毛细管GC法测定格列齐特片和格列齐特片(Ⅱ)的含量

韩学静 王熳 杜增辉

格列齐特片和格列齐特片(Ⅱ)是临床常用的第二代磺脲类降血糖药，作用较强，能降低血小板的聚集和粘附力，有助于防治糖尿病微血管病变。两种药物的质量标准分别收载于国家药品标准［1］和《中国药典》2005年版二部［2］，其含量测定均采用高氯酸电位滴定法，提取过程有异，但格列齐特片(Ⅱ)提取步骤更为繁琐费时，操作时加三氯甲烷振摇提取30 min，用G4垂熔玻璃漏斗滤过，滤液与洗液在40℃以下减压蒸发至干，此过程人为因素造成的误差很大。格列齐特的含量测定还有HPLC法等［3］，尚未见GC法的报道。本研究参考文献［4］建了毛细管GC法，以正十四烷为内标，并与高氯酸电位滴定法比较。本法准确、灵敏、快速，环境污染小，成本低，可用于这两种药物的含量测定。

1 仪器与试药

6890型全自动气相色谱仪(Agilent公司)。

格列齐特对照品(中国药品生物制品检定所，批号100269-200402)，正十四烷(内标，Sigma公司，GC纯度≥99.0%)，甲醇为色谱纯。格列齐特片(石家庄四药有限公司提供，批号:100209、100210、100211);格列齐特片(Ⅱ)(石家庄四药有限公司提供，批号:100201、100202、100203;石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号:100301)。

2 方法与结果

2.1 溶液配制 内标溶液:精密称取正十四烷适量，加甲醇溶解并稀释成0.3mg/ml的内标溶液。

对照品贮备液:精密称取格列齐特对照品150mg，置100 ml量瓶中，加内标溶液超声溶解并用内标溶液定容，摇匀即得。

供试品溶液:精密称取格列齐特片和格列齐特片(Ⅱ)细粉适量(相当于格列齐特30mg)，置50 ml量瓶中，加内标溶液25 ml超声使溶解并用内标溶液定容，摇匀，滤过，即得。

2.2 色谱条件 色谱柱DB-624毛细管柱(0.53mm×60 m×3.0 μm);柱温200℃;进样口温度220℃;检测器 FID，温度250℃;载气，氮气，流速 10.0 ml/min;进样量 1 μl，分流比18∶1。

取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液进样分析，结果显示空白溶液不干扰测定(见图1)。格列齐特与内标峰分离度为15.5，理论板数均大于18000。

图1 典型气相色谱图

2.3 线性试验 精密量取对照品贮备液1、2.5、4 ml，置10 ml量瓶中，以及3、4 ml，置25 ml量瓶中，加内标溶液定容，摇匀。将上述系列浓度溶液，分别进样测定。以格列齐特浓度c对格列齐特与内标峰面积比值R进行线性回归，得回归方程R=1.251c-0.024，r=0.9995。表明格列齐特在0.15～1.5mg/ml浓度范围内线性关系良好。检测限为0.5 ng。

2.4 回收率试验 取已知含量的格列齐特片(批号:100209)和格列齐特片(Ⅱ)(批号:100301)细粉(相当于格列齐特7.5mg)各6份，置25 ml量瓶中，分别精密加入对照品贮备液4、5、6 ml，加内标溶液10 ml超声使溶解并用内标溶液定容，摇匀，过滤。进样测定，以标准曲线法计算回收率。格列齐特片平均加样回收率为99.49%(n=6)，RSD为0.65%;格列齐特片(Ⅱ)平均加样回收率为99.61%(n=6)，RSD为0.52%。

2.5 精密度与稳定性试验 取对照品溶液，连续进样6次，RSD为0.88%。

取同批片剂样品，按“2.1”项下方法制得供试品溶液，共6份，分别进样，RSD为0.40%。

取片剂供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、6、8、24 h，进样测定，RSD为0.93%。

2.6 样品测定 分别取对照品溶液(含格列齐特为0.6mg/ml)和供试品溶液，进样测定，按内标法以峰面积计算样品含量，并与现行方法结果比较，见表1。

表1 样品测定结果(标示量%)

3 讨论

本研究选择与格列齐特(C15H21N3O3S)碳数相近的长链烷烃正十四烷(C14H3O)为内标，峰形对称，保留时间4.902 min，色谱峰响应值与出峰位置都较适中。正十四烷与甲醇互溶，格列齐特在甲醇中略溶，对照品贮备液时经超声后均能完全溶解，故选择甲醇作溶剂，且不干扰测定。

曾选用HP-5(0.32mm×30 m×0.25 μm)弱极性毛细管柱，但内标峰拖尾严重，且格列齐特与溶剂峰分离欠佳;改用中极性DB-624毛细管柱，内标峰形对称(拖尾因子1.04)。格列齐特的熔点为162℃ ～166℃，DB-624色谱柱的最高使用温度260℃，本试验的柱温为200℃，可有效避免柱流失。调整分流比为18∶1，峰形良好，灵敏度符合要求。

［1］国家食品药品监督管理局.WS1-(X-103)-95Z-2006.

［2］中国药典.二部［S］.2005:595-596.

［3］丁洪亮，张根元，陶伟博，等.高效液相色谱法测定格列齐特缓释片的含量.中国医院药学杂志，2004，24(3):156-157.

［4］景秀娟，韩学静，张兰桐，等.间尼索地平的毛细管GC-电子捕获检测器法测定.中国医药工业杂志，2008，39(2):125-126.