HPLC法测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量

宫淑枝 贡庆欣

1 吉林省通化市人民医院（134000）

2 吉林省通化市食品药品检验所（134000）

乙肝解毒胶囊[1]是由黄柏、拳参、黄芩、大黄、胡黄连、土茯苓、绵马贯众、黑矾等8味中药组成的复方制剂，用于乙型肝炎，辨证属于肝胆湿热内蕴等症[1]。该品种为中复方制剂，已在卫生部药品标准中药成方制剂第一册收载，但原标准中无定量指标。本文采用HPLC法对该品种黄芩中的黄芩苷进行了含量测定，结果操作简便、方法准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪；日本岛津UV-1700型紫外分光光度计。黄芩苷对照品（由中国药品生物制品检验所提供）批号：110715-200514，规格：供含量测定用；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：大连依利特C18（4.6×250mm，5µm）；流动相：甲醇-0.5%磷酸溶液（47∶53）为流动相[2]；检测波长为280nm；流速：0.8mL/min；柱温：室温。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于5000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品适量，加稀乙醇制成每1mL含55µg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，称定重量，加热回流3h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 阴性对照试验

为进一步考察试验的合理性，取不含黄芩的阴性对照样品。依正文所述方法进行测定。结果，阴性样品色谱在与黄芩苷峰相应的保留时间附近无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的。

2.4 线性关系考察

精密称取黄芩苷对照品适量，加稀乙醇溶解并稀释，制得浓度为54.0µg/mL的对照品溶液，分别精密吸取2、6、10、14、18µL测定（平行两次），以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果黄芩苷在0.1080～0.9720µg范围内，呈良好的线性关系，回归方程：Y=4054030.556 x＋8000.700 (r=1.0000) 。

2.5 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液10µL，注入液相色谱仪，连续进样6次，黄芩苷峰面积的平均值为2226028，其RSD=0.45%。

2.6 稳定性试验

分别精密吸取同一供试品溶液10µL，于0、2、4、8、12h注入液相色谱仪，黄芩苷峰面积的平均值为2227671，其RSD=0.39%。

2.7 重复性试验

取同一供试品（040603）6份，按2.2.2的方法制备成供试品溶液，分别测定，结果黄芩苷的平均含量为0.59mg/粒，其RSD=0.46%。

2.8 回收率试验

精密称取已知含量的供试品（长春晨光，批号：040603，含量为0.59mg/粒）6份，分别精密加入对照品1.431mg，依法测定结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.9 样品含量测定

取3批样品，按2.2.2方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，结果见表2。

3 讨 论

3.1 测定波长的选择

表2 样品中黄芩苷含量测定结果（n=4）

取黄芩苷对照品的甲醇溶液，经UV-260紫外分光光度计200～400nm范围内测定黄芩苷在278.5nm波长处，有最大吸收，参照《中国药典》2005年版一部“黄芩”含量测定项下测定黄芩苷所采用的波长，故选择280nm为本实验的测试波长。

3.2 提取方法的考察

取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取两份，每份约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，称定重量，一份超声处理30min，另一份加热回流30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，按正文测定法测定，结果见表3。

表3 提取方法考察表

根据上表中黄芩苷含量的检测结果，确定样品的提取方法为加热回流。

3.3 提取时间的考察

取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取4份，每份约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，称定重量，分别加热回流1、2、3、4h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，按正文的方法测定，结果见表5。

表4 提取时间考察表

根据上表中黄芩苷含量的检测结果，确定样品的提取时间为3h。

[1]卫生部药品标准.中药成方制剂[S].第一册,1989.

[2]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:211-212.