球孢白僵菌MZ041016菌株对平菇厉眼蕈蚊的毒力

袁盛勇, 孔 琼, 张宏瑞, 李正跃, 张雪梅, 李雄强, 李文伟

(1.云南红河学院农学系,蒙自 661100; 2.云南红河学院生物系,蒙自 661100;3.云南农业大学植保学院,昆明 650201)

昆虫病原真菌是一类通过菌丝穿透寄主体壁侵染昆虫的病原微生物,对于防治刺吸式口器害虫,如蚜虫、叶蝉、飞虱等具有独到之处,因此研究和开发针对刺吸式口器害虫的真菌制剂受到国内外的普遍关注[1]。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是目前研究和应用最多的一种重要昆虫病原真菌,寄主范围广,可侵染15个目149个科的700余种昆虫和螨类,致病性强,适应性强[2],对控制害虫严重发生和减少环境污染起到了很大的作用。

平菇厉眼蕈蚊(Lycoriella pleuroti Yang et Zhang)隶属于双翅目,长角亚目,眼蕈蚊科,厉眼蕈蚊属,是国内食用菌的优势危害种,俗称菌蚊、菌蛆。该虫能为害平菇、猴头菇、茶树菇、灵芝等多种食用菌和药用菌[3]。成虫常在培养料和出菇期的菌袋口端及子实体上爬行、交尾、产卵。幼虫潜入培养料及子实体中,直接取食食用菌的菌丝和培养料的原基或钻蛀幼嫩菇体,造成退菌、原基消失,培养料松散、逐渐变成黄褐色,菇蕾萎缩死亡、菌柄折断倒伏、耳片缺刻和菇体孔洞,严重时子实体完全失去商品价值[4]。关于应用球孢白僵菌防治平菇厉眼蕈蚊的研究尚未见报道,本研究以能侵染平菇厉眼蕈蚊的球孢白僵菌为材料,研究其对平菇厉眼蕈蚊的防治效果,以达到用生物农药代替化学农药防治平菇厉眼蕈蚊的目的。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌种

球孢白僵菌MZ041016菌株保存在红河学院农学系实验室,经复壮和扩繁之后供试验用。

1.1.2 供试昆虫

从平菇栽培基地采集成虫,在实验室菌袋上饲养得到供试虫态。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种的扩繁、分生孢子液的制备

采用马铃薯琼脂培养基(PDA)在温度25℃下进行培养,培养10d收集分生孢子。

1.2.2 分生孢子液的制备

用50mL无菌水+0.05%吐温20作为润湿剂振荡脱溶固体培养基上的孢子,并以双层丝袜过滤,除去菌丝和杂质。用血球计数板在显微镜下检查计算孢子数,测出浓度,再用无菌水分别稀释成所需的梯度浓度。

1.2.3 菌株对平菇厉眼蕈蚊幼虫的毒力测定

将球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子稀释为孢子含量3.0×104～3.0×108个/mL5个处理浓度,每个处理设3个重复,并用0.05%吐温20+无菌水作对照,每个浓度30头幼虫,浸入20～30mL孢子悬液中30s后迅速取出,用干滤纸吸去留在虫体上的悬浮液,置于盛有黄豆粉的培养皿中,用纱布封口,置于25℃,相对湿度80%的人工气候培养箱中,每天观察记录化蛹和死亡数量,并将虫尸取出,连续观察7d。

1.2.4 菌株对平菇厉眼蕈蚊成虫的毒力测定

球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子液稀释为3.0×104～3.0×108个/mL5个处理浓度,每个处理设3个重复,并用0.05%吐温20+无菌水作对照,采用喷雾法接种。在每个容量为300mL瓶壁有孔的矿泉水瓶内放入30头成虫。接种时先将成虫置于瓶内,用M301414型喉头喷雾器均匀喷施4mL分生孢子液,用纱布封口,置于25℃、相对湿度为80%的人工气候培养箱中。每天观察记录其死亡虫数,并将虫尸取出。

1.3 数据统计方法

数据采用统计软件SPSS10处理,根据校正死亡率进行概率值转换后,对剂量作线性回归分析,建立直线回归模型,从而分别估计剂量效应 LC50、LT50和相关系数(R)等参数。

2 结果与分析

2.1 球孢白僵菌MZ041016菌株不同浓度孢子液对平菇厉眼蕈蚊成虫的毒力

毒力测定结果(表 1～3)表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子悬浮液浓度为3.6×108个/mL时对平菇厉眼蕈蚊成虫毒力最强,第7天校正死亡率86.72%,其次是3.6×107个/mL浓度下,其校正死亡率为74.79%,毒力最差为3.6×104个/mL浓度下,校正死亡率为25.02%。在3.6×108个/mL浓度下第2天成虫出现死亡,随着时间推移和浓度增加,校正死亡率呈逐渐增加趋势。对平菇厉眼蕈蚊成虫毒力测定中第4～7天的致死中浓度(LC50)依次为2.988×108、3.55×107、3.78×106个/mL和2.319×105个/mL。可看出随着孢子浓度的增加,平菇厉眼蕈蚊成虫的 LT50逐渐减小,3.6×105～3.6×108个/mL浓度下的LT50依次为8.57、6.14、5.18d和4.28d。

表1 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同浓度对平菇厉眼蕈蚊成虫的毒力

表2 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子对平菇厉眼蕈蚊成虫的致死中浓度

表3 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子对平菇厉眼蕈蚊成虫的致死中时

2.2 球孢白僵菌MZ041016菌株不同浓度孢子液对平菇厉眼蕈蚊幼虫的毒力

表1、表2和表3统计结果表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子悬浮液3.6×108个/mL浓度下对平菇厉眼蕈蚊幼虫毒力最强,第7天校正死亡率为87.69%,其次是3.6×107个/mL浓度下,校正死亡率为80.46%,毒力最差为3.6×104个/mL浓度下的31.11%。在不同浓度下第2天幼虫开始出现死亡,随着时间的推移和浓度增加,校正死亡率呈逐渐增加趋势。对平菇厉眼蕈蚊幼虫毒力测定中第 4～7天的致死中浓度(LC50)分别为3.467×108、2.853×107、2.841 ×106个/mL 和3.082×105个/mL,随时间推移,致死中浓度逐渐减小。随着分生孢子浓度的增加,平菇厉眼蕈蚊幼虫致死中时间 LT50逐渐减小,3.6×105～3.6×108个/mL浓度下的LT50依次为8.09、6.03、4.96d和4.53d。

表4 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同浓度对平菇厉眼蕈蚊幼虫的毒力

表5 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子对平菇厉眼蕈蚊幼虫的致死中浓度

表6 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子对平菇厉眼蕈蚊幼虫的致死中时

3 讨论

利用昆虫病原真菌防治平菇厉眼蕈蚊的报道很少,试验应用球孢白僵菌MZ041016菌株不同浓度分生孢子液对平菇厉眼蕈蚊成虫和幼虫进行毒力测定,结果表明,两个虫态均能感病,其中幼虫较成虫敏感,这可能与低龄幼虫的各种防御功能发育不完善,因而抵抗力较差有关。使用不同孢子浓度处理平菇厉眼蕈蚊成虫和幼虫的结果表明,3.6×108个/mL是较为理想的浓度。环境条件对该菌的毒力影响很大,其中温度和湿度是两个非常重要的因素,适当的温度和湿度是该菌防治平菇厉眼蕈蚊的关键因素,在菇房中应用还待进一步深入研究。

[1]李涛,刘映红,张永军.球孢白僵菌对烟蚜茧蜂寄生行为的影响[J].植物保护学报,2007,34(4)：401-404.

[2]李荣森,罗绍彬.微生物防治害虫[M].北京：科学出版社,1983.

[3]何嘉,张陶,李正跃.平菇眼蕈蚊的生物学特性及其防治[J].中国食用菌,2004,24(4)：52-54.

[4]沈登荣,张宏瑞,张陶.我国食用菌眼蕈蚊的研究现状[J].中国食用菌,2008,27(1)：48-50.