乌药不同炮制品中乌药内酯含量测定

左美玲 欧阳荣* 皮晓华

1 湖南省长沙市第四人民医院（410006）

2 湖南中医药大学第一附属医院（410007）

乌药始载于《本草拾遗》，《中国药典》一部各版均有收载。其来源为樟科植物乌药Lindera aggregata（Sims）Kosterm.干燥块根[1]。湖南是乌药的道地产区，亦是全国的主产区。其炮制方法古代文献载有十多种，现代典籍载有醋制、盐润、麸炒、酒制、酒润后麸炒[2]，但均论述不详。现代文献也未见炮制品的系统研究报道。为了探讨乌药不同炮制品中主要化学成分含量差异，笔者对乌药不同炮制品中乌药内酯进行了含量测定，现将实验报道如下。

1 仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪：Agilent1100系列四元梯度泵、Agilent1100手动进样器、 Agilent1100系列二极管阵列检测器、Agilent1100工作站（Agilent公司）；超声波清洗器（昆山市淀山湖检测仪器厂）、万分之一电子分析天平（Adventurer）。

甲醇（色谱纯，天津市密欧化学试剂有限公司，20080129）；乙腈（色谱纯，天津市密欧化学试剂开发中心，20051012）；其余试剂均为分析纯，水为注射用水。

对照品：乌药内酯对照品（批号08031505，供含量测定用）购自上海顺勃生物工程技术（云南）公司。

乌药药材采于湖南省邵东以及安徽等地，经湖南中医药大学第一附属医院药检室鉴定为樟科植物乌药Lindera strychnifolia（Sieb．ef Zucc．）Vill．的干燥块根。

2 炮制方法

乌药片：取原药材，除去杂质，洗净，浸至四五成干，润透，横切圆形薄片，干燥即成。

醋炒乌药：取乌药片，用陈醋拌匀，稍闷，置锅内文火炒干，取出摊凉即可。

麸炒乌药：将炒锅烧热，撒上麦麸，待冒烟时投入乌药片，炒至黄色时，取出，筛去麦麸，放凉即成。

盐炒乌药：取乌药片，用盐水拌匀，稍闷，置锅内文火炒干，取出放凉即成[2]。

3 含量测定[3]

3.1 色谱条件

色谱柱为Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-乙腈-水（35∶25∶40，v/v）；检测波长：235nm；柱温：40 ℃；流速：1mL/min。

3.2 对照品的制备

精密称取乌药内酯适量，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液（每1mL中含乌药内酯28μg）。

3.3 样品制备

取各供试品，将其粉碎成细分，取1g，精密称定，置50mL锥形瓶中，加甲醇50mL，称重，超声15min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，用0.45µm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，备用。

3.4 标准曲线的制备

分别精密吸取混合对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、20.0µL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值Y为纵坐标，以对照品的进样质量X（mg）为横坐标进行线性回归，乌药内酯的回归方程为：Y=1316.7X-4.6615，r=0.9992；线性范围0.06～0.56μg。

3.5 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10μL，连续进样6次，测定乌药内酯的峰面积，RSD（%）为1.49%。表明仪器性能良好。

3.6 稳定性试验

分别精密吸取同一供试品溶液10μL，于0、1、2、4、8、24h进样，测定乌药内酯的峰面积，RSD（%）1.89%。结果表明，供试品溶液在24h内稳定。

3.7 重复性试验

分别取同一批号样品粉末0.5g 6份，精密称定，按3.3项下方法制备供试品溶液，测定含量，平均含量为3.60mg/g、RSD为1.87%。表明本方法重复性良好。

3.8 加样回收率试验

精密称定已知含量的样品粉末（含量为3.595mg/g）约0.5g，共6份，置于50mL容量瓶中，分别精密加入一定量的对照品，加甲醇50mL，精密称重，按3.3项下操作，分别制得供试液，以上述色谱条件测定含量，计算加样回收率，平均回收率为99.13%、RSD为1.22%。结果见表1。

表1 乌药内酯回收率实验结果（n=6）

3.9 样品的测定

取乌药不同炮制品粗粉各1g，按3.3项下方法制得供试品试液，以上述色谱条件测定。测定结果见表2。

表2 乌药供试品的含量测定

4 讨 论

4.1 实验结果显示，乌药内酯的含量从高到低依次为醋炒乌药片＞乌药片＞盐炒乌药片＞麸炒乌药片。以醋制品中乌药内酯含量最高，其原理有待进一步探讨。

4.2 笔者考察了温度对乌药内酯的影响，结果表明乌药内酯的热稳定性较好。本实验方法色谱条件柱效高，分离度大，精密度高，重现性好。建议下版中国药典收载乌药不同炮制品，并制订其相应的含量测定方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京:化学工业出版社,2005:53.

[2]王孝涛,叶定江.历代中药炮制法汇典(古代)[M]. 南昌:江西科技出版社,1986:111.

[3]程显隆,魏锋,冯玉飞,等.1ip-HPLC法测定乌药中乌药内酯和乌药内酯的含量[J].药物分析杂志,2003,23(3):225-227.