盐酸特比奈芬软膏含量反相HPLC法测定

王思斯 朱玲 杨云霞

(四川大学基础与法医学院药理教研室,四川 成都 610041)

特比萘芬是一种丙烯酮类广谱、高效抗真菌药。具有抑菌和杀菌作用,其作用机制为选择性抑制真菌角鲨烯环氧化酶,使真菌细胞膜形成受阻,起到抑菌的作用。本文用反相HPLC方法测定其软膏的含量,以检测其质量稳定性等指标。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

Water 1525型高效液相色谱仪;Water 2487型双波长紫外检测器;Water 2487型自动进样器。乙晴ACN(色谱纯,Korea SK);异丙醇、磷酸二氢钾均为分析纯,盐酸特比奈芬对照品(Pharmcia),盐酸特比奈芬软膏：每 g含量为 10mg。

1.2 样品含量测定方法

1.2.1 样品含量测定色谱条件 色谱柱：Capcell-pak C18(5μ m,4.6×150mm,Shiseido);流动相 ：0.05M KH2PO4/乙晴=(30/70);检测波长为 225nm;进样量 10μ l;流速 1.0ml◦min-1;柱温 25℃。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 标准溶液配制 精密称取盐酸特比奈芬标准品适量,按照倍量稀释的方法用异丙醇溶液稀释,浓度分别为0.1,1,5,10,25,50,100,200mg◦100ml-1,作为标准溶液。

1.2.2.2 对照品溶液(STD)的配制 精密称取盐酸特比奈芬对照品10mg,加异丙醇至100ml,作为对照品溶液。

1.2.2.3 供试样品溶液(SA)的配制 取1g盐酸特比奈芬软膏,加异丙醇至100ml即得,进样前用微孔滤膜(0.45μ m)滤过。

1.2.3 线性关系测定 用UV2000型自动进样器,注入液相色谱仪,进样量10μ l,记录色谱图。以盐酸特比奈芬峰面积为纵坐标,药物浓度为横坐标绘制标准曲线,并对所得数据进行回归分析。

1.2.4 仪器精密度试验 取同一标准溶液按上述色谱条件连续进样6次,计算峰面积的相对标准偏差(RSD%=S/X)。

1.2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,间隔2h进样一次,共计8h,计算所测峰面积的相对标准偏差(RSD%)。

1.2.6 回收率试验 取盐酸特比奈芬对照品溶液,进样6次,测定峰面积,计算回收率以及相对标准偏差。

1.2.7 样品含量测定 精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μ l,注入液相色谱仪,记录色谱图,用峰面积计算含量并进行含量分析。

2 结果

2.1 线性关系测定结果

盐酸特比奈芬色谱图见图1。以盐酸特比奈芬峰面积为纵坐标,药物浓度为横坐标绘制标准曲线,并对所得数据进行回归分析,得回归方程与浓度的线性关系为：y=12686x-15626,r=0.9999。结果表明,盐酸特比奈芬分离好,在9min时出峰,峰形对称、无拖尾。盐酸特比奈芬的进样浓度在0.1～200mg◦100ml-1范围内,峰面积与浓度呈现良好的线性关系。

图1 盐酸特比奈芬反相HPLC色谱图

2.2 仪器精密度试验 同一标准溶液按上述色谱条件连续进样6次,峰面积的相对标准偏差RSD%为0.51%,结果表明仪器具有良好的精密度。

2.3 稳定性试验 同一供试品溶液,间隔2h进样一次,共计8h,所测峰面积的相对标准偏差为0.46%,结果表明该溶液在9h内具有良好稳定性。

2.4 回收率试验 盐酸特比奈芬对照品溶液,进样6次的峰面积、回收率以及RSD%结果见表1。结果表明盐酸特比奈芬在该色谱条件下回收率良好。

2.5 样品含量测定 盐酸特比奈芬软膏色谱图显示在9min时出峰,峰形对称、无拖尾。用峰面积计算含量并进行含量分析。表2为样品含量测定结果,显示样品含量测定平均为100.75%(100.23%～101.02%),符合含量规定(95%～105%)。

表1 盐酸特比奈芬回收率试验测定结果

表2 盐酸特比奈芬样品含量测定

3 讨论

特比萘芬是一种丙烯酮类广谱、高效抗真菌药。具有抑菌和杀菌作用,其作用机制为选择性抑制真菌角鲨烯环氧化酶,使真菌细胞膜形成受阻,起到抑菌的作用[1]。特比奈芬独特的杀菌作用机制和能在皮肤角质层内长时间保持较高治疗浓度的特点决定了特比奈芬短期治疗可以到达理想的真菌治愈率,同时可以提高患者的依从性,减少复发。本文用反相HPLC方法测定其软膏的含量,考察盐酸特比萘芬软膏的质量标准[2-4]。

盐酸特比萘芬软膏的含量测定采用外标法,可达到满足药品含量测定的精确要求。我们的测定方法显示盐酸特比萘芬的进样浓度在 0.1～200mg◦100ml-1范围内,峰面积与浓度呈现良好的线性关系,可以满足灵敏度的要求。

1 苏爱莲.特比萘芬乳膏与维A酸胶囊联合治疗马拉色菌毛囊炎[J].山东医学高等专科学校学报,2009,31(5)：389-391.

2 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].

3 Nevenka KE,Jerej K,M arink DK.The development of the method for the determination of terbinafine in cat's plasma and hair[J].Pflugers Arch,2000,440(5 Suppl)：R168-R170.

4 Kovarik JM,Mueller EA,Zehender H,et al.Multiple-dose pharmacokinetics and distribution in tissue of terbinafine and metabolites[J].Antimicrob Agents Chemother,1995,39(12)：2738-2741.