反相高效液相色谱法测定血府逐瘀口服液中柚皮苷含量

胡安青

（江苏省镇江药品检验所，江苏 镇江 212003）

血府逐瘀口服液[1]由桃仁、红花、枳壳等11种中药组方，功能活血化瘀、行气止痛，柚皮苷为枳壳的主要有效成分。笔者采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定产品中柚皮苷含量，进一步提高了药品质量标准，现报道如下。

1 仪器与试药

AG135型电子天平（瑞士梅特勒）；紫外分光光度计（日本岛津）；Waters2695型高效液相色谱仪，包括 Waters2696型 DAD，empowera工作站（美国Waters）。柚皮苷对照品 （中国药品生物制品检定所，批号为110722-200309）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；血府逐瘀口服液（吉林敖东延边药业股份有限公司，批号分别为0810013，0809002，0804005）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈 - 水 （21 ∶81）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10μL；检测波长：283 nm。理论塔板数7054，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取柚皮苷对照品5.03 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品贮备液（每1 mL含柚皮苷201.2μg），再精密量取贮备液2 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 mL含柚皮苷20.12μg）。取样品5支，精密量取3 mL，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取5次，每次15 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，正丁层蒸干，残渣加甲醇使溶解，并转移至50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀过滤，用微孔滤膜（0.45μm）过滤，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例称取除枳壳外的其他11味药，同法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

标准曲线绘制：分别精密量取柚皮苷对照品贮备液（201.2μg/mL）1，2，3，4，5 mL，置 20 mL 量瓶中，定容，摇匀，在上述色谱条件下进样分析，以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=16.891 X-1.45，r=0.9999（n=5），质量浓度线性范围为10.05～50.25μg/mL。

精密度试验：取柚皮苷对照品溶液，重复进样测定。结果峰面积的 RSD 为0.4% （n=5）。

重现性试验：取样品依法测定。结果平均含量为1.69 mg/支，RSD 为 0.6% （n=5）。

稳定性试验：取同一供试品溶液室温放置10 h，每隔一段时间进样。结果峰面积平均值为1715，RSD为0.3%。

加样回收试验：取6份已知含量的样品（批号为0810013）1.5 mL，精密加入柚皮苷对照品贮备液各4，5，6 mL，分别置50 mL量瓶中，照供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果见表1。

表1 柚皮苷加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取供试品溶液和对照品溶液，各进样10μL，读取峰面积值，按外标法计算含量。结果批号为0810013，070516，070518的样品中柚皮苷含量分别为1.69，1.70，1.67 mg/mL。

3 讨论

通过试验得知柚皮苷在283 nm波长处有较大吸收，其他成分无干扰。曾尝试甲醇 - 醋酸 -水（35 ∶4 ∶65）[2]、乙腈 -水（30 ∶70）为流动相，经比较，选用乙腈-水（21∶81）时峰形及柱效较好。该方法结果可靠、方法简便，为血府逐瘀口服液的质量控制提供了依据。

[1]YBZ1172204，国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：180.