mL）0.075 mL，均摇匀放入37℃水浴箱中水浴30 min，取出后加生理盐水0.15 mL混匀，再加0.25%戊二醛0.05 mL，轻轻混匀，取1/3量水平涂片、干燥、瑞氏染色，高倍镜下随机计数200个RBC，以黏附2个以上酵母菌的RBC为花环阳性细胞，算出百分率。第1管为RBC-C3bRR，第2管为RBC-ICR。试验由成都中医药大学微生物与寄生虫实验室协助完成。

低温游泳时间测定：末次用药后12 h时，将小鼠放入8℃水浴箱中（小鼠尾根部用保险丝缠绕，质量占小鼠体重的10%，水深13 cm），记录小鼠从放入水中至鼠鼻孔不再露出水面的时间。

2 结果

一般状态：A组小鼠形态正常，体重增加，活泼，无死亡，皮温正常。B组小鼠用药3 d后出现消瘦、竖毛、被毛失去光泽、拱背、蜷缩、尾发凉，继之出现被毛枯槁、嗜睡、食欲不振，第5天个别小鼠开始出现身体发凉，数小时（几小时至十几小时）后死亡，第6天时死亡率为25.00%。D1组小鼠用药第2天出现消瘦，皮毛基本光泽，活动较正常，无死亡。D2组小鼠用药第2天出现消瘦、懒动、毛色欠光泽，第4天出现死亡，第6天时死亡率为25.00%。C组小鼠整个试验过程中外观稍差于D1组，比较活泼，死亡1只。E组小鼠外观稍差于D2组，无死亡。

体重：结果见表1。可见，与用药前比较，除A组小鼠体重增加外，其余各组小鼠用药后体重均有不同程度下降，尤以D1组和D2组下降明显。

活动频数：结果见表1。可见，D1组、C组、E组阳虚小鼠活动情况明显改善，尤以D1组突出。

红细胞免疫指标：结果见表1。可见，就C3b受体花环率而言，与A组比较，B组明显不足，而其他各组无明显差异；与B组比较，D2组小鼠明显较优，D1组、C组、E组也较高，但无统计学意义。就免疫复合物循环率而言，各组间无明显差异。

低温游泳时间：由表1可见，与A组比较，B组和D2组小鼠低温游泳时间明显缩短（P＜0.01），其他各组缩短较明显（P＜0.05）；与B组比较，D1组、C组、E组小鼠低温游泳时间明显延长（P＜0.05）。

表1 中药阳起石温肾作用实验研究结果（）

表1 中药阳起石温肾作用实验研究结果（）

注：与 A 组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01；与 B组比较，□P＜0.05，■P＜0.01；与 C组比较，○P＜0.05，●P＜0.01。

组别低温游泳时间（s）给药 红细胞免疫指标（%）活动频数（次）动物死亡数（只） 体重增加（g）A 组（n=12）B 组（n=12）C 组（n=12）D1组（n=12）D2组（n=12）E 组（n=12）药物生理盐水氢化可的松淀粉溶剂阳起石阳起石男宝途径胃管喂饲肌肉注射胃管喂饲胃管喂饲胃管喂饲胃管喂饲剂量等容量25 mg/kg等容量5 mg/kg 2.5 mg/kg 0.4 mg/kg 0310302.090±1.21-1.420±1.44▲-1.309±0.76▲-3.760±1.24▲□●-3.540±1.97▲●-2.27±1.11▲447.0±37274.0±23▲343.0±26■398.7±12□279.0±51▲●388.0±30□RBC-C3bRR 16.29±5.389.29±1.93△13.41±5.9815.29±7.5114.71±2.81■12.71±5.85 RBC-ICR 13.14±5.3114.43±2.2614.57±4.4715.71±6.2011.14±6.6311.43±3.4692.14±26.245.64±13.2▲57.84±19.4△□60.84±14.1△□48.64±12.1▲62.5±23.1△□

3 讨论

利用肾上腺皮质激素造成“阳虚”动物模型在国内已有30多年的历史。对每只小鼠以大剂量（0.5～1.0 mg/d）氢化可的松肌肉注射后，5 d左右出现形寒、萎靡、蜷缩、毛色不光洁现象；阳虚小鼠肝脾体积缩小，颜色较淡，特别是脾脏体积只有正常对照组小鼠的1/4～1/5，肝脾组织结构、组织化学均发生了改变[6]。临床上阳虚患者表现为形寒肢冷、畏缩懒言、舌体胖淡、脉沉细，病理解剖检查多显示其有组织退化及垂体、肾上腺、睾丸、卵巢等各种内分泌腺质量下降[7]。阳虚动物模型也可见到细胞免疫功能降低。本试验中，模型组与正常对照组的红细胞免疫情况存在明显差异，与临床报道[8-9]相吻合。因此，肾上腺皮质激素造成的“阳虚”小鼠模型与人的“阳虚”表现极为相似，且用助阳药特别是温肾阳药后可得到部分纠正，故尤其类似“肾阳虚”。本试验中，应用氢化可的松25 mg/kg造成小鼠阳虚模型，模型组第3天即出现瘦削、蜷缩、皮肤松弛、毛色不洁等虚寒表现，死亡率达25.00%，活动频数、体重、低温游泳时间、红细胞免疫指数明显降低，说明造模成功。但由于经费原因，尚未作有关组织结构、组织化学指标的比较。

本试验结果显示，阳起石高质量浓度组对阳虚小鼠观察指标改善情况优于阳起石低质量浓度组，初步说明阳起石具有温补肾阳作用，但要剂量较大时才能起效；同时要注意，阳起石对体重有负面影响，原因有待进一步研究。

参考文献：

[1][清]黄 奭，辑.神农本草经（卷中）[M].北京：中医古籍出版社，1982：6-7.

[2][清]黄宫绣.本草求真[M].上海：上海科学技术出版社，1959：30.

[3]孙文倩.中药阳起石的研究".商品药材及其混淆品的鉴定[J].药物分析杂志，1993，13（2）：101-106.

[4]邝安堃.某些助阳药对于大剂量皮质激素所致耗竭现象的影响[J].中华内科杂志，1963（11）：113.

[5]郭 峰.红细胞免疫功能的初步研究[J].中华医学杂志，1982，62（12）：715.

[6]朱忠勇.实用医学检验学[M].北京：人民军医出版社，1992：922-928.

[7]张家庆.“阳虚”动物脱氧核糖核酸合成率和助阳药作用的研究[J].中医杂志，1982（3）：64-66.

[8]李文雄.肾虚与红细胞免疫功能关系的实验观察[J].成都中医学院学报，1989（4）：33.

[9]廖品东.老年人及肾虚患者红细胞免疫粘附活性的昼夜节律变化[J].中西医结合杂志，1990，10（4）：217.