高效液相色谱法测定头孢氨苄缓释片的含量

梁晓燕

（广东省佛山市中医院，广东 佛山 528000）

头孢氨苄为半合成的第一代口服头孢菌素，特点是耐酸、口服吸收良好[1]。2005 年版《中国药典（二部）》[2]收载的头孢氨苄部分制剂的含量测定方法为高效液相色谱法，但头孢氨苄缓释片的含量测定方法仍为滴定法[3]。滴定法操作烦琐、费时，误差比较大，为此笔者采用高效液相色谱法测定头孢氨苄缓释片的含量。

1 仪器与试药

Waters 510型高效液相色谱仪；Mettler AE 240型电子天平。头孢氨苄对照品（中国药品生物制品检定所，批号为130408-200209，含量为94.2%）；头孢氨苄缓释片（某公司，批号分别为080502，080622，080705，规格均为 0.25 g）；磷酸二氢钾及磷酸氢二钾（分析纯，广州化学试剂厂）；甲醇（色谱醇，天津市四友精细化学品有限公司）；水（超纯水）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：大连依利特Hypersil ODS2分析柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：磷酸盐缓冲液 （pH=7.4）-甲醇（75 ∶25）；检测波长：254 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：20μL。理论板数按头孢氨苄峰计算应不低于1500。在此条件下，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取头孢氨苄对照品20 mg，置20 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，得对照品溶液。取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢氨苄50 mg），置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取头孢氨苄对照品溶液（0.973 g/L）0.25，0.50，1.00，2.50，5.00 mL，分别置 10 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图1）。以质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=14482140.22 X+53334.569，r=0.9999（n=5）。结果表明，头孢氨苄质量浓度在0.024～0.487 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取对照品溶液，注入高效液相色谱仪，重复进样5次。结果峰面积平均值为3045471，RSD为0.8%（n=5）。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于制备后的0，2，4，8，24 h时测定。结果表明，供试品溶液在24 h内基本稳定，RSD为0.7%（n=5）。

重复性试验：取同一批样品5份，平行测定。结果含量平均值为104.9%，RSD为0.7%（n=5）。

加样回收试验：取已知含量样品，精密加入头孢氨苄对照品适量，按样品测定方法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以外标法计算含量，并与滴定法结果比较，详见表2。

表2 样品含量测定结果（%，n=3）

3 讨论

溶解时，超声处理有助于提高头孢氨苄溶解速率。本法快速准确、灵敏度高、简单易行、流动相稳定且廉价易得，样品组分保留时间短，分析速度快，重现性、精密度均良好，分离效果佳，赋形剂对含量测定无干扰，符合制剂含量测定要求，故可用于头孢氨苄缓释片的含量测定。

[1]陈新谦，金有豫，汤 光.新编药物学[M].第15版.北京：人民卫生出版社，2003：58.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：151.

[3]WS-086（X-074）-96，中华人民共和国卫生部颁药品标准（试行）[S].