甲型 H1N1流感患者 T细胞亚群的变化特点 (附 67例报告)

张 琦,凌 伟,李 鑫,卢联合,陈志海,李兴旺

2009年3月墨西哥暴发甲型 H1N1流感疫情,随后,全球多个国家出现疫情,2009-06-11世界卫生组织 (WHO)将流感大流行警告级别提高至 6级。我国卫生部也将其纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病,依照甲类传染病采取预防、控制措施。自 2009-05-15起,北京地坛医院开始收治甲型 H1N1流感患者,本研究通过检测部分确诊患者发病期和恢复期 T细胞亚群,并与健康对照者进行比较,初步探讨甲型 H1N1流感患者细胞免疫功能变化特点及其临床指导意见。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2009-05-15—2009-07-15于北京地坛医院确诊的甲型 H1N1流感患者 67例 (研究组),其中男38例,女 29例;年龄 4～60岁,平均 (20±14)岁。诊断标准及治愈标准参照卫生部颁发的 《甲型 H1N1流感诊断治疗方案 2009试行版第一版》[1]及卫生部制定的 《甲型 H1N1流感出院标准》[2]。排除存在血液病史、免疫系统病史及其他影响血液细胞改变疾病者。同时选择健康体检者 40例作为对照组,其中男 23例,女 17例,年龄 23～36岁,平均 (30±4)岁。

1.2 标本采集及病原学检测 采集患者咽拭子标本,送北京市疾病预防控制中心 (CDC)进行病毒核酸检测,甲型 H1N1实验室诊断标准:甲型流感病毒通用 (M基因)阳性,猪H1N1流感病毒通用 (NP基因)阳性,甲型 H1N1流感病毒特异 (HA基因)阳性的标本。

1.3 方法 患者均于发病期和恢复期采血,采用流式细胞仪检测外周血 CD4+、CD8+T淋巴细胞。除外合并其他感染性疾病。治疗上单独应用奥司他韦者 19例,应用奥司他韦加中草药者 11例,单独应用中草药者 10例,未应用奥司他韦或中草药仅对症治疗者 27例。同时检测对照组的外周血 CD4+、CD8+T淋巴细胞,与研究组进行比较。

1.4 统计学方法 应用 SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,计量资料以 (x±s)表示,两样本资料的比较采用 t检验;多个样本均数的比较采用单因素方差分析,各组间分析用 LSD-t检验。以 P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

67例患者均恢复良好。

2.1 甲型 H1N1流感患者发病期、恢复期及对照组 T细胞亚群比较 研究组发病期、恢复期和对照组 CD4+T、CD8+T淋巴细胞绝对数比较,差异均有统计学意义 (P＜0.05)。其中研究组发病期 CD4+T、CD8+T淋巴细胞绝对数明显低于恢复期和对照组,差异有统计学意义 (P＜0.05);恢复期与对照组CD4+T淋巴细胞绝对数间差异无统计学意义 (P＞0.05),恢复期 CD8+T淋巴细胞绝对数多于对照组,差异有统计学意义 (P＜0.05,见表 1)。

2.2 不同治疗方法对甲型 H1N1流感患者 CD4+、CD8

+T淋巴细胞的影响 不同治疗方法的患者治疗前后 CD4+、CD8

+T淋巴细胞绝对数的差值间差异无统计学意义 (P＞0.05,见表2)。

3 讨论

根据目前所掌握的资料,近期发生的甲型 H1N1流感是由变异后的新型甲型 H1N1流感病毒所引起的急性呼吸道传染病。甲型 H1N1流感病毒属于正粘病毒科,甲型流感病毒属,为单股负链 RNA病毒,基因组约为 13.6 kb,由大小不等的 8个独立片段组成[1]。该病毒传染性较强,人群普遍易感。通过飞沫、气溶胶、直接接触或间接接触传播,临床主要表现为流感样症状,少数病例病情重,病情进展迅速,可出现病毒性肺炎,合并呼吸衰竭、多脏器功能损伤,严重者可以导致死亡。由于这种甲型 H1N1流感是一种新发疾病,其特点仍待进一步观察总结。

根据人外周血T淋巴细胞表面分子受体的表达不同,主要分为三大亚群:CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴细胞。CD4+T淋巴细胞主要为辅助性 T细胞 (Th),能促进 B细胞、细胞毒性 T淋巴细胞 (Tc)和其他免疫细胞的增殖及分化,调节体液免疫和细胞免疫;而 CD8+T淋巴细胞主要由细胞毒性 T淋巴细胞组成,是抗病毒感染的主要效应细胞。有资料显示,在抗流感病毒感染的过程中,CD4+T和CD8+T淋巴细胞发挥着重要作用[3-4]。正常情况下,CD4+T和CD8+T淋巴细胞相互作用,保持平衡,维护机体正常的免疫应答。感染甲型 H1N1流感病毒后,由于 CD4+T淋巴细胞和 CD8+T淋巴细胞参与清除病毒的过程,因此在发病期 T细胞亚群数目发生变化。

表 1 甲型 H1N1流感患者发病期、恢复期与正常对照者 T细胞亚群比较(x ±s)Table 1 T lymphocyte subsets comparison among the H1N1 influenza patients in eruption,recovery stages and the healthy controls respectively

表 2 不同治疗方法对CD 4+、CD 8+T淋巴细胞的影响Table 2 Effects of various medical treatments on CD4+、CD8+T lymphocyte

本研究表明甲型 H1N1流感患者在发病期 CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞绝对数均较对照组明显下降,这提示CD+T、CD+T淋巴细胞参与了病毒清除的过程。另外 CD+484

T淋巴细胞可通过分泌 TFN-γ等细胞因子促进 Tc前体细胞分化成Tc[5],CD4+T淋巴细胞的减少使这一作用减弱。而患者在恢复期血 CD4+T和CD8+T淋巴细胞绝对数明显多于发病期,其中 CD4+T淋巴细胞与对照组比较无明显差异,CD8+T淋巴细胞较对照组有所增多,这表明甲型 H1N1流感病毒所致的免疫抑制是一个可逆过程,但 CD8+T淋巴细胞较对照组有所增多的临床意义尚不明确。Powell等[4]的研究结果提示,在抗流感病毒感染的免疫过程中,CD4+T淋巴细胞数量达峰后,CD8+T淋巴细胞数量仍持续增多,并且在数量降低方面比CD4+T淋巴细胞要慢。可能由于 CD4+T和CD8+T淋巴细胞为了执行不同的功能而被不同的机制所调节有关。

治疗方面,本组 67例患者分别行单独应用奥司他韦、奥司他韦加中草药、仅应用中草药及仅对症治疗 (未应用奥司他韦或中草药),各治疗组在 CD4+T、CD8+T淋巴细胞变化方面无明显差异,表明4种治疗方法对 T细胞亚群的影响没有差异。

67例患者均恢复良好,未出现严重并发症。但有资料表明,幼儿、孕妇和伴有免疫缺陷或某些严重疾病的患者有病情危重的倾向[6]。本研究显示,在发病期,患者机体免疫力下降,因此在临床工作中,对于某些特殊人群,应及时应用抗病毒药物,适当选用抗生素预防感染,也可以考虑免疫调节剂的使用,以改善预后。

本研究由于病例有限,尚需更大样本的临床研究来进一步加以证实。

1 卫生部.甲型 H1N1流感诊疗方案 (2009年试行版第一版)[EB/OL].http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohyzs/s3585/200905/40478.htm.

2 卫生部 .甲型 H 1N1流感确诊病例出院标准 [EB/OL].http://www.gov.cn/gzdt/2009-05/15/content_1315931.htm.

3 Brown DM,Román E,Swain SL.CD4T cell responses to influenza infection.Seminars in immunology[J].Semin Immunol,2004,16(3):171-177.

4 Powell TJ,Brown DM,Hollenbaugh JA,et al.CD8+T cells responding to influenza infection reach and persist at higher numbers than CD4+T cells independently of precursor frequency[J].Clinical Immunology,2004,113(1):89-100.

5 金伯泉.细胞和分子免疫学 [M].北京:科学出版社,2001.

6 Novel swine-origin influenza A(H1N1)virus investigation team.Emergence of a novel swine-origin influenza A(H 1N1)virus in humans[J].The New England Journal of Medicine,2009,360:2605-2615.