病理组织切片裂隙补救方法的技术改良

戴炜力，王群姬

(1.浙江省肿瘤医院 病理科，浙江 杭州 310022；2.温州医学院附属第一医院 病理科，浙江温州 325000)

在常规石蜡切片过程中，我们常常会把大小不等的标本进行混合固定脱水处理，由此难免会出现标本处理不均的现象：或大的组织处理不足，或小的组织处理过度，使得部分组织变脆、变硬。组织切片常常表现为有边缘不齐的“龟壳状”（见图1）和“百叶窗样”裂隙。究其原因往往与组织脆性增加有关，若将此蜡块再行低温冷冻后切片，此种裂隙则更为明显和严重。为了补救这类问题蜡块，我们通过与兄弟单位的技术交流及自身的实践探索，发现适当使用氨水能有效软化组织，降低组织脆性，减少裂隙出现，且更有利于蜡块切出完好的蜡片。现报告如下。

1 材料、方法和结果

1.1 材料 选取我院2008年行常规石蜡制片中组织蜡片出现裂隙的蜡块358只，其中包括淋巴结、脾脏、肝脏、肾脏、子宫、乳腺等手术切取标本，同时含有内镜、穿刺活检标本。试剂：纯氨水（上海三鹰化学试剂有限公司生产）500 mL。

1.2 方法 ①将此类容易产生裂隙的组织蜡块放入冷水中（水温0～5 ℃）约10 min。②将蜡块放上切片机小心粗修至暴露整个组织切面，然后细切蜡片10余张（此蜡片弃之不用），再将粗切把手逆时针转动1/4～1/2圈以退刀。③用脱脂棉球蘸取足量的纯氨水，覆盖在细切后的组织面上约10 s，再行细切，直至有组织蜡片顺利切出，取前面3～5张展于裱片机内。④待蜡片充分展平后迅速裱于载玻片上。⑤常规烤片，染色，封固。

1.3 结果 用此类方法处理组织，切片平整，结构完好，除“龟壳状”裂纹尚存外（但明显缩小）其余裂隙均消失，组织染色无明显差异（见图2）。

图1 标本处理过度，组织变脆，变硬，切片呈“龟壳状”裂纹

图2 经氨水处理再行切片，组织结构完好，“龟壳状”裂纹明显缩小，切片染色艳丽

2 讨论

常规制片中出现裂隙是我们常规技术工作中经常碰到的问题，此类问题切片不仅影响切片质量，有时还会导致病理诊断的困难，更有甚者连蜡片都很难切出。马恒辉等[1]提出导致切片裂隙有诸多原因，在实际操作中，组织处理因素是首要因素，由于甲醛、乙醇、二甲苯三者对组织均有不同程度的硬化作用，其过度处理必然导致组织弹性降低，表现为各种间质成分（特别是胶原、网状纤维）张力下降，脆性增加，发生断裂而呈“龟壳状”裂纹；或者尚未发生断裂，但组织过度冷冻后切片，切出的蜡片在室温中迅速膨胀，而呈“百叶窗样”裂隙。当然诸如子宫、乳腺等组织纤维含量极为丰富，过硬的组织蜡块接触刀锋产生震动，也会出现波纹裂隙。

鉴于此，传统病理技术的做法是在蜡块暴露面哈气或擦少量温水以求软化组织或降低组织与室内的温差，结果往往是组织切片过厚或难以切出蜡片。马恒辉等[3]用 5 mmol/L的盐酸（HCl）浸泡来处理有裂隙的组织，此法虽能有效防止裂隙，但较费时且组织膨胀较为明显，核着色困难，切片红染[2]。而本资料介绍的氨水分子式为NH4OH，能解离为NH3和H2O，使之达到一种动态平衡。用氨水处理与上述方法相比有以下优点：①氨水是一种很好的软化剂，此法源于工业上压缩木质技术用氨水来软化木材[3]，可软化组织间质的各种纤维，增加弹性和张力。②氨水解离出的NH3分子量小于HCl，更具穿透力，所以用时极短，10 s左右就深达20～30μm。加之此法无需取下蜡块，方便快捷。③氨水解离时将吸收周围的热能，在不降低蜡块表面温度的情况下，减少了蜡块切面与周围的温差，在防止蜡块膨胀的同时又能顺利切出蜡片。④用氨水来处理蜡块表面时，NH3穿透组织表面，为了达到氨水的平衡，也会带进一定量的H2O，使得原本处理过度的组织得到一定的恢复。⑤用氨水处理的蜡块，对硬化的子宫和乳腺等组织也有明显的软化作用，故也能防止波纹裂隙的产生。

应用氨水时，也应注意以下几项：①粗修蜡块后，宜细切蜡片10余张并丢弃，以防后继细切蜡片产生空洞。②因氨水处理后对蜡块作用只有深达表面20～30μm，所以在此步骤之前必须退刀，细切出的蜡片也只能取前面3～5张。③蜡片置入裱片机内，待充分展平后方可裱贴于载玻片，以防产生褶皱。④尽管此法用时极短，但蜡片仍存留少量氨水，因此染色前建议用流水先进行冲洗。

[1]马恒辉,章如松.组织切片裂隙产生的原因与对策[J].诊断病理学杂志,2007,14(6):474.

[2]马恒辉,周晓军.HE染色常见问题与对策[J].临床与实践病理学杂志,2008,24(4):478-481.

[3]方桂珍.木材功能性改良[M[.北京:化工工业出版社,2007:128-131.