韩信草药材质量标准研究

黄 蘅，陈学松

(广西壮族自治区梧州食品药品检验所，广西 梧州 543002)

韩信草 Scutellaria indica Linn.为唇形科黄芩属植物，具清热解毒、活血止血、散郁消肿功效，用于治疗肝热烦躁、肺热喘咳、跌打肿痛、外伤出血、毒蛇咬伤等。目前尚未见韩信草药材的质量控制标准，笔者考察了韩信草的药材性状、显微特征，并进行定性、定量研究，建立了该药材的质量标准。现报道如下。

1 仪器与试药

LC 2010型高效液相色谱仪(日本岛津);AND GR-202型电子分析天平(日本)。野黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110842-200504);聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂);甲醇(色谱纯)，水(纯化水)，其他试剂(分析纯)。韩信草药材分别购自广西的梧州、贺州和玉林，经本所张涛主任中药师鉴定为唇形科黄芩属植物韩信草 Scutellaria indica Linn.的干燥全草。

2 方法与结果

2.1 药材性状和显微特征

2.1.1 性状

本品全草长10～25 cm，全体被毛，叶上尤多。根纤细。茎不分枝或多分枝，方柱形，表面灰绿色，被短柔毛。叶对生，叶片表面灰绿色或绿褐色，多皱缩，展平后呈圆形、卵圆形，长1～3 cm，宽0.8～2.5 cm，先端圆钝，基部浅心形或平截，边缘有钝锯齿，两面密生细毛。叶柄长0.2～2.5 cm。总状花序顶生，花偏向一侧，花冠蓝色，二唇形，长约1.5 cm，多已脱落。宿萼钟形，萼筒背部有一囊状盾鳞，呈“耳挖”状。小坚果横生，圆形，淡棕色。气微，味微苦。

2.1.2 显微特征(图1)

茎的横切面观:表皮细胞1列，外被角质层。非腺毛较多，由1～5个细胞组成。4个角隅处的表皮内侧有厚角组织。皮层为数列薄壁细胞，内皮层明显。中柱鞘纤维断续排列成环。形成层成环。木质部宽广。髓部薄壁细胞较大，中部通常中空。

叶的表面观:表皮细胞垂周壁波状弯曲，上下表皮均具腺鳞和非腺毛，以下表皮为多，非腺毛1～5个细胞，腺鳞多由4～8个细胞组成。上表皮细胞稍大，非腺毛多为2～3个细胞，略粗短。下表皮非腺毛略长，以叶脉处为多，气孔为直轴式和不等式。

2.2 化学鉴别反应

图1 韩信草组织显微特征图

取本品粉末2 g，加80%乙醇30 mL，置水浴上回流30 min，趁热过滤，即得供试品溶液。取供试品溶液1 mL，加镁粉少许及浓盐酸4滴，溶液渐呈红色(黄酮类成分反应)。取供试品溶液1 mL，加1%三氯化铁试液1滴，溶液呈墨绿色(酚类成分反应)。不同产地的5批样品化学鉴别反应均呈正反应。

2.3 薄层色谱鉴别

取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液。吸取2.2项下的供试品溶液和对照品溶液各1 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点(图2)。

图2 韩信草薄层色谱图

2.4 有效成分含量测定(高效液相色谱法)

2.4.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水-乙酸(35∶61∶4);流速:1 mL/min;柱温:35℃;检测波长:335 nm;进样量:10 μL。在此色谱条件下，对照品溶液与供试品溶液色谱峰保留时间一致，分离度好，理论板数大于1500(图3)。

图3 高效液相色谱图

2.4.2 溶液制备

精密称取野黄芩苷对照品8 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为80 μg/mL的野黄芩苷对照品溶液。取样品粉末(过三号筛)约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)提取至无色，弃去醚液，药渣挥去石油醚，加甲醇继续提取至无色，转移至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，精密量取25 mL，蒸干，残渣用20%甲醇溶解，并转移至25 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4.3 方法学考察

线性关系考察:称取野黄芩苷对照品10.20 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1.02 g/L的野黄芩苷对照品溶液。精密吸取该对照品溶液0.2，0.5，1.0，1.5，2.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别精密进样10 μL，测定峰面积。以野黄芩苷峰面积(A)为纵坐标、进样质量浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=2.690×103C+9.719×102，r=0.9999(n=5)。结果表明，野黄芩苷进样质量浓度在20.4～204 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样，依法测定。结果峰面积的 RSD为0.5%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于配制后 0，1，2，4，8，12 h时进样测定。结果峰面积的 RSD为1.02%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液6份，分别测定含量。结果平均含量为0.83%，RSD=1.66%(n=6)。

加样回收试验:取已知含量的样品粉末(含量为0.83%)适量，分别精密加入一定量的野黄芩苷对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 野黄芩苷加样回收试验结果(n=6)

2.4.4 样品含量测定

取6批样品，依法测定，按外标法计算含量。结果样品中野黄芩苷的相对百分含量分别为0.83%，0.42%，1.05%，1.69%，1.38%，0.32%。

3 讨论

根据性状、显微特征的描述，能较好地将韩信草与易混淆品种唇形科植物半枝莲(狭叶韩信草 Scutellaria barbata D.Don)相区别[1-2]。化学鉴别是对韩信草中有效成分黄酮类和酚类的鉴别，该法可作为韩信草药材的鉴别项目。薄层色谱鉴别结果表明，5批不同产地的韩信草样品均能检出野黄芩苷，斑点清晰且方法简便、快速，故该法可用作韩信草药材的定性鉴别。

野黄芩苷为韩信草的有效成分，具有清热解毒、扩张心脑血管、改善体内微循环等作用[3]。参考2005年版《中国药典(一部)》半枝莲项下野黄芩苷的测定方法[4]，采用高效液相色谱法测定韩信草中野黄芩苷的含量，该法简便、专属性强，可作为韩信草药材中野黄芩苷的含量测定方法。6批不同产地样品含量差别较大，说明药材生长过程中存在活性成分量的差异，可能与生长年限、生态环境的影响有关。

[1]肖培根.新编中药志(第三卷)[M].北京:化学工业出版社，2002:77.

[2]付桂芳，杨莲菊.半枝莲及其混淆品的鉴定研究[J].中国中药杂志，1997，22(5):262.

[3]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[M].北京:人民卫生出版社，1986:946.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:77.