反相高效液相色谱法同时测定愈酚伪麻待因口服溶液3组分含量

邓 红 ，陈睿妍 ，张 蜀 ，张 彧

(1.广东药学院药物研究所·广东省药物新剂型重点实验室，广东 广州 510006;2.深圳致君制药有限公司，广东 深圳 518110)

愈酚伪麻待因口服溶液由磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱及愈创木酚甘油醚组成，用于缓解无痰干咳或少痰的剧烈、频繁咳嗽，并可减轻鼻塞等症状。笔者采用反相高效液相色谱法同时测定该复方制剂中3种主要成分的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC10-AD型液相色谱仪，SPD-M10A二极管阵列检测器，Class LC-10A色谱工作站(日本Shimadzu公司);P680型高效液相色谱仪，UVD170U检测器，Chromeleon-HPLC management software(美国Dionex公司)。愈酚伪麻待因口服溶液(深圳致君制药有限公司，批号分别为070501，070502，070503，规格为100 mL中含磷酸可待因0.2 g、盐酸伪麻黄碱0.6 g、愈创木酚甘油醚2 g);磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱、愈创木酚甘油醚对照品及游离愈创木酚均由深圳致君制药有限公司提供;甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:DiamonsidTM-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，迪马公司);流动相:0.01 mol/L磷酸二氢钾(含0.002 mol/L的庚烷磺酸钠，磷酸调pH至3.0)-乙腈(70∶30，V/V);检测波长:215 nm;流速:1 mL/min;进样量:10 μL。理论塔板数按磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱、愈创木酚甘油醚计算均应不低于3000。

2.2 溶液制备

精密称取磷酸可待因对照品0.04 g、盐酸伪麻黄碱对照品0.12 g与愈创木酚甘油醚对照品0.4 g，置100 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品贮备液(实际配得的磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱与愈创木酚甘油醚的质量浓度分别为0.428，1.224，4.036 g/L)。精密量取上述贮备液1 mL，置10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。精密吸取样品1 mL(约相当于磷酸可待因2 mg、盐酸伪麻黄碱6 mg与愈创木酚甘油醚20 mg)，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取处方中除主药外的其余成分，配制成不含磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱及愈创木酚甘油醚的阴性样品，取1 mL，按供试品溶液制备方法处理，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液;另取已知杂质游离愈创木酚对照品适量，精密称定，加水制成10 μg/mL的杂质溶液。分别进样10 μL，记录色谱图。各组分峰分离度均符合要求，空白辅料无干扰(图1)。

图1 高效液相色谱图

标准曲线制备:分别吸取适量的混合对照品贮备液，加水稀释成含磷酸可待因 8.56，17.12，25.68，34.24，42.80，51.36，59.92，68.48 μg/mL，盐酸伪麻黄碱 24.48，48.96，73.44.97.92，122.40，146.88，171.36，195.84 μg/mL，愈创木酚甘油醚为 80.72，161.44，242.16，322.88，403.60，484.32，565.04，645.76 μg/mL 的系列混合对照品溶液。依次进样10 μL，以峰面积(A)对混合对照品溶液系列质量浓度(C)进行线性回归，得磷酸可待因回归方程 A=33689.18 C+27132.71，r=0.9999(n=8);盐酸伪麻黄碱回归方程 A=17339.06 C+16921.64，r=0.9999(n=8);愈创木酚甘油醚回归方程 A=19082.88 C+157497.64，r=0.9999(n=8)。结果表明，磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱、愈创木酚甘油醚质量浓度分别在 8.56 ～68.48 μg/mL，24.48 ～195.84 μg/mL，80.72 ～645.76 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取混合对照品溶液，连续测定6次。结果磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱与愈创木酚甘油醚峰面积的 RSD分别为0.91%，0.79%，0.92%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于配制0，0.5，1.0，2.5，4.0，8.0 h时进样测定。结果磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱与愈创木酚甘油醚峰面积的 RSD分别为0.43%，0.61%，0.64%(n=6)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验:取同一批(批号为070501)样品6份，依法测定，以外标一点法计算含量。结果磷酸可待因、盐酸伪麻黄碱及愈创木酚甘油醚含量的 RSD分别为0.49%，0.59%，0.55%(n=6)，表明方法重复性良好。

回收率试验:精密吸取混合对照品贮备液4，5，6 mL各3份，分别置50 mL量瓶中，加入阴性样品1 mL，加水稀释至刻度，依法测定含量。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品适量，依法测定，记录峰面积，以外标一点法计算含量。结果见表2。

表1 回收率试验结果(n=9)

3 讨论

本试验采用二极管阵列检测器，通过对3组分进行在线光谱检测，结果磷酸可待因在213 nm和285 nm、盐酸伪麻黄碱在206 nm和257 nm、愈创木酚甘油醚在222 nm和273 nm波长处有最大吸收。由于本品中磷酸可待因的含量仅为愈创木酚甘油醚的1/10，为了能同时检测3组分含量，决定以215 nm为检测波长。在此波长处，3组分都有较大吸收，且有相对均衡的响应值。

本品是碱性药物和中性药物的混合物，同时须考虑游离愈创木酚等有关物质和矫味剂、防腐剂等辅料的干扰。为此，笔者参考文献[1-3]，首先通过选择缓冲盐的种类、浓度及pH来优化色谱条件。结果随着pH增大，其碱性药物磷酸可待因和盐酸伪麻黄碱的保留时间延长，但峰形变差，至pH偏酸性时，碱性药物的保留很差，不能得到较好的分离。因此加入离子对试剂，使之与碱性药物离子生成疏水性离子对，增加其保留时间及改变选择性。在本试验的色谱条件下，各组分能达到较好的分离，且峰形对称，可用于本品中3个组分的同时测定。

表2 样品含量测定结果(n=3)

[1]魏雪芳，杜银签.反相离子对HPLC法测定博士止咳露中多个成分的含量[J].广东药学院学报，1999，15(3):164-166.

[2]李永庆，田子新，赵 文，等.高效液相色谱法测定雷登泰口服液中愈创木酚甘油醚、盐酸伪麻黄碱和氢溴酸右美沙芬的含量[J].药物分析杂志，2000，20(2):97-99.

[3]杜碧莹.HPLC法同时测定美敏伪麻口服溶液中3组分的含量[J].广东药学院学报，2008，24(3):249-250.