蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠肾性高血压 IL-6、CRP的影响

尹思源 郭建敏 席新龙 廖慧玲 泸州医学院中西医结合学院 (泸州 646000)

据世界卫生组织预测,至 2020年非传染性疾病将占我国疾病死因的 79%,其中心血管疾病将占首位。高血压是常见的心血管疾病之一,是全球范围内的重大公共卫生问题。近年来,随着分子生物学的快速发展,对高血压病的研究越来越深入,认为炎症因子与高血压病的发生、发展密切相关[1]。本实验通过使用蛭龙活血通瘀胶囊治疗肾性高血压大鼠,观察炎症因子IL-6和 CRP在治疗前后的变化,旨在探讨蛭龙活血通瘀胶囊的降压机制,为进一步阐明高血压的发展与炎性反应的关系提供参考。

1 材料与方法 1.1 实验动物 2月龄健康 SD大鼠80只,雄性,体重(200±30)g,由华西医学动物中心提供,均为一级合格动物,合格证号为:080415。

1.2 实验药物 蛭龙活血通瘀胶囊主要由水蛭、地龙、黄芪、大血藤、桂枝等组成,每粒 0.4g(相当于生药 2.6g),由泸州医学院附属中医医院制剂室提供。临用时用温开水配成80mg/m L、 160mg/m L、 320mg/m L的混悬液。批号:20070528。

1.3 肾性高血压模型建立 取 SD雄性大鼠 80只,适应环境饲养 1周后,采用 ZH-HX-Z无创血压测量系统测每只大鼠的基础血压 ,禁食不饮水 24h之后,留 10只大鼠作为正常对照组,另 70只大鼠在室温下进行手术,具体步骤:2%巴比妥钠45mg/kg经腹腔注射麻醉大鼠,仰卧固定于手术台上,腹部备皮,常规消毒后,盖上孔巾沿腹正中线切开,打开腹腔,小心钝性分离出左肾动脉,然后穿入无菌的线丝,把直径为 0.25mm的针灸针与肾动脉血管长轴平行放置,用无菌线丝扎紧肾动脉和针灸针然后抽出针灸针,结果造成肾动脉狭窄,对侧肾脏和动脉不触及,然后逐层关闭腹腔,术后 3d每天腹腔注射青霉素3×104U/d,预防感染,共 3d;假手术组方法同模型组 ,但只分离左肾动脉,不结扎。根据肾性高血压模型成功的判断标准,于2周后测量大鼠血压,每次 3次求其平均值,以收缩压高于基础血压 20mm Hg,且收缩压高于 115mmHg者被认为造模成功[2]。

1.4 动物分组与给药 选取 2月龄健康雄性 SD大鼠 80只,随机分为正常组 10只与手术组 70只,手术组采用结扎左侧肾动脉的方法建立肾性高血压大鼠模型,其中假手术组 10只,只分离左侧肾动脉不结扎,两周后采用尾套法测定大鼠血压,将手术后符合高血压标准的大鼠 40只随机分为四组 ,即模型组,高剂量组,中剂量组,低剂量组,每组 10只。假手术组与正常对照组每组 10只。普通饲养 4周后,蛭龙活血通瘀胶囊组根据高、中、低剂量分别给予 1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg灌胃,1次 /d,共 8周。模型组、假手术组和正常对照组大鼠给予等容积的生理盐水。每周称大鼠体重 1次,根据体重随时调整给药量。

1.5 观察指标 1.5.1 大鼠血压的测定:用小型电吹风适当的给大鼠尾部加热,以扩张局部血管,加热程度视大鼠尾巴皮肤变为微红,采用 ZH-HX-Z无创血压测量系统 (安徽淮北正华生物仪器设备有限公司)测每只大鼠的血压,每次测 3次求其平均值作为该样本的血压。

1.5.2 血清 IL-6及 CRP的检测:最后一次灌胃结束后1h,称体重后,麻醉大鼠,开胸,下腔静脉取血约 3～5m L,静置4h,以 1500r/m in离心 10min,制备血清 ,放置在-70℃冰箱中保存备用。1个月内采用 ELISA法测定血清 IL-6含量,试剂盒购于美国 ADL公司。采用放射免疫法测定血清 CRP含量,试剂盒购于中国人民解放军总医院。

2 结 果 2.1 对大鼠肾性高血压血压的影响 见表1。各组大鼠的基础血压之间无明显的统计学意义(P＞0.05)。手术后 2周血压,模型组、高剂量组、中剂量组及低剂量组血压较正常组均明显偏高(P＜0.05),且模型组和各用药组血压均超过 115mm Hg,与基础血压的差值均大于 20mm Hg,根据判断标准[2],说明用药组及模型组的肾性高血压造模成功。假手术组较正常组无明显变化(P＞0.05),表明手术对血压无明显的影响。

治疗 8周后血压,与模型组比较,高剂量组、中剂量组血压较模型组明显降低有统计学意义(P＜0.05),低剂量组较模型组降低不明显无统计学意义(P＞0.05);高剂量组、中剂量组与低剂量组比较有明显的统计学意义(P＜0.05),高剂量组与中剂量组之间比较无明显的统计学意义(P＞0.05)。

表1 各组大鼠收缩压的变化(mm Hg,±s)

表1 各组大鼠收缩压的变化(mm Hg,±s)

注:△与正常组比较 P＜0.05;▲与模型组比较 P＜0.05;◇与假手术组比较 P＜0.05;◆与低剂量组比较 P＜0.05。

组 别n剂量(g/kg)基础血压(mm Hg)手术后两周血压(mm Hg)治疗八周后血压(mm Hg)正 常组10--91.8± 3.3589.9± 2.5990± 2.92假手术组10--93.4± 2.6192.4± 4.6292.4± 3.44模型组10--94.1±6.28130.4±8.72△142.7±8.67△◇高剂量组101.694.6± 7.17129± 7.35△102± 6.28△▲◇◆中剂量组100.890.0± 3.71125± 7.23△102± 5.41△▲◇◆低剂量组100.494.0± 4.52128.2± 9.59△138± 5.63△◇

表2 各组大鼠血清 CRP、IL-6水平的变化±s)

表2 各组大鼠血清 CRP、IL-6水平的变化±s)

注:△与正常组比较 P＜0.05;▲与模型组比较 P＜0.05;◇与假手术组比较 P＜0.05;◆与低剂量比较 P＜0.05。

组 别n剂量(g/Kg)CRP(ng/m l)IL-6(ng/m l)正常组10-4.12± 0.091.03±0.10假手术组10-4.23± 0.071.25±0.09模型组10-7.80±0.68△◇8.53±2.00△◇高剂量组10 1.65.92±0.29▲△◇◆4.26± 0.63▲△◇◆中剂量组10 0.86.12±0.18▲△◇◆4.50± 0.66▲△◇◆低剂量组10 0.47.68± 0.96▲△7.36± 0.35△▲

2.2 对大鼠肾性高血压 IL-6和 CRP的影响 见表2。模型组与正常组、假手术组比较 ,血清中 IL-6、CRP浓度均明显增高有统计学意义(P＜0.05),高剂量组、中剂量组及低剂量组与模型组比较,高剂量组与中剂量组明显降低有统计学意义(P＜0.05),低剂量组降低不明显无统计学意义 (P＞0.05),高剂量组、中剂量组与低剂量组比较降低有统计学意义(P＜0.05),高剂量组与中剂量组之间比较无明显的统计学意义(P＞0.05)。

3 讨 论 高血压的发病机制及病理过程至今尚未完全阐明,近年来学术界认为内皮细胞功能异常在其发病中起着重要的作用。血管壁增厚和血管内皮细胞受损造成血管硬化和周围血管阻力增加,是高血压发生、发展的重要原因。细胞因子是机体免疫细胞和非免疫细胞合成的分泌调节细胞生理功能的小分子多肽,具有高效性、多向性、内生性等特点。包括白介素(IL)、C反应蛋白(CRP)等。据报道,细胞因子在内皮细胞增殖调控中起着重要的作用,他们可能参与了高血压的发生和发展的过程。

IL-6是由活化的 T细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞等产生的,是一种调节免疫应答、急性期反应和造血作用的多肽递质。Cymerys等[3]认为高血压存在急性期反应,引起高血压急性期反应最重要的是 IL-6。IL-6能够诱导纤维蛋白原启动凝血因子 ,使血管炎症部位的纤维母细胞增生,胶原沉积;它还有较强的血小板活化因子的特性,通过激活血小板促进血小板聚集,导致血管内皮细胞损害。IL-6和 TNF显著增加高血压患者红细胞内 Ca2+依赖的 K+外流和细胞膜对 Ca2+通透性,导致Ca2+内流增加,平滑肌收缩,血压升高。薛冰等[4]的研究表明高血压患者血管内皮的炎症反应可以产生大量的 TNF和血小板衍化生长因子,TN F和 PDGF可诱导成纤维细胞、单核细胞产生 IL-6,而 IL-6又能促使平滑肌细胞和成纤维细胞增殖,导致产生大量的 PDGF,最终导致周围血管阻力增高,引起高血压。由此可见,IL-6可通过多种途径参与高血压病的发生发展。CRP是一种炎症反应时相蛋白,血液中的 CRP主要由肝脏合成,IL-1、IL-6和 TN F-α能刺激肝脏和上皮细胞合成和分泌包括 CRP在内的急性时相蛋白 ,其中 IL-6是刺激 CRP产生的最主要的细胞因子。Sung等[5]认为 CRP是高血压发生与发展的一种独立危险因素。 CRP损伤血管内皮细胞,内皮细胞释放的NO及前列腺素减少,使其血管舒张、抗血栓、抗病原的特性丧失,这些丧失在高血压的病理过程中起重要作用[6]。炎症介质可以激活内皮细胞、巨噬细胞和多形核白细胞释放内皮素-1及内皮素-1免疫样激活物 ,使血管收缩,血压升高[7]。高浓度的血清 CRP可以促进血管内皮细胞增生、迁移、动脉内膜增厚,促进动脉粥样硬化的形成发展,导致血管重构阻力增加[8]。高浓度CRP直接参与局部和全身炎症反应损伤血管内皮细胞,使血管对内皮依赖性舒血管物质的反应性减弱 ,血管阻力增加[9]。

祖国医学无“高血压”病名,根据高血压病患者临床多见头痛、眩晕等症状,把高血压归属于“头痛”“眩晕”等证范畴。历代医家均认为瘀血在高血压病中作用的重要性,病认为瘀血贯穿在整个病变过程中。我们结合临床和大量的文献研究,认为“脉络瘀阻、血行郁滞”在高血压病的发病过程中占有重要的作用,贯穿于高血压病全过程。程志清等[10]报道在高血压病的治疗中运用活血化瘀法有如下重要作用:通过改善血液粘稠度与微循环血液的浓、粘、聚、凝状态,使外周阻力减小,血流动力学平衡得以正常而使血压下降;改善血管内皮功能,调节血管紧张素II与一氧化氮水平来达到扩张血管、防止内膜增生降低血压的目的。本研究中蛭龙活血通瘀胶囊是由水蛭、黄芪、地龙、大血藤等组成。针对瘀血这一基本病机,以水蛭活血化瘀,黄芪益气为君,以地龙活血化瘀、通行经络,大血藤通络、祛风,佐以温药桂枝,温通经脉,体现“血得温则行,得寒则凝”之意,诸药同用,共奏活血、益气、通络之功。现代药理学研究认为:水蛭具有抗凝,抗血栓,降低血压、血脂以及改善血流动力学的作用,以及降低炎性细胞因子 TNF-α及 IL-1β的作用;黄芪具有抗血小板聚集,降低血压以及降低高血压患者血清中 hs-CRP、TNF-α、IL-1β及 IL-6水平的作用;地龙具有抗血栓、溶血栓作用,且具有降压作用;大血藤具有抗凝作用,抗菌消炎作用。本实验研究发现,蛭龙活血通瘀胶囊能降低大鼠肾性高血压血压及IL-6和CRP水平,从而有效的防止血管内皮细胞受损,阻止血液的高凝状态的发生,这可能是蛭龙活血通瘀胶囊防治高血压病的机制之一,其可能与中药的多靶点、多层次、多途径作用有关,其具体的机制有待进一步研究。

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