高效液相色谱法测定肩周胶囊中5-O-甲基维斯阿米醇苷含量

凌 希

（重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010）

肩周胶囊是由防风、葛根、甘草等提取制成的中药制剂，具祛风散寒、养血通络的功效，主治肩痹，用于肩关节周围炎、肩臂疼痛等症。为有效控制产品质量，笔者采用高效液相色谱法测定该制剂中5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695/2996型高效液相色谱仪。5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品（中国药品生物制品检定所）；肩周胶囊（市售，批号分别为 090801，090802，090803，090901，090902）；水为纯化水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DiamonsilTMC18柱（200 mm × 4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈为流动相A，0.1%磷酸水溶液为流动相B，按表1比例进行梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：250 nm。理论塔板数按5-O-甲基维斯阿米醇苷峰计算应不低于3000。

表1 流动相梯度洗脱比例（%）

2.2 溶液制备

取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.8 g，精密称定，加甲醇30 mL，超声处理40 min，过滤，甲醇少量分次洗涤残渣，合并滤液及洗涤液，滤液浓缩至约2 mL，加中性氧化铝1.5 g，搅拌均匀，干燥，置中性氧化铝柱（100～200目，1.5 g，内径1 cm）上，用 60 mL水洗脱，水洗液用水饱和的正丁醇提取5次，每次30 mL，合并水饱和的正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.025 mg的溶液，作为对照品溶液。按肩周胶囊制备工艺，制备缺防风的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察：照上述色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪。结果供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液色谱相应位置上有一相同色谱峰，阴性对照品溶液在此保留时间无相应吸收峰，表明阴性对照品对测定无干扰（图 1）。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液 2，4，8，16，20μL，注入液相色谱仪，以5-O-甲基维斯阿米醇苷进样量（μg）为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行回归分析，得回归方程 Y=3158224 X-172655，r=0.9999（n=5）。结果表明5-O-甲基维斯阿米醇苷进样量在0.05～0.50μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，测定5-O-甲基维斯阿米醇苷峰峰面积。结果的 RSD=0.8%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，10，14 h 进样。结果5-O-甲基维斯阿米醇苷峰峰面积值的 RSD=0.5%（n=5），表明供试品溶液在14 h内稳定性良好。

重现性试验：按拟订的含量测定方法，取同一批样品6份，依法测定，以外标法计算含量。结果样品中5-O-甲基维斯阿米醇苷的平均含量为 0.16 mg/粒，RSD=1.20%（n=6）。

加样回收试验：取已知含量的样品6份，分别加入适量对照品溶液，依法测定5-O-甲基维斯阿米醇苷含量，计算回收率，结果见表2。

图1 高效液相色谱图

2.4 样品含量测定

按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定，结果批号为090801，090802，090803，090901，090902 的 5 批样品中，5-O-甲基维斯阿米醇苷含量分别为 0.16，0.14，0.16，0.13，0.13 mg/粒。

3 讨论

参考2005年版《中国药典（一部）》[1]选择流动相，多次试验表明，以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行高效液相色谱法测定，能使样品中5-O-甲基维斯阿米醇苷峰与相邻色谱峰达到基线分离，且分离良好，峰形对称，阴性对照品溶液无干扰，故该高效液相色谱法可用于肩周胶囊的质量控制。

表2 5-O-甲基维斯阿米醇苷加样回收试验结果（n=6）

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：102.